【农业行业标准(NY)】 甘薯脱毒种薯

ISC65.020.20
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1200—2006
甘薯脱毒种薯
Certified virus-free seed
sweet potatoes
2006-12-06发布
2007-02-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准的附录A附录B、附录C、附录D为规范性附录，附录E为资料性附录，本标准中华人民共和国农业部提山并归川。NY/T 1200-2006
本标准起草单位：农业部署类产品质量监督检验测试中心（张家口），中国农业大学。本标摊主耍起克人：尹江、刘庆昌、王晓朗、姚、冯恢。1
1范围
甘薯脱毒种薯
NY/T1200—2006
木标准规定了甘酱脱毒种薯（苗)的要求、试验方法、判定规则、收获、包装、标签、运输、购，本标准适用于甘馨脱毒试管苗及脱寿种薯（苗）繁育、生产，销售过程中的质量鉴定：2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注月期的引用文件，其随后所有的修改单（个包括勘误的内穿）或修订版均不造用丁本标推，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本适用于本标准。CB4406种薯
（B7413廿薯种苗产地检疫规程
NY/T402脱毒甘薯种薯(萨)病毒检测技术规程3术语和定义
下列术语和定义适用」不标推。3.1
脱毒试管苗virus-freetubeseedling成用尘尖分生组织培养技术获得，经检测确认不带甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）甘幕潜隐病寄(SPLV)、甘馨腿绿斑病毒(SPCFV)的试管苗3.2
脱毒种薯苗】virus-free sccd（seedling】从育种家种了繁殖脱毒试管苗开始，经逐代繁殖增如种（苗）数量的种落生产体系生产出来的种薯(苗)。
社：分为育种家种子、原原种原种、生产开种四个级别。3.2.1
育种家种子breeder'sseed
山育种者直接生产和掌握的原始种子，其有该品种的典型性利遗传稳定性，纯度100%，不带病毒和共他病虫害,产量及其他主要性状衍合推广时的原有水平。3.2.2
原原种pre-elitc
用育种家种子或典型品种的脱毒试管苗在防虫网案、温室条件下生产的符合质量标准的种署（凸）。3.2.3
原种elite
用原原种作种置，在良好隔离条件下生产的符合质量标雅的种（苗）。3.2.4
生产用种certified seed
用原种作种萼，在良好隔离条件下牛产的符合质量标雅的种薯（苗）。NY/T1200-2006
病毒病株允许率
脱毒种薯()繁殖用中病毒病株的比率，3.4
真菌、细菌病株充许率
脱毒种萼(齿)繁殖用中真菌细菌病株的比率。3.5
虫害株充许率
脱莓种(苗)繁殖出中虫宵株的比率：3.6
混杂植株允许率
脱毒种薯(苗)繁殖用中混杂的其他甘薯品种植株的比率：3.7
脱毒种薯块根整齐度
单块质量在100g一500g的口募种薯块根质量占块根总质量的比率。3.8
有缺陷薯
机械损伤、凸鼠伤、畸形块根质量占块根总质量的比率，3.9
批块根中除只有种用价的块根外，其地物质称为亲质。包含浮上、决根上所沾的泥上、无种用价值的块根，以及其他有机、无机质质量。3.10
本标准中指因根腐病、软腐病、镰刀菌干腐癌造成的腐烂外,其他原因造或的腐烂。4控制和汰除的病害
4.1控制的病害
可以逼过控制病害的发生程度以达到脱毒种曾(苗)质量要求的病害。4.1.1 甘害病毒病
甘薯羽状斑驳病毒(sweet potatn feathery nmottle vinus,SPFMV)甘薯潜隐病毒(swect potato latcnt virus .SPLV)。百薯褪绿斑病靠(3weet pouata chlorouic lecks virus,SPCFV)，4.1.2黑斑病(Black rot病原Ceratucystis jimbriuu Ell.&Halst.)。4.1.3抢i病(Scab,病原Sphaceoma batutas Sawada)4.1.4 萎割病[Stem rot,Fusarium wilt; 病原 Fusarium nrysporum f.sp.batatas (Wollenweber) Snyderet Hanstnl.
4.1.5茎线虫病(StcmncniatodeBrwnring;病原DitylenchusdestructorThome)。4.,2汰除病虫害
不能在达到质量要求的脱毒种薯(曲)上发生的病虫害。4.2.1根结线病[Rovt-lsrot nernelwdle,病原 Melaiedogye incognitu （Kofoid & Whiw) Chitwoodl。4.2.2细菌性萎需病(甘臀瘟)(Bacterial wilt,病原Psendomonas snlanacearumE.F.Sm.)2
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4.2.3根腐病[Roat rot,病原 Fusariurnt mlant (Mart. )Sacc,f. sp. balatas Me Clur!]4.2.4甘酱蚁象[Weevil,Cala5formicarius(Fabririus)]5要求
各级别脱毒种薯(前)繁缝凹斗带病植株充许率成符合表1要求。表1各级别脱毒种萼(苗)繁殖田中带病植株的允许率器级别
育种家种了
分歧期按验
封垄前捡验
原原种
生产用种
育种家种了
原原种
牛产用种
育种家种子
收获前2
围检验
生产用种
注：种出质量应符合第-次检验质量标，5.2
根腐病
报轿缓典痛
各级别脱率种薯块根质量指标应符合表2要求，病害及混杂袜【%】
紫缓虫痴
甘嫩象
懿制病
熙墟瑞
表2各级别脱毒种薯（苗)块根质量指标充许率(%)
育种家种子
薯块整齐度
有缺著
教腾疾
镶力菌干蕨病和腐烂
线虫病
根结线虫病
廿薯蚁象
黑斑病
原原种
湛杂楂糍
生产月种
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6试验方法
6.1脱毒试管苗的检验
6.1.1酶联免疫检测法
目测淘汰弱苗和显症苗。当单株的试管苗展开叶达6片以上时进行检测，按株取其无中下部叶片用于酶联免疫检测，剩余植株部分继代培养。用醉联免疫检测法初检后，淘汰显阴性反应的单株。检测方法见附录A。
6.1.2指示植物检测确认
过酶联免疫检测法检测的健康株继续护繁，经指示植物检测，指示植物不显症的小能确认为脱毒试管雷：检测方法见附录B。经检测确认健康脱毒试管苗继续扩繁。6.1.3脱毒试管苗的种性鉴定
将脱毒试管苗种植于防虫网率内，每株系3株，对照原品种的特征特性，剔除变异株系利混杂株系，收获时检验块根质量，与原品种性状一致的株系进行护大繁殖。6.1.4扩繁苗的检验
随机抽取1%2%脱毒试管苗再次检测，经酶联免疫检测法检测溯汰阳性反放株后，再经指示植物检测确无症状后，方可用丁扩大繁殖。检测方法成符合附录A和附录乃的要求。6.2脱毒种薯(苗)的检验
6.2.1脱毒种薯（苗)植株的检验6.2.1.1真细菌病害和线虫病害、甘蚁象的检测在种植脱素种薯（)的间进行质量检验。检测方法应符台附录的要求。
6.2.1.2病毒病的检测经过真细菌病害利绒虫病害、日蚁象检测后的出块.采用酶联免疫检测法或指示植物检测法进行病毒检测。检测方法应符合附录A和附录B的要求。6.2.2田抽样方法
6.2.2.1脊种家种子、原原种利原种抽样于分枝期、时垄前、收获前2周,在日测全用基础上,采用随机取样法，灿样数量为：0.1.hm2以下检验2点，每点100株；0.11hm2.1hm2检验5点，每点100株超过「hm2面积，划山另检验区，按本标准规定而积取样：病毒检测株取签蔓上、[，下部叶片各1片。24h内检测。
6.2.2.2牛产用种抽样于时望前、收获前2周，在日测全Ⅲ的基础上，采用随机取样法，0.1hm以下检验2点，每点100株：0.11hm2.1hm2检验5点，每点10X)株；1.1hm2~5hm检验10点，每点100株；超出5hnm而积，划出丹一检验区，按本标准规定面积取样，敢样方法问原种，6.2.2.3病毒捡测进行病毒检测时，原原种每5株混样；原种或生产用补混合后二次抑样，随視抽取10%-50%的混合样品检测，抽取样品最低数量为100株，6.2.3脱毒种薯（苗)的块根质量检验6.2.3.1经过植株检验的种薯(苗)必须进行映根质量检验。检测方法成符合附录D的要求。6.2.3.2块根质检验拍样方法根据脱毒种幕块根的不同存放方式，采用分层设点墩伴或随机取样。抽样数量见表3。
表3脱毒种薯块根抽样数量标准表种贵
10 o00 kg
>10 000 kg
注：不足抽举最低数量的全部作为混合样品，4
抽榜百分率（%）
拍样最低数量
100)kg
将第一次抛取的样品混合后进行二次独样，随机扯取10%的混合样品检测。7判定规则
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7.1脱毒种薯（苗)分级以繁殖田播种的种薯级别、带病植株比率、混杂植株比率为定级标准。7.2病毒病蔓割病、黑斑病、整线出病、疮痴病以及混杂植株比率六项质量指标，任何一颈不符合原来级别质量标准但又高」下一级别质量标准者，判定结果均按降低一级定级别。只要检出根腐病、根结线虫病、甘酱瘟、甘蘑蚊象，唧不能作为种薯。7.3经出间植株质最检验合格后，其块根质量还应符合各级别脱毒种落块根质量指标。8收获
当地温稳定在15么在右时，适时收获。副除病、烂和无种用价值的块根。不同品种单收单放，严禁混杂。
9包装、标签
9.1包装
9.1.1用清洁的、通气性好的、装和运输中不易破损的材料包装。9.1.2每包装的质量以适宜装卸和运愉为位。9.2甘著脱毒种薯标签
9.2.1标签用材为具韧性、不易破损的材料制造，不同级别种薯标签可用不同额色区分。9.2.2标签要印刷有品种、级别、质量、生产单位、联系方式等信息。9:2.3将标签正面朝外固定F色装上。10运输
10.1不问品种、不同级别的种薯一同运输时严防混杂，包装外无法确认的种薯一律作杂薯处理。10.2防止机械碰伤，防雨，防10℃以下冷害。11贮藏
11.1贮戴前剔除病、烂薯。
11.2标准质量包装以品种单独存放，堆放高度以能通风透气和不致压坏种薯为宜，单贮藏量较大时，可在薯堆中留山巷道或放置风筒，11.3入率20d内要通风排湿、降温，温度降至13了~-15r，相对湿度95%以下。可以在刚人时实行高温愈合处理，防治软腐病利熙斑病。11.4入客20日后保持等温12%~14℃，不低于10℃，相对湿度保持85%~90%。可以在薯堆上益草布等吸湿物。
11.5藏期间防治鼠害。
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A1试剂
附录A
{规范性附录】
斑点酶联免疫检测法(DOT一EL ISA)所用化学试剂为分析纯级规格，用水为蒸馏水：A1.1三羟甲基氨基甲烷(TBS)(pH7.5)Tris Base
绿化钠(AaCr)
氮钠NN
溶于1990ml.蒸留水中,用盘酸(37%）谢pH至7.5,定容至2000mlA1.2洗涤缓冲液(T-IIS)
1.0 mI,吐温-20(Tween-20)于 2 000 mL TBS 。A1.3抽提缓冲液
亚硫酸钠(NazSO:)0.2溶」:TBS 中,定容至 100 rmLeA1.4封闭缓冲液（现用现配）
脱睛奶粉
摔通X-100(1ritonX-100)
先将脱脂奶粉溶」少量TBSt，内用1BS定容至25ml，加入Trimn×100混合均匀A1.5抗体稀释缓冲液
脱脂好粉
先将脱脂奶粉溶少量1BS中，节用IBS定容至50mlA1.6底物缓冲液(pl9.5)bZxz.net
Tris Rase
氯化钳(NaCl）
氯化镁(MgCl2-610)
叠钝(NN）
溶于 450 mL蒸馏水中,川浓盐浚调 pI1至 9.5,定穿至 500 mL。A1.7硝基蓝四唑盐(NBF)和5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸酯(BCIP)储备液NBT储备液：
70%V,N-一甲基甲避
混合均勾，4让避光保件
BCIP储备液：
70%N,N-一甲基甲酰胺
混合均勾，4避光保存。
A1.8底物溶液（现用现配
底物缓冲
NBT储备液
RCIP储务液
75 jμL
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先将NBT储备液溶于25mI.底物缓冲液巾，再逐滴如人BCIP储备液，边加边振摇混匀。A2样品制备
将待测叶片用清水清洗千净，从每一样品叶片上各取一直径约1cm圆片，效入样品袋，加人3mT.抛提缓冲液充分研磨，4静置30inin--40min,取澄清汁液点样，样品为块根时，催牙处理后取幼芽、叶制样。
A3操作步骤
A3.1点样
将打好方格的硝化纤维素膜用TS缓冲液处珊后放在洁净的滤纸上，每个样品各吸取17江上清液滴在膜上方格的止中，十燥15min~30min。同时设阳性，阴性和空白对照，可根据需要设胃重复。A3.2封闭
将干燥后的膜浸泡在封闭绥冲液中，室温下播床振荡(50) r/min)1 h。A3.3 孵育第一抗体
将膜置于用抗体缓冲液稀释至工作浓度的抗血清中，室温下摇床振菌(50 r/mi)过夜。A3.4洗涤
用洗涤缓冰液洗膜3次，每次摇床振激（1.00r/min)3minA3.5孵育第二抗体
将膜宵丁用抗体缓冲液稀释率工作浓度的海标抗体中，室温下摇床振荡（50r/tnin)1h。A3.6洗涤
洗涤4次，方汰同A3.4。
A3.7显色
将膜置JNBT/BCIP底物溶液中，空温下摇床振荡（50r/min）孵育30min，A3.8终止反应
弃去底物溶液并用蒸留水洗膜3次，每次摇床振菌（100r/min）3min。A3.9阳性判断
晾下后观察颜色反成，山现蓝紫色颜色反应的样品为阳性。NY/T1200—2006
B1材料准备
附录B
（规范性附录）
指示植物检测法
B1.1将待检脱毒苗或种苗盆栽于防虫措施良好的温室中。B1.2盆播指示植物-
巴牵牛《Ipomcea减tosce），花贫直径不小」10crn，每待检样品皮阳性对照各需尘长健壮巴西牵牛5株，
B2嫁接
B21凹西牵牛牛长出1~2片真叶时嫁接，以待检样品鉴蔓为接穗，巴西牵牛为砧本。将待检样品茎墓中下部茎段切成3段一5段，每个接穗带个单芽及叶片，叶后将底端削成锲形，插入巴西牵牛砧木划口内，封口膜扎紧。嫁接片白天保持气温26℃~32℃，相对滋度80%~90%，适当遮荫，嫁接成活,给予充足光解。
B2.2阳性判断
嫁接后2周3周显症，在所有嫁接指示植物只要有一株表现典型症状即为阳性。症状为：SPFMV
羽状斑驳
叶豚变黄
叶片褪绿斑
病害名称
蒸蕊病
（瘟）
白蘑疮痴
开蔓勃病
一粮钻綫皮病，
附录C
【规范性附录
表C.1甘薯种薯苗)田间带病植株症状株
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轻洗辑决乳汁明显减少，有苦只咪，点后不烂，外表从育苗到结薯均能发病。晴大中午，病齿顶部川片症状常不明显，仅薯带附近导熙梅色或虑根不同程要垂，茎是只现黑褐色水烂状，维管束从下而上黄粥但条纹状，严重时，茎内全部魔烂，仅残留纤维。成株度疾变，剂开树创面为分散的褐色小斑点或黄褐策深褐包斑快，织切面从联头或自居振始，维管束品黄褐色发病，叶色暗淡，无光泽,兹出现水溃状离点，呈黑褐条纹状；可挤出乳状菌胀。重症转换，格块垒黑褐包腐色，剖视维管束，竭色条纹丹于拉易说皮，望下纤维烂或端腐丝，有然液状或淡货色函孩，鼻味很套害块上形成照色近圆形病斑，病部稽凹陷，轮廓滑茎基部形成黑褐色被形或网形病斑，稍凹陷，病晰，组织坚实，如用刀横割病斑部，可现游皮下的牌肉前初期有求色霉层.后变为黑色粉状物，炫斑逐渐呈青褐色或黑褐色，深0.5cm-2m，有芒味和虽烈的大，重者基部企部变黑.枯死
奥味。疾部水栓化，坚硬，于离，在适而条件下，病密中叶片脊彼呈木牛形；贼萍假缩：然要和时柄生为无数凸以粗粒的病斑，病先端便化僵直不再伏地婉樊；顶孝受害病斑初为透明深红色，打大后逐变黑褐色而枯死；新带利劲叶不能长大，整个顶悄收翁僵硬而直达，衰现祖糙必廉脸状
动苗、叶脉问叶肉变，茎内维管束变媽色。溺混时，病部产生户色至淡红色的层，轻者分使增生和央会长黑色刺毛状物一子囊壳
个表现症状
绝管束变想，惯切薯块带部，可见揭也圆环形斑点节问缩短，举基人，出现青革，表度似裂呈丝状。暴严電时，「都茎枯死.而葬块并不质烂，口任士表袖病植株发生全株性粘菱、死广，通上部升片自下雨上山很多幼荧变黄脱落，落最后开裂
根系腾烂，多从不定根的尖端或巾部开始变马，述断而上募延报※部位1--2个叶节，形成黑褐色病斑。病斑表皮纵裂，写病称地下根茎大部分变黑，地殷不结酱，轻病株结薯崎形，呈大肠状或荫卢状。土部茎菌缩煜，分枝少或无分校，巡成独杆凹，叶片发表皮松款，表面小病斑，用厂拉就下来，本向料肉深贫、反卷、叶变小，组织硬化,并丘发舱，川片户下而上人干拮脱落，株大显现菩开花，常造成大片死苗.重者全部死广
根系形成绳装状，仙地下部多牛浮状，三根纵生，纠根上有米粒大小的根结，有的成中，开根结，可见至数个雌虫
免裂，块根畸，褐色纵裂口
捧根型：粗 1cm-2线根型：只有线状牛募根，不膨大成薯块前期：发病的出苗稀、矮小、发黄，剖视茎基部，内」心型，菌种享带病，先块根纵剂南内部呈稀察有褐色空，剪断后不流或很少流白浆。后期侵人部状自色溅道，后期中下伴随其他杂菌形成褐色和间的位表皮裂成小口，能部呈褐色下腐状，剪断后尤白浆。褐色糖道。有时内部显毁坏，但外表接近健着落总症状：卡莹基部髓部先白色下腐，出渐变褐色，严裂皮型：轻病肉退不易看出，开始外皮秘色，不久变重刚基部觉短、叶，其至主蔓粘死。根部症状：恨部青，有的硝川陷，有的有小裂口，皮下组织变褐，最后皮友皮坏裂
他是暗紫色，并多龟裂，内望松白相间的于腐9
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病害名称
表.1（续）
开始时仪挚块变软，水溃状，发籍，以后署块衰规民出茂够的茵丝利孢「囊，丁指一触，即流出节黄色汁被，其芳替泄体，如敏饮牛寄牛物人侵则变成露酸或茉,以后干缩成块。病荫侵人吋出一点或条点横向发展
荣块上先产生黑褐色州陷小既点，后扩展成呵形正路斑，表面有粉红或白色等状物，最后尊块下腐成揭色块
外露的块根动茎叶被哨食，常使拍株变黄，重者死快根变，器褐色，木质化，钻波口和孔道，伴有臭味
，造成国缺苗
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