【商检行业标准(SN)】 进出口动物源性食品中氨苯砜及其代谢物残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2219—2008
进出口动物源性食品中氨苯砜及其代谢产物残留量检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of dapsone and its metabolite residuesin foodstuffs of animal origin for import and cxport-LC/MS/MS nethod
2008-11-18发布
中华人民共和利国
国家质量监督检验检疫总局
2009-06-01实施
本标准的附录A和附录B为资料性附录。言
本标出国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2219—2008
本标准起草单位：中华人民共和国深别出人境检验检疫局，中华人民共和国重庆山人境检验检疫局中华人民共和国安徽出入境检验检疫励。本标滩主要起节天：店振峰、华红慧、赵风茹、工国民、朱妙翊、林黎、张建莹、侯乐锡、欧阳娜、尚陈费：
本标滩系首次发布的山人境检验检疫行业标推：1范围
进出口动物源性食品中氨苯及其代谢产物残留量检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
SN/T2219-—2008
本标准规定了动物源性食品中氨苯砜及其代谢产物N-乙酰氨苯讽残留量的制样、液相色谱-质谱，质谱测定和确证方法
本标准适用于肌肉、内脏、色肉、牛奶和鸡蛋等动物源性食品中氨苯及其代谢产物N乙酰氨苯矾残留的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条凡是注H期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注期日期前引用文件，其最新版本适用于本标准。ISO3696.1987MOD)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--20083方法提要
试样中的氨茉砜及其代谢产物N-乙酰氨苯砜残留用碱性乙睛溶液提取，经固相萃取柱净化，浓缩、定容后用液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，内标法定量4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/工4.1乙睛，色谱纯。
4.2甲醇.色谱纯。
4.3乙脂+水.5+95（体积比）。
4.4乙一水，15+85（体积比）
4.5氨水，25%。
4.61%氨水的乙晴溶液：准确吸取103L氨水（4.5），转移人1000mL容量瓶，用乙睛定容至刻度。混合均勾。
4.7氨水十乙睛，1十9（体积比），准确量取100mL氨水（4.5）与900mL乙腈，混合均匀4.8正已烷，
4.9盐酸。
4.10盐酸溶液（0.1mol/1.）：准确量取17ml.盐酸，用水稀释至1000mL4.11
标准物质：氮苯矾，Dapsonc，CASNo.80-08-0，纯度大于等于99%N-乙酰氨苯砜，NAcetylDapsone.CASNo.565-20-8，纯度大于等于98%：d：-氢砜，DapsoneDeuterated，纯度大于等于98%4.12标准溶液
4.12.1.标准储备溶液：分别称量经折算相当于5mig（精确到0.1nmig）的氢苯砜和N-乙酰氨苯.用甲醇溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，得质量浓度为500mg/L的标推储备溶液，此储备液可在20℃以下避光存放12个月。
SN/T 2219—2008
4.12.2内标储备溶液：称虽经折算相当于 1 trg(精确到9.1 rng)的 ds-氨苯砜,用印醇济解并定容至10 mL棕色容最瓶中，得质量浓度为109鸡/工的标准储备溶液：此储备液川布20.以下避光存放12个川4、12.3标准工作溶液：标准T.作溶液根据需要使用前用究白样品基质溶液配制.4.12.4内标工作溶液将内标储备溶液用中醇稀释为100μ/1。此「作济液可在一20以下避光行微3个月
4.13固格萃取（SPE)柱：(asisHLB,60mg.3ml..或相当。使用前依次用3InL甲醇和3mI.水活化：4.14固H苯取(SPF)杜：0asisMcX,60 mg,3 ml,或相当。使用前依次饮月3 ml.甲醇和 3ml-盐酸溶液（4.10)活化。
4.15氮气：纯度人于等于99.99%5仪器与设备
5．1液和色语串联四极杆质谱仪：配电喷雾离了源。5.2分析天+：感量0.！mg，0.01g5.3旋涡混合器，
5.4离心机：5000r/min。
5.5同相举瑕真空装置
5.6机械空泵。
5.7纠织捣碎机：
5.8均质器。
5.9超声波仪，
5.10吹氮浓缩仪。
6样品制备与保存
6.1制样要求
制样操作划程巾应防正样品受到污染惑发生戏残留物含是的变化：6.2动物肌肉、肝脏、肾脏和鱼肉从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500名·用组织揭碎机充分捣碎购匀，均分成两份分别装人洁净容器中、密站.并标明标记，于一18℃以下冷冻存放，6.3牛奶样品
从所取全部样品中取出有代表性样品约00，充分混勺动分成两份，分别装人活净器中，密均，并标明标记,于·-18 以下冷冻存效。6.4鸡蛋样品
从所全部样品中取山有代装性样品约00-去除蛋壳将蛋英和蛋广充分混匀.均分成两份，分别装人沿净容器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻行敬。7测定步骤
7.1样品提取
7. 1. 1肌肉,鱼肉,肝脏和肾脏
称取均质试样5g（精研到0.01g），置于50 mI具螺旋流聚内烯离心管先加人内标溶液（4.12.4))uL.然后川人15ml。%氨水的乙膊游液（4.6）。肌肉和危肉样品均质提取2min:肝和肾糖样品旋讽混介」min,超市提取5 min：3 00 r/rit 离心5 trin,收集上清液于一H刻度离心管中，离心后的裁渣用约5mI.1兴氮水的乙睛辫液（1.6）复上述提取步骤1次，合并清液：定容到30 ml.混匀，加人 15 znL 正凹烷，旋涡混合 1 tiin.3 000 r/min 离心5 min,充去正亡烷层。取6mL2
提取液于 45 ℃下吹氮浓缩至！ml.以下。而水定容至10 ml,泥勾：7. 1.2牛奶和鸡蛋
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称坡均质试样5 g(精确到0. 01 各),置」50 ml.具刻度螺旋盖聚内烯离心管中，先加人内标游液(12,50.然后用1%氮求胞乙晴溶液（.6家容至30m..然后加人1mL止已烧：旋满退台1 min.超声提取5 min,3 000 r/min 离心5 min,弃去正已烷层，取 6 ml.乙层于 45 C下吹氮浓缩至IrL以下，用水容至 l0 mL;混勾，7.2固相萃取净化
将10 Inl.提取液过 HLB固相萃取柱(4.13),流速榨制在约 1滴/s。用 3 nL 乙睛-水(4. 3)淋洗粒了：以3mL乙睛洗脱.洗脱液用F净的15ml.具刻度试管收集：用0.1mol/L盐酸溶液（4.10)稀释至 i5 rmL
将上述溶液继续过MCX相举取杠（4.14）.流速控制在约1滴/s。依次以3ml.0.1mol/L盐酸溶液(4.10)和 3 m 甲醇淋洗杜子,淋洗液完通过小杜后抽直空 min 以上。以 6 ml.氮水 乙晴(4.7)洗脱。在15 {下氮气琰至近干,用之腈-水(4.)定容至 1 ml,混勾。济液以0.45 μrm 滤膜过滤、滤液可直接供液相色谱质谱/质谱仪测定7.3测定
7.3.1液相色谱条件
色谱柱：YMc-Pack Pro Ce:3m,100) mmx2,0 mm(内径）,或和准：a
b）流动：乙腩「水.梯度洗脱(梯度时间表见表1)：表1液相色谱的梯度洗脱条件
时间/min
流速：300L/min：
杜温：30℃；
进样量：151.。
质谱条件
流速//rtin
离子化模式：电质雾电离止离子模式(ESI-）：b)
质谱扫描方式：多反应监測(MRM)：分辨率：单位分辨率：
H他参考质谱条件参见附录A：
7.3.3液相色谱-质谱/质谱仪测定乙猜/
根据样液中被测化合物的舍量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准1.作溶被和样液中待测化合物的响应值均应在仪器的检测线性范用内。对标准1.作济液和样液等体积参差进样测定：氮苯和尔代氨笨砜的参考保留时间为.1min;N-乙氛苯砜的参考保留时间为5. 3 rmil:标准品色谱图参见附录3 中图. ]
8 结果计算与表述
8.1定性测定
衔种被测组分选择1个将离子，个以！子离千，在相同实验条件F.样品中待测物质的保留时间5
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与基质标准溶液的保留时间偏差在土5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围则可判定为样品中存在对应的待测物
2定性时相对离子丰度的最大允许偏差表2
相对离子丰度/%
充许的相对偏差/买
8.2定量测定
>20-50
10~-20
在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线·用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，林可酰胺类芯物标准品的多反应监测色谱图参见附录B中的图B.1。8.3结果计算与表述
采用内标法定量，按式（1）订算氢柔砜或N-乙酰氨矾的残留量。AXVXI
式中：
样晶中待测组分残留量，单位为微克每000
克（μg/kg）：
标准工作溶液中药物的浓度，单位为微克每升（ug/L）：-样液中内标物的浓度
单位为微克每升L
样液中药物的峰面积
标准工作溶液中内标物的峰面积样品溶液最终定容体积，单位为毫升（ml标准工作溶液中内标物的浓度，单位为样液中内标物的峰面和
标准工作溶液中药物的峰面积：最终样液代表的试样质量，单立为克（宫）9测定低限与回收率
测定低限
散克每并（u层）
对于动物肌肉、内脏、鱼肉、牛奶和鸡蛋，氨苯砜和N-酰氨本碱的测定低限均为0.5g/kg。9.2回收率
氨茉砜和n-乙酰氨苯矾的回收率表3氨苯和N-乙酰氨苯砜残留的添加回收率试验数据物质种类
氨苯砜
N-乙酰氨苯钢
添加浓度/
(μg/kg)
92.0--110
90.0--110
87.0--110
87.2--1c9
回收率/%
91.7--108
79.5~-108
85.1--108
（1）
92.8--110
83.8--109
85,--107
参考质谱条件
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件1）
雾化气（NEB）：5.00L/min（氮气）；a
化合物
氨苯砜
N-乙酷
氨苯砜免费标准下载网bzxz
气帘气（CUR）：Il.00L/min（氮气）：喷雾电压（IS)：4500V
去溶剂温度（TEM）：500℃：
去溶剂气流：7.00 L/mip（氮气碰撞气(CAD)：6.00ml
min美气：
其他质谱参数见表A.1
主要参考质谱参数
母离子
De-氨苯矾
子离子
：离子为定量离子。
驻留时间
集能电压
聚焦电压
(FP)/V
人口电压
(EP)/V
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最住。SN/T2219—2008
碰撞能量
(CE)/e
避撞池电压
(CXP)/V
1）非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在API3690型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。5
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附录B
（资料性附录）
标准品的多反应监测(MRM)色谱图5.14双本碱
249.2/107. 8
5.14然本间
249.2/155.8
5. 10 %k氮米鼠
257.1/160.2
乙然苯面
器2/15.2
-乙氮乱
5.32 291.2/198.1
氨苯砜和N-乙酰氨苯砜标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图(0.5μg/kg)图B.1
Foreword
Annex A and annex B of this standard are informative annexes.SN/T 2219—-2008
This standard was proposed by and was under the charge of China National Regulatory CommissionforCertificationand AccreditationThis standard was drafted by Shenzhen Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China.Chongqing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People's Republic ofChina, and Anhui Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People's Republic of China.This standard was mainly drafted by Yue Zhenfeng.Hua Honghui,Zhao Fengjuan,Wang Guomin.ZhuMengxu, Lin Li,Zhang Jianying, Hou Lexi,Ouyang Shan,and Xiao ChenguiThis standard was a professional standard for entry-exit inspection and quarantine promulgated forthe first time.
Note: This English version,a translation from the Chinese text,is only far reference.SN/T 2219-2C08
Determination of dapsone and its metabolite residues infoodstuffs of animal origin for import and export-LC/MS/MSMethod
1 Scape
This stanclard specifics thc mcthocis of sample preparation ara qualified arid qulantified determination hy liguid chrorralography-rriass specirornetry of capsone and its metabolite N-acetyl dapsone residuices in food.stuiffs of animal origin.
This stanicard is applicable to deter.nination of dapsone and its metabolite N-acetyl dapsone residues in ani.mal muiscle.animal viscera.Fish+milk and egg.2Quoted norrmative documentsThe articles of the following cdocuments have become the articles of this starrlarcl throurgh the ckrotation. Forthe cdiated quotecl documerts.none of the revised contents (which uoes not inch.ade the coritent for correc-ting crrors) or thc revisecl editions after this standard is applicable to this stanclarcd. However-everybodywho ccimes to an agreement throuigh this stanidard is encouraged to study whether or not the latest editionsof these cocumcnts can be liscd in this standarcd. For the quoted documelits withouit date. thieir lasted ecli-tiois are applicaple to this stardard.GB T 6682 Water for analytical laboratory use-Spec,fication and test nethods t GB T 6682 -2008.ISO 3696 : 1987.MOD !
3Principle
The residues of dapsone and its metabolite N-acetyl chpsone in the test sample are extracted with alkalineacetonitrile. After be:ng cleaned up with SPE Colimn.concentreted and reconistiluteri. the resiclues are deter-mined by liquid chromatography-mass spectrometry-cquantifiect by internal starrlard method.4Reagents and materials
Unless specified.all rengents should oe of analylical gracc: \water\ is tlie first gracde water prescribed byGB T 6682.
Acetonitrile:HPLCGrade.
Methanol;HPLC Grade.
Acetonitrile +water.5 +95(V/V)Acetonitfile+water.15+85(V/V)4.4
25%NH.H20
SN/T2219—2008
1% ammonium inacetonitrile:Accurately draw 10mL 25% NH.H20 into a 1000 mL volumetricflask.dilutetovolumewith acetonitrile.and mix to ho4.7
Ammonium+acetonitrile
1+9VFV
Hydrochloric acid
Hydrochloricacid(0.1mol/L)Accuratelydraw17mLhydrochloricacid,diluteto1o00mLwithwater.
Standardchemicals:Dapsone,CAS.No,80-08-0.purity411
8.purity98%:dapsonedeuterated.purty98%4.12
Standardsolution
99%:N-acetyldapsone.CASNo.565-20-Standard stock solution:Accurately4.12.1
weigh5mg(corectedbypurity)standardchemicalofdap-soneandN-acetyldapsonerespectivelyOmLmethanol,andmixtohomogeneity.Theconcen-olvein10
Thesolutioncanbestoredindarkatthetemperaturebelow-2oCfortration of the solution is 500 mg/more than 12 months.
4.12.2Internalstandard stocksolution:Accuratelyweigh1mg(correctedbypurity)standardchemical ofdapsone deuterated,dissolve in 1o mL methanol.and mix to homogeneity.The concentration of the solutionis100mg/L.Thesolution can be stored indarkat thetemperaturebelow-20 formorethan12months.4.12.3S
Standard working solution:accordingtothe requirement.dilute withblank matrixextractsolutionjust before use.
Internal standard working solution:diluteintemal standard stock solutionto 1ooμg/L withmetha-4.12.4
nol.The solution canbe stored indarkat the temperaturebelow-2oC formore than3months.4.13
OasisHLB column(60 mg,3 mL) or equivalent.activated by3mL methanol and 3 mL waterSN/T 2219—2008
before use.
Oasis MCX column, (60 mg,3 mL) or equivalent ,activated by 3 mL methanol and 3 mL hydrachioricacid beforeuse.
Nitrogen: Purity 99, 99%.
5Apparatus and equipment
Liquid chromatography-mass spectrometry: equipped with electrospray ian source.5. 2Analytical balance.sensitivity: o. 1 mg,0. ot g.5.3
Mechanical Shaker.
Centrifuge with cooler,5 000 r/rnin.5.5
SPE vacuum cortainer.
Mechanical vacuum pump.
Tissue bfender.
Homogenizer.
Uitrasonic extractor.
Evaporator with nitragen flow.6
Sample preparation and storage6.1
Notice
Certain measures should be taken to prevent contamination of the samples or decompositisn of the residuesduring the sample preparation procedure6.2Animal muscle,liver,kidneyand fishAbout 500 g representative edible samples should be taken from all samples, then grinded and blended by atissue blender to produce homogenous samples. divided into two equal portions and put in suitable cleancontainers, After being sealed and labeled.the samples should be stored at oelow - 18 'C.10
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