【商检行业标准(SN)】 进出口动物源性食品中秋水仙碱残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2216—2008
进出口动物源食品中秋水仙
碱残留量的检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of colchicine residues in foodstuffs ofanimal origin for import and export-LC-MS/MS method
2008-11-18发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-06-01实施
本标准的附录A和附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可览督管理委员会提出并归口，SN/T2216—2008
本标准由中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局负责起草。
本标准主要起草人：谢文、丁慧瑛、奚君阳、岳振峰、陈笑梅、钱艳、本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
进出口动物源食品中秋水仙
碱残留量的检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
SN/T 2216—2008
本标准规定了动物食品中秋水仙碱残留量检测的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于色、鸭肉、牛肉、牛肝、牛肾和牛奶中秋水仙碱残留量的检测。2方法提要
在磷酸做缓冲溶液（pFI8）条件下用二氯甲焕提取样品中核水础碱，再用C8固相萃取小柱净化·液相色谱-质谱/质谱测定和确证，外标法定量。3试剂和材料
除另有规定外，所有试制均为分3.1乙：高效液相色谱级
正已烷：高效液相色谱级。
二氯甲烧：高效液相色谱级
甲醇：高效液相色谱级。
甲酸：高效液相色谱级。
磷酸二氨钠。
氢氧化钠。
3.8无水硫酸钠：650℃灼烧4
3.9甲醇水溶液：甲醇-水（4十63.100.15%甲酸溶液：移取0.
磷酸盐缓冲溶液:溶解 13
PHI 值到 8,0.最后用水稀释至 1电：水列
器内道
蒸馏水，
用水稀释至
3.12秋水仙碱标准品（calchicine，CAs号为64-86-8，C2aHG
身质中备用。
1mel/L氢氧化钢溶液调节溶液
纯度大于等于95%。
3.13秋水仙碱标准储备溶液：称取适量标准品<3.12)，用电醇器解，溶液浓度为100μg/mL。18C避光冷冻保存。有效期1个月。
3.14标准工作溶液：板据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成适当浓度的秋水仙碱标准溶液。临用前配置。
3.15无水硫酸钠柱：80mm×40mm（内径）筒形漏斗，底部垫5mm脱脂棉，再装40inn无水硫酸钠。3.16固相萃取柱：C8，500mg，3mL或相当者：使用前用5mL甲醇和5mL水预洗，保持柱体湿润，3.17有机相微孔滤膜：0.45m。
4仪器和设备bzxZ.net
4.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2旋转蒸发器。
4.3粉碎机。
SN/T 2216—2008
4.4均质器。
4.5旋涡混合器。
4.6离心机：40001/min。
4.7氮吹仪。
4.8固相萃取装置，
5试样制备与保存
5.1牛奶：从所取全部样品中取出有代表性样品约250ml,均分成两份，分别装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样于0℃～4℃保存。5.2鱼，鸭肉，牛肉、牛肝和牛肾：从所取仓部样品中取出有代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，混合均匀，均分成两份，分别装人洁净容器作为试样，密封，并标明你记。将试样下一18°℃冷冻保存。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。6测定步
6.1提取
6. 1、1鱼、鸭肉、牛肉、牛肝和牛肾称取2g试样（精确到0.01g)置于50mL具塞塑料离心管中，加人2mL磷酸盐缓冲溶液（3.11)，加人25mL二氯中烷，在均质器中以14000z/min均质30s,以4000r/min离心5min，将上层一氛甲烷提取液过无水硫酸柱，滤液收集于浓缩瓶中，样品残渣再加入20mL，二氯甲烷，重复上述操作，合并二氯甲烷提取液，在 50℃以下水浴减压浓缩至近干，用 4 mL正已烷和 4mL水依次将残泄转移至l0mL具塞玻璃离心管中，于旋涡混合器上以2000r/min.混匀1min，以2000r/min离心3min，弃去上层正己烷溶液，再加人4InL正己烷，重复1.述操作，下层溶液待净化。6.1.2年奶
称取4g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，加甲醇至20mL，以4000r/min离心5min，取10.0ml上清液加水至25ml，加20ml.正已烷，丁旋涡混合器上以2000r/min，混匀1min，以4000r/min离心3min，弃去上层止己烷溶液，下层溶液待净化。6.2净化
将下层溶液转移至Clg固相萃取柱（3.16）.再用5mL水洗涤两次，洗涤液过Cu固相萃取柱.弃去流出液，再用5ml.甲醇水溶液（3.9）洗涨，负压抽干，6mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，在50℃以下水浴减压浓缩至近干，用2,0mL甲醇水(1+1.体积比)定容.混勾，将溶液通过0.45μm滤膜、供液相色谱-串联质谱仪测定。
6.3测定
液相色谱-串联质谱条件
a）色谱柱：Cs托，150mm×4.6mm（内径）,5μm或相当者；流动相：乙腈-0.15%甲酸水落液（40+60.体积比）；b）
流速:0.4 ml./min;
进样量：20μL.：
离子源，电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描，
检测方式：多反应监测；
雾化气，气帘气、辅助气、碰撞气均勾高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达2
到检测要求，参考条件参见附录A表A.1;SN/T 2216—2008
1）监测离子对（m/2）：秋水仙碱100.2/310.2（定量离子）、4(HO.2/326.2、4(K).2/358.2。6. 3.2高效液相色谱-串联质谱测定根据试样中被测样液的含情况，选取待测物的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行測定，如超出仪器线性响应范国应进行稀释。在上述色谱条件下秋水仙碱的参考保留时间约为4.8min，标准溶液的选择性离子流图参见附录 B。6.3.3液相色谱-串联质谱确证
按照波相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品中待测物质的保留时间与标准落液中待测物质的保留时间偏差在士2.5%之内。定量测定时采用标准曲线法。定性时应当与浓度相当标准丁作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
表1定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
6.3.4空自试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。7结果计算和表述
>10~20
用色谱数据处理机或按式（I)计算试样中秋水仙碱残留含量，计算结果需扣除空白值：X-CxV
式中：
-试样中秋水仙碱的残留量，单位为微克每于克（u/kg）：X
t，\\从标准曲线上得到的秋水仙碱游液浓度，单位为纳克每衰升（ng/mL）：V..-.样液最终定容体积，单位为毫升（mL.)；最终样液代表的试样质量.单位为克（g）。8测定低限（LOO)和回收率
8.1测定低限（LOQ）
方法测定低限为1.0μg/kg。
8.2回收率
在不同添加浓度回收率数据见表2。表2秋水仙碱在不同基质中回收率范围质
添加浓度/（μg/kg）
二 50
回收率/%
70.1~~98.7
70,8--100.8
70, 3 ~ 106, 0
74. 0~97.1
75.2~~103.6
SN/T 2216—2008
表2（续）
添加浓度/（1g/kg）
回收率/%
71, 6-~ 99, 3
73, 8-~102. 8
71, 6- 103. 0
70. 4 ~109, 0
73.3-~102.2
73,7-~101,0
70,2-~98.3
70.3-~ 98. 1
70.0-~102.0
78. 4-~105, 0
70,9-102.3
75. 4 -~103. C
附录A
（资料性附录）
API4000LC-MS/MS系统电喷需离子源参考条件监测离子对及电参数：
电喷雾电压(1S)：4800V
雾化气压力（GS1)：289.59kPa(42psi）；气帘气压力（CUP)：172.375kPa(25psi)，辅助气流速(GS2)：310.275kPa（45psi);离子源温度（TEM）：540℃；
碰撞气(CAD):34.475 kPa(5 ps5)去簇电压（DP）：90V：
碰撞出电压（CXP)：
离子对,碰撞能量(CE)见表 A,1。表A.1
待测物
秋水仙碱
为定量离子对,
离于对、碰撞能量（CE
400.2/326.2
400.2/358.2
SN/T2216—2008
碰蓬能量(CE)/V
1）非商业性声明：附录A所列参数是齐API4000质谱仪完成的：此处列出试验用仪器型号仅店为了提供参号，并不涉及商业日的，鼓励标推使用者尝试不同厂家和型号的器。5
SN/T2216—2008
plo.150.23a.6o
附录B
（资料性附录）
秋水仙碱标准品选择性离子流围2.0
400.2/358.2
400.2/326.2
4078315764703 245 22430
400, 2/310,2
93.76 3.924.17 4.384.564-71
3.41..3.69
oo.140.25
秋水仙碱（1ng/mL）标准品的选择性离子流图1.5
45.185.45
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