【商检行业标准(SN)】 进出口动物源性食品中巴比妥类药物残留量的检测方法 高效液相色谱-质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2217—2008
进出口动物源性食品中巴比妥类药物残留量的检测方法
高效液相色谱-质谱/质谱法
Determination of barhiturates residues in foodstuff's ofanimal origin for imporl and export-HPLC-MS/MS method2008-11-18发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-06-01实施
本标准的刚录A,附录B利附录（韵为资料性附录。本标准出国家认证认可监督管理委员会提出并，SN/T 2217—2008
本标准由中华人民共和国湖南出入境检验疫局、中华人民共和国丘阳旧人境检验检疫局、中华人民共和国湖北出入境检验检疫局和中华人民共和国山东出人境检验检疫局负责起草。本标滩主娶起草人：平美玲，鼓华、张、李拥军、颜鸿飞、、林藜明、曲克、黄志独。本标准系芦次发布的出人境检验检疫行业标准范围
进出口动物源性食品中巴比妥类药物残留量的检测方法
高效液相色谱-质谱/质谱法
SV/T2217-2008
本标准规定了动物源性食品中巴比妥、苯巴比妥、仲丁比要、异戊巴比妥、戊巴比妥、司可比妥残留量的高效液相色谱-质谱/质谱检测本标准适用于猪肉、鸡肉、鱼肉猪肝中巴比要、苯巴比妥、仲丁比要、异戊巴比妥、成巴比妥、司可比要残留量的测定。
2方法提要
用酸性乙睛提取试样中残留的巴比妥类药物，经正己烷去除脂肪、固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱质谱/质谱法检测.内标法定量3试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸锯水3.1乙：高效液相色谱级。
3.2甲醇：高效液相色谱级。
乙酸铵：优级纯。
冰乙酸：优级纯
正己烷：优级纯
乙酸乙酯。
乙精饱和的正己烷：100mL晴中如人100mL正已烷，充个振荡后，静置分层，取上层液体燥器中备用
无水硫酸钠：650℃灼烧4h，置于于乙酸铵缓冲液：0.1mol/L.pH
酸调节pH到5.0%
称取7.71乙酸敏，用水溶解并定容至1000mL，以冰乙3.10
0.1%乙酸乙睛溶液：准确吸取1，0m冰乙酸至1000m
淋洗液I：乙酸铵缓冲液（3.9）-甲醇（90→10，体积比）。淋洗液Ⅱ：正己烷-乙酸乙酯（95-5，体积比）3.12
3.13洗脱液：正已烷乙酸乙酯（50+50.体积比）。3.14固相萃取小柱：6ml/200mg0asisHLB或相当者容量瓶，用乙睛定容至刻度：
3.15标准物质：巴比要、苯巴比妥、仲丁比要，异戊巴比要，成巴比要、司可比要均为1.0mg/mL的甲醇溶液。标准物质信息参见附录A。3.16混合标准储备液的配置：分别准确移取1.Cml.单个药物的标准溶液（3.15）于10mL容量瓶中：用甲醇定容至刻度，配制成浓度为100μg/mL的混合储备液，4℃下避光保存，有效期6个月。3.17混合标准中间液的配置：用甲醇稀释混合标准储备液至终浓度约为100ng/mL。同位素内标溶液：D-戊巴比妥要，100μg/mL的甲醇溶液，标准物质信息参见附录43.18
同位素内标中间液的配置：用甲醇稀释同位素内标溶液（3.18）至最终浓度为100ng/mL。标准工作溶液的配置：根据需要，临用时吸取一定量的泥合标准中间液（3.17）和同位素内标中间SN/T 2217—2008
液（3.19).用甲醇稀释配成适当浓度的混合标准L作溶液，4试样制备与保存
4.1试样制备
从所最全部样品中瑕山存代表性样品药50，充分绞碎，混匀，均分成两份，分别装人清净容器内：密封作为试样，标明标记。在制样的操作过程中.应防止样品受到污染或发牛残留物含量的变化4.2试样保存
将试样18℃保存
5仪器和设备
高效液相色谱-质谱/质谱仪：配出喷雾离子源(ESI)。5.2
组织鹅碎机-
超声被清洗器。
祸旋泥勾器，
5.5离心机（最大转速100001/min)5.6固相萃取装置。
氮气欧十仪
5.8 pH计。
5.9电了天：感量为0.01站
测定步骤
6.1提取
称取2 g(精确至0.01 g)经捣碎样品于 5) ImI.塑料离心管中,加人适量无水硫酸钠(3.8).吸去样品中的水分加人101.内杯溶液（3.19）：丁混包器上混句，再划人101m.酸性之睛溶液（3.10）：涡施混台3ini然后置于超声波清洗器中超声10 min，以4000r/min离心2min，取士层清液于0 ml离心管宁，残渣再加人10 m[.酸性乙睛溶液（3.1)）,重复提取一次，合并土清液。在提取液罚奶人5m1.2脂饱和的止已烧柄旋退合:离心,去上层正已烧，下层晴在氮气欧于假：45下恢干H5 Il.淋洗没「（3.11)允分溶解残泌，准备过杆净化。6.2净化
将（)asisIILB固相举取小样连接到固相举取装置，先后用5mL甲醇利5-I乙酸铵缓冲液（3.9）预淋洗,把上述提瑕液上柱.挤制流速为(.5.ml./min。用5 ml.淋洗液I（3.［1)洗涤柱:子，并彻底抽干，随后用5ml. 正已烷和5 ml.淋洗液I(3.12)淋洗最后用11 ml. 洗脱液(3.13)洗脱。并将洗脱液在15下用氮气吹+。用1.1ml.中醇游解戏渣-过0.45m微孔滤膜厅，供高效液相色谱-质谱/谱仪测是：
6.3测定
6.3.1液相色谱条件
a）色谱柱:柱填料为下八烷基硅烷键合的色谱性，150 inm火4.6 1nrr:（内径）,粒度5 μtI 或檀当者，
bh）流动相：梯度洗脱程序见表1：t）流速：0.5ml./min：
）杜温：35℃：
进烊最：23μl。
时间/inin
质谱条件
离子源;电喷雾离了源；
扫描方式：负离子：
表！流动相梯度洗脱程序
0.1不乙酸水溶液/%
检测方式：多反应监测(MRM);
SN/T 2217—2008
乙腩/%
雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气与为高纯氮气；使用前应谢节各气本流量以使质谱灵敏度d)
达到检测要求,参考条件参见附录B；喷雾电压上集簇电压、减能等电压值应优化至最优灵敏度，参考条件参见附录B.e
液色谱-质谱/质谱测定
按照工述检测条件测定样液和混合标准1.作溶液：以色谱峰面积按内标法定。样液中被测物的响应值应在仪器线性范周之内.如果超小仪露线性范国成进行适当稀释。在上述色谱条件下待测物的参考保留时间分别7.8min（巴比妥）、9.0min（苯巴比要）、9.1min（仲丁比妥）、5.8min（1)-戊巴比婴）,9.9min(异戊巴比妥）9,Iin巴比要）10.3min（司叫比要）。标雅辫液的液相色谱质谱/质谱色谱图参见附录中的图.1
6.3.4阳性样品的确证
在相同的实验条件下，样液中被测物的研量色谱峰保留时简与标准1作液相同，并！儿在扣除背景后的样液谱图中，所选择的离子刘均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离了的对十度相比，误差不超过表2规的范应内·则可判断样品中存在对成的被测物表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度(苯峰);兴
: 20 -- 50
:0--29
6. 4 空白试验
除不川试样外，均按上述测是步骤逆行6.5结果计算和表述
机对离了丰度最人允许误差/
— 20
用色谱数据处理机成按照式（1)计算样品中待测药物的留量，计算结果需扣除空白。#=CXXAZAXV
ra XA; XA. Xm
式中：
试样中得测药物的含量，单位为微克每千克（eg/kg)：.4
样液中药物的峰而秋：
标准作液中药物的浓度.单位为纳克每毫升（ng/mt.)：.（1)
SN/T2217—2008
一标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml.）：-样液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/inL）：A
标准工作液中药物的峰面积；
标准工作液中内标物的峰面积；样液中内标物的峰面积；
样液最终定容体积，单位为毫升（ml）：最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）.7测定低限、回收率
7.1测定低限
本方法测定低限为：1.0ug/kg。7.2回收率
回收率数据见表3～表6
表3猪肉中添加浓水平及回收率数据药物名称
巴比要
苯巴比妥
仲丁比妥
药物名称
巴比妥
苯巴比晏
仲丁比妥
添加浓度/（g/kg）
添加浓度/（1g/kg
回收率/3
86.8-100:1
91.5-108.4
90.8-103.0
药物名称
异戊巴比费
迎比要
司可比要
添加浓度/（ug/kg）
鸡肉中添加浓水平及回收率数据回收幸19
86.4-99.1
84.5~95.2
83.3~95.6
82.4-92.2
94.9-103.0
89.2-~92.8
88.6-99.5
92.4~100.0
药物名称
异皮巴比要
戊巴比妥
瓦可比要
添加浓度/(pg/kg）
回收率/%
87,1~94.3
85.0-101.2
93.1--19.6
86.4-92.3
90.5--101.2
S0.7103.1
89.9-94.1
90.0104.0
79.3--97.6
回收率/%
94.8~112.0
85.7~106.4
88.5-96.3
89.7-102.2
88.1-97.2
85.5~~94.0
89.5~103.1
药物名称
巴比耍
苯巴比妥
仲丁比要
药物名称
巴比妥
苯巴比耍
仲丁比妥
表5鱼肉中添加浓水平及回收率数据添加浓度/（1g/kg）
回收率/%
78.5~86.0
85.6~-96.4
86.7~95.7
86.7--93.4
92.4--101.0
93.5--108.0
88.5~97.6
918-104.7
药物名称
异戊巴比要
茂巴比要
司可比变
SN/T2217—2008
添加浓度/（pg/kg）
表6猪肝中添加浓水平及回收率数据添加浓度/（μg/kg）
回收率/%
83:0093
86.2-94.5
87.0--93.5
88.6--106.1
.684.1
：0934
8107-0
药物名称
异成巴比要
成巴比要
司可比要
添加浓度/（pg/kg）
回收率/%
89.3--95.4
89.3--96.6
92.8-~105.0
89,4-97.8
90.2~95.4
98.6--104.9
88.4~~96.8
92.2100.2
86.6-100.0
回收率/%
84.6-91.5
86.0~-92.2
93.4~106.0
86.9---95.1
91.5--162.2
90.6~-107.2
78.6~93.3
84.9-~95.5
93.8~110.0
SN/T 2217--2008
英文名称
harbit:l
plenobarbital
hulabarhitr.)
ancbarbital
penoberbital
secoharhital
中文名称
举巴比妥
种「比要
异皮比比婆
我世比妥
同可比妥bzxZ.net
[entaharhital-]>5：),巴比妥
附录A
(资料性附录）
标准物质的基本信息
表 A,1标准物质基本信息
CAS号
57-41-3
50-06-6
125-49-6
57-43-2
76-74-4
76-73-3
52944-668
结构式
CH,CHICHC
CH2=CHC112
CHgcgn
CD: -CD
CH,H C
分子武
C. H.. N. O.
C1- H1Nea
C.n H.. N.O.
.. H.rN.O.
Cu HiD, N,.
相对分广质员
附录B
（资料性附录）
API4000LC-MS/VES系统检测巴比妥类药物参考条件1API400CLCMS/MS系统电喷雾离子源参考条件气希气(CUR):137.9 kFa(20 psi);b)
雾化气(Gs1)：275.8kPa(40 psi);辅加热气(GS2):344.75 kPa(50 psi);撞((CA1)):48.265 kPa(7psi);
电喷雾电压(1S)：3500 V：
离「源温度（TEM);500 ℃;
SN/T 2217—2008
定性离了对、定员离子对、碰撞电压(C)去簇电压(I)}）、碰撞室人电压(P)和碰撞室比I电压（CXP)见表B.1所示，
表 B. 1巴比妥类药物的定性离子对、定量离子对、碰撞电压(CE)、去簇电压(DP)、碰撞室入口电压（EP）和碰撞室出口电压（CXP)）衍测物
巴比要
举巴北妥
件」比妥
异哎巴比要
戊巴出要
司可比妥
D).我也比妥
a 为定量离对,
大簇电乐
飛掩电压
姚率人牵克压
磁撞率出率电乐
2）作商业性声明:附录B所列参数是在A11 1000质谱仪1:完或的,此处列出试验川议器型号仅是为了提供参考,并不涉及商业月的，敲励标准使用者尝战采用不同厂家战型凸的仪器。SX/T 2217—2008
2 600:
: 000-
附录（
（资料性附录）
巴比要药物的多反应监测(MRI色谱图000
183: 2 140. 4
231. n :-ya.1
”比晏
21.2168.2
230. 2.:87. 1
巴比妥药物的多反应监测(MRN)色谱图图 C1
THs.2:.42.1
荣巴北婴
231. 0 : 42. 1
211. 2 -41. 1
2.1.242.1
1214:6
4 oro. 0o
E8 000.0%
22:. 2 :-82. 2
残巴比要
225.2>182.2
司可比要
237. 1 194. 3
4 00G. G0
图C.1（续）
SX/T 2217--2008
异现比要
225.242. :
茂巴要
22.2 *42. 1
司可比安
237. 1:42. 1
SN/T2217—2008
Foreword
Annex A,annex B and annex C of this stanard are informative annexs.This standard was proposed by and is under the charge of the Certification and Accreditation Administration of the Peaple's Republic of ChinaThis standard was drafted by the Hunan Entry-Exit Inspection and Quarantine Brureau. Yuyang EntryExit Inspection and Quarantine Brureau, Hubei Entry-Exit Inspection and Quarantine Brureau andShangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Brureal! of the Peaple's Republic of China.The standard was mainly drafted by Meiling Wang,Hua dai, Ying Zhang, Yongjun Li.Hong feiyan. PengWang , Liming Li,Ke Cao.Zhiqiarng HuangThis standard is a professional standard for entry-exit inspection and quarantine promulgated for thefirst time.
Note; This English versiori,a translation frorn the Chinese lexl,is solely for guiclance10
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。