【商检行业标准(SN)】 进出口动物源性食品中痢菌净残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2157—2008
进出口动物源性食品中
菌净残留量的检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of mequindox residue in foodstuffs of animal originforimport and export--HPLC-MS/MS method2008-09-04发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-03-16实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2157—2008
本标准起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国重庆出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：张代辉、牟峻、荣会、王国民、韩大川、王明泰。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准I
1范围
进出口动物源性食品中
俐菌净残留量的检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
SN/T2157—2008
本标准规定了进出口动物源性食品中痫菌净残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法。本标准适用于猪肉、鸡肝、鸡肾、鱼肉、牛奶、蜂蜜中痢菌净的测定和确证。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T6682—2008.ISO3696：1987,MOD）3方法提要
试样中残留的痢菌净用三氯甲烷均质或超声波提取，提取液经浓缩，HLB固相萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/质谱法测定和确证，外标法定量。4试剂与材料
除另有规定外.所用试剂均为分析纯·水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2三氯甲烷：色谱纯
4.3无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，贮于密封容器中备用。4.4甲醇-水（1+1.体积比）。
4.5痢菌净标准物质（Mequindox，分子式：CiiHioN2O）：纯度大于等于97%。4.6标准储备液的配制：准确称取适量的标准物质（4.5），用甲醇（4.1)配制成浓度为1000μg/mL的标准储备液，避光一18℃保存
4.7标准中间工作液的配制：准确移取一定体积的标准储备液（4.6)，用甲醇（4.1)稀释成适当浓度的标准中间工作液，避光一18℃保存。4.8基质标准工作液的配制：准确移取一定体积的标准中间工作液（4.7），可根据需要用空白样品提取液稀释成适当浓度的标准工作液，当天配制4.9固相萃取小柱：WatersoasisHLB固相萃取小柱，500mg，6mL或相当者。4.10微孔滤膜：有机系，0.20um。5仪器和设备
5.1液相色谱串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。5.2固相萃取装置。
5.3组织捣碎机。
5.4均质器。
SN/T2157—2008
超声波发生器。
5.6旋转蒸发器
5.7分析天平：感量为0.001.g。5.8高速离心机：4000r/min。
5.9漩涡混合器
5.10聚四氟乙烯离心管：50mL，具塞。5.11浓缩瓶：50mL、250mL。
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1猪肉、鸡肝、鸡肾、鱼肉样品类从所取全部样品中取出有代表性样品约1kg，将其切成碎块后，依次用组织捣碎机将样品加工成馅状或浆状。混匀，均分成两份作为试样，分装人洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。6.1.2牛奶类
取乳及乳制品样品200g，将其混合或搅拌均匀，均分成两份作为试样，分装人洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。
6.1.3蜂蜜类
取代表性蜂蜜样品200g，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记；对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下.将样品瓶置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅勾，迅速冷却至室温，均分成两份作为试样，分装人洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。在融化时应注意防正水分挥发。6.2试样保存
肌肉组织及器脏组织类、水产品类试样于一18℃以下冷冻保存；乳及乳制品类和蜂蜜类试样于0℃～4℃保存。
在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，7测定步骤
7.1提取
7.1.1猪肉、鸡肝、鸡肾、鱼肉样品称取5g样品（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加入5g硫酸钠（4.3）与样品充分混匀，再加入20mL三氯甲烷（4.2），高速均质提取3min，于4000r/min条件下离心3min，将上层提取液移人250mL浓缩瓶中，残渣用2×20mL三氯甲烷重复提取两次，合并提取液。将所得提取液于40C水浴减压浓缩至近干，残渣加人5mL甲醇-水溶液（4.4)溶解。7.1.2蜂蜜、牛奶样品
称取5g样品（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加人10mL水，超声波提取10min，加入20mL三氯甲烷，振荡提取5min，于4000r/min条件下离心3min，将下层提取液移入浓缩瓶中。再加人20mL三氯甲烷，重复上述操作两次，合并提取液。将所得提取液于40℃水浴减压浓缩至近干，残渣加入5mL甲醇-水溶液溶解。
7.2净化下载标准就来标准下载网
分别用5mL甲醇，5mL甲醇-水预处理HLB固相萃取小柱（4.9），保持柱体湿润，将上述提取液转移至上述柱中，弃去流出液，用10mL甲醇洗脱，以小于1mL/min速度收集全部洗脱液于50mL浓缩瓶中，于40℃水浴中旋转浓缩至近干。用甲醇溶解并定容至1.0mL，经0.2um滤膜过滤后，供液相色谱-质谱/质谱定量测定和确证。2
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
色谱柱：ZORBAXSB-C18，150mmX2.1mm，3.5μm，或相当者；流动相：甲醇-水（70+30）；
流速：0.2mL/min：
柱温：20℃；
进样量：10μL。
质谱条件
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应监测（MRM）；电喷雾电压（IS)：5500V；
雾化气压力（GS1）：30Pa；
气帘气压力（CUR）)：25Pa；
辅助气压力（GS2）：20Pa；
离子源温度（TEM）：550℃：
SN/T2157—2008
定性离子对、定量离子对、去簇电压（DP）、碰撞气能量（CE)及碰撞室出口电压（CXP)见表1。表1痢菌净定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压定性离子对
219.2/143.2
219.2/159.9
219.2/185.0
7.3.3定量测定
定量离子对
219.2/143.2
去簇电压
(DP)/V
碰撞气能量
(CE)/V
碰撞室出口电压
(CXP)/V
根据样液中被测痫菌净药物含量，选定浓度相近的基质标准工作液。基质标准工作液和待测样液中菌净药物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准溶液与样液等体积分组分时段参插进样测定。外标法定量。在上述液相色谱-质谱/质谱条件下，痢菌净标准物质的保留时间约为2.3min，标准溶液的选择性离子流图参见附录A中图A.1。7.3.4定性测定
对基质标准工作液及样液按上述规定的条件进行测定时，如果样液与基质标准工作液的选择离子图中，在相同保留时间有峰出现，所有选择离子均应出现。则根据定性选择离子对的种类及其相对丰度比对其进行阳性确证。定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差见表2。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的最大偏差/%
7.4空白试验
>20~50
除不加试样外，按上述相同条件和步骤进行。8结果计算和表述
>10~20
用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中痢菌净残留含量，计算结果需扣除空白值。AxexV
.（1)
SN/T2157—2008
式中：
试样中痢菌净残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；样液中痢菌净的峰面积；
基质标准工作液中痢菌净的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；基质标准工作液中痢菌净的峰面积；最终样液代表的试样质量，单位为克（g）。测定低限和回收率
测定低限（LOQ）
本方法的测定低限为0.010mg/kg。9.2
回收率
在0.010mg/kg~0.040mg/kg添加浓度范围内，回收率的实验数据见表3。3不同添加浓度回收率数据
添加浓度/（mg/kg）
80.2~96.4
75.6~94.3
78.3~98.4
75.0~92.1
80.2~98.8
82.1~95.3
回收率/%
72.3~93.0
77.3~95.7
73.6~97.8
71.6~83.5
72.7~85.2
71.4~88.1
88.6~98.2
87.3~99.0
82.9~96.8
82.2~99.1
2. 14:h =
附录A
（资料性附录）
痫菌净标准品选择性离子流图1
SN/T2157—2008
0.5 1.0 16 2.6 2.6 30 85 40 45 0 55 66 687.0 76 s0 85 56 5 10.0/mn2.35
TTTTTTTTTTTT
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.1 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.01 8.5 9.0 0.5 10.02.35
T/itlir
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.55.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.58.0 8.5 9.0 9.5 10.02.31
mnirttrir T
0.51.01.5 2.0 2.63.0 3.5 4.04.55.0 5.5 6.06.6 7.07.58.0 8.5 9.09.6 10.0图A.1痫菌净标准品的选择性离子流图219.1
f tr aipir aa -
100110120130
[4]15016017][80[9020]
2142202302402526027028029300m/2/am
菌净标准品的母离子全扫描质谱图1）附录A所得谱图是在API4000质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。5
SN/T2157—2008
m/z/aru
痢菌净标准品的子离子全扫描质谱图240
SN/T 2157-2008
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
进出口动物源性食品中
痢菌净残留量的检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
SN/T2157—2008
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：68523946
68517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880×12301/16
2008年11月第一版
印张1.25
字数27千字
2008年11月第一次印刷
印数1-—2.000
书号：155066·2-19268
定价12.00元
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