【商检行业标准(SN)】 动物源食品中氢化泼尼松残留量检测方法 气相色谱-质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2160—2008
动物源食品中氢化泼尼松残留量检测方法气相色谱-质谱/质谱法
Determination of prednisolone residues in animal food-GC-MS/MS method
2008-09-04发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-03-16实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中国检验检疫科学研究院负责起草本标准主要起草人：仲维科、丁罡斗、李翔、李礼、刘汉霞、张圭、孙毅之本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准SN/T2160—2008
1范围
动物源食品中氢化泼尼松残留量检测方法气相色谱-质谱/质谱法
本标准规定了动物源食品中氢化泼尼松残留量的检测方法本标准适用于动物源食品中氢化泼尼松残留量的检测2测定方法
2.1方法提要
SN/T2160—2008
样品用乙睛提取，经C18固相萃取柱净化，净化后的氢化泼尼松在酸性条件下用K2Cr2O快速氧化衍生，气相色谱-二级质谱法（GC-MS2）检测，外标法定量。2.2试剂与材料
2.2.1甲醇（色谱纯）。
2.2.2乙腈（色谱纯）。bZxz.net
丙酮（色谱纯）。
正已烷（色谱纯）。
二氯甲烷（色谱纯）。
乙酸乙酯（色谱纯）。
乙醇（色谱纯）。
氢化泼尼松标准品（prednisolone.CAS#：50-24-8，分子式C21H28Os）：纯度99%氢化泼尼松标准储备溶液：10mg/L无水甲醇。乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH4.6，在158mL乙酸钠溶液中加人42mL乙酸）。酸性K2Cr2O溶液（取18mL水，加人2mL浓硫酸，再加10gK2Cr2O）。酶解汁（含β-葡萄糖醛苷酶和磺酯酶，大于≥10000000μ/g）。C18固相萃取柱（3mL,500mg）。2.2.14
碳酸氢钠溶液（10%）。
2.3仪器和设备
气相色谱-离子质谱（EI源）。
氮吹仪。
高速离心机。
2.3.4振荡器。
2.3.5涡旋振荡器
2.3.6固相萃取装置。
2.3.7超声清洗器。
2.4测定步骤
2.4.1提取
称取10.00g组织样品（猪肉、猪肝和猪肾）于组织捣碎器中粉碎成浆状置于50mL离心管内，加人15mLpH4.6的乙酸-乙酸钠缓冲溶液，再加人200μL酶解汁，振荡10min、超声15min后于60℃水浴中加热2h。冷却后加人20mL乙睛并振荡30min，以7500r/min离心分离20min，将上层乙睛1
SN/T2160—2008
转移至另一离心管内，加人8mL正已烷、2mL二氯甲烷后振荡，再以4500r/min离心5min，然后移取中间层至比色管内并在50℃条件下氮气吹干。将吹干后的残渣用1mL乙醇涡旋溶解，再加人9mL水混匀，备过C18柱。
2.4.2净化
C18小柱分别用5mL甲醇和5mL水活化，5mL乙醇-水（体积比1：9）平衡，加人上述乙醇上样溶液后，依次用5mL水、5mL丙酮-水（体积比1：9）、3mL甲醇-水（体积比4：6）淋洗并抽干，再用5mL正已烧淋洗，最后用2mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液并用氮气吹干。2.4.3衍生化
将上述残渣用100μL乙睛复溶，加100μL酸性K2Cr2O7氧化液并混匀，于60℃水浴中加热18min，冷却后依次加入200μL10%碳酸钠溶液、1mL去离子水、3mL二氯甲烷，超声提取10min后于4500r/min离心5min。将下层有机相转移、氮气吹干，加乙酸乙酯定容至1mL，用于GC-MS/MS测定。
2.4.4测定
仪器条件
色谱柱：DB-5或其他性能相当的柱子（30m×0.25mm×0.25μm）；b)
色谱柱温度：70℃（保持1min），以25℃/min升温至270℃（保持0min），再以15℃/min升温至310℃（保持2min）；
进样口温度：280℃；
离子源温度：250℃；
传输线温度：280℃；
离子源：电子轰击电离源；
测定方式：二级质谱监测模式检测（MS/MS)；监测离子：氢化泼泥松母离子m/z160.子离子m/z131、145；载气：高纯He，纯度≥99.999%；进样方式：不分流进样：
进样量：1L；
电离能量：70eV；
载气流量：1.0mL/min；
碰撞诱导解离（CID)电压为：1.0V。2.4.4.2色谱-质谱确证和测定
在上述仪器条件下（2.4.4.1）经氧化衍生的氢化泼尼松保留时间约为12.37min。气相色谱-二级质谱监测模式检测的总离子流图见附录A图A.1，采用氢化泼尼松的二级碎片离子为定量离子，其m/z为145。符合下列条件，即可确定样品中含有氢化泼尼松：在保留时间12.37min附近有峰出现，选定的质谱碎片离子在样品的二级质谱监测图中都能出现，样品峰的质谱图中母离子与子离子丰度比5%～20%之间。气相色谱-质谱图参见附录A图A.2和图A.3。2.4.5空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。2.5结果计算
计算见式（1)：
式中：
X=AXcxV
试样中氢化泼尼松残留含量，单位为微克每克（ug/g)；X
样液中氢化泼尼松的峰面积；
标准工作溶液中氢化泼尼松的峰面积：c——标准工作溶液中氢化泼尼松浓度，单位为微克每毫升（μgmL）：样液最终定容体积，单位为毫升（mL)；V
试样的质量，单位为克（g）。
注：计算结果需将空白值扣除。检出限、线性范围、精密度及回收率3
检出限
本标准检出限为：1μg/kg。
3.2线性范围
氢化泼尼松标准品浓度在1ug/kg～500μg/kg时线性相关系数大于0.99。3.3精密度和回收率
SN/T2160—2008
氢化泼尼松添加浓度在1ug/kg~200μg/kg时，相对标准偏差为8%~18%平均回收率为56%~85%（见表1）。
回收率和精密度试验结果（n=8）表1
添加浓度
(μg/kg)
回收率均
相对标准
偏差/%
回收率均
相对标准
偏差/%
回收率均
相对标准
偏差/%
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Abundlanee
11.54 11. 62
附录A
（资料性附录）
标准物衍生化后的气相色谱-质谱图12.37
13.0113.1013.36
氢化泼尼松标准品衍生物气相色谱-二级质谱监测模式的总离子流图图A.1
Abundancc
Abundance
131,22
SN/T21602008
图A.2氢化泼尼松标准品衍生物气相色谱-全扫描质谱图115.01
111111111
氢化泼尼松标准品衍生物气相色谱-二级质谱监测模式的质谱图（MS/MS）m/z
SN/T2160-2008
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
动物源食品中氢化泼尼松残留量检测方法气相色谱-质谱/质谱法
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中国标准出版社出版
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中国标准出版社案皇岛印刷厂印刷*
开本880×1230
2008年11月第一版
印张1.25
字数25千字
2008年11月第一次印刷
印数1-2:000
书号：155066·2-19270
定价12.00元
8002091Z 1/S
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