【商检行业标准(SN)】 进出口危险化学品安全试验方法 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2497.212010
进出口危险化学品安全试验方法第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part21:Agarosegelelectrophoresis2010-03-02发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
的防快
2010-09-16实施
SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验；第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；-第3部分：大型涵繁殖试验：
第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；一第5部分：睾丸细胞UDS试验；-第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；
-第8部分：胸窝淋巴结试验；
第9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；
第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；
第16部分：Western-Blot实验；-第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：NorthernBlot实验；第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验：第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量（BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第21部分。木部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2497.21—2010
本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。
本部分主要起草人：吕刚、王利兵、李晶、张颖、赵好力宝、庞震。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
进出口危险化学品安全试验方法第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验SN/T2497.21—2010
SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品琼脂糖凝胶电泳的术语和定义及操作步骤。本部分适用于进出口危险化学品琼脂糖凝胶电泳试验。2术语和定义
下列术语和定义适用于本部分
琼脂糖凝胶电泳agarosegelelectrophorests一种简便高效的分离和纯化DNA片断的方法：由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。具有不同的相对分子质量的DNA泳动速要不样-因而可依据DNA分子的大小来使其分离。在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。3
试剂和材料
电泳缓冲液：可根据实验要求和实际情况根据表工选择适当缓冲液。表1
常用电泳缓冲液
缓冲液
Tris-乙酸(TAE)50×
Tris-磷酸(TPE)10X
Tris-硼酸(TBE)5X
碱性缓冲液1×
贮存液(1L)
242gTris碱，571mL冰Z酸，1Q0mL0.5mol/LEDTA(pH值8.0)
108gTris碱，15.5mL85%磷酸，40mL0|5mol/LEDTA(pH值8.0)
54gTis碱，2f.5g硼酸，20mL
5mol/EDTA(pH值8.0)
5mL10mol/LNaOH↓2mL
g.5mol/LEDTA(pH值8.0)
注：碱性缓冲液应现用现配。
溴化乙锭溶液：工作液0.5μg3.4加样缓冲液。
线状DNA分子的有效分离范围(kb）5~60
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3.5DNA相对分于质量标准品。
仪器和设备
水平板电泳槽。
4.2电泳仪。
微波炉。
操作步骤
凝胶的制备
称取需要量电泳级的琼脂糖于一烧瓶中，取适量的电泳缓冲液加入烧瓶中。在微波炉中融化琼5.1.1bZxz.net
脂糖，旋转使之均匀混合。
5.1.2待琼脂糖冷却至55℃，加入溴化乙啶，倒人插有样孔梳的凝胶灌制平板上，去除气泡。5.1.3待凝胶完全凝固后，小心移去梳子，将凝胶放人电泳槽中。5.2上样
5.2.1在电泳槽中加人足量的电泳缓冲液，盖住凝胶并超过胶高1mm5.2.2将所制备的DNA样本加上加样缓冲液混匀，总量不能超过疑胶孔的容积，用微量加样枪将样本加人凝胶孔中，并加人适量的DNA相对分子质量标志物。5.3电泳
5.3.1连接导线，使DNA在凝胶中向阳极移动，设定电压强度，一般是1V/cm～5V/cm，开始电冰。5.3.2当加样缓冲液中的溴酚蓝染料迁移的距离足以判断DNA片段的分离时，关闭电源，电泳结束。5.4观察和分析
将电泳结束的凝胶直接置于紫外灯下进行观察，如有成像系统可进行拍照，并根据试验目的进行初步分析。
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电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷印张0.5字数6千字
开本880×12301/16
2010年6月第一次印刷
2010年6月第一版
印数1-1600
书号，155066·2-20954
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