【国家标准(GB)】 畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T20759—2006
畜禽肉中六种磺胺类药物残留量的测定液相色谱串联质谱法
Method for the determination of sixteen sulfonamide residuesin livestock and poultry muscles-LC-MS-MS method
2006-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-03-01实施
本标准的附录A和附录B为资释性附录。本标准出中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。本标准起草单位：中华人民共和国案皇岛出人境检验检疫局。GB/T20759-2006
本标准土要起草人：庞国芳、曹彦忠、贵光群、张进杰、范吞林、李学民、刘永明、石玉秋。本标准系首次发布的国家标准。1范围
莆禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GR/T 20759—2006
本标准规定了牛肉、羊肉猪肉、鸡肉和兔肉｜六种磺胺类约物残留量液相色谱-串联质谱测定方法：
木标准适用丁牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和免肉中十六种磺胺类药物残留鼠的测定，本标准幽力法检出：磺胺中噻二唑为2，5k，磺胺醋酰、横胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺二甲是噪唑.磺胺甲基嘧、磺胺氯哒嗪、磺胺-6-氧嘧啶，磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异曬唑为5.0\g/kg,磺胺哮哗.磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧啶为1).(0μg/kg，磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶为20).0ug/kg磺胺米吡唑为10.0g/kg
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。儿是不个注日期的引用义件，其最新版本适用于本标推，(GB/T6379.1测量方法与结果的推确度（正确度与精密度）第 1 部分总则与定义(GB/T 6379.1—2004.IS0 5725-1:1904.IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的乐木方法(G3/T6379.2—-2004ISO5725-2：1994,IIT)GB/T-6682分析实验室用水规格和试验方法（(B/T6582—1992，ne1IS36961987）3原理
畜离肉中磺胺类药物残留用乙腈提取·离心后，上清液用旋转蒸发器浓缩近干残迹用流动溶解，并用正已烷脱脂后,样品溶羧供被相色谱-串埃质谱仪测定，外标法定呆。4试剂和材料
除另有说明外，所而试剂均为分析纯，水为（GB/T6682规定的一级水4.1乙：色谱纯。
4.2异丙醇。
4.3正已烷。
4.4Z酸铵
4.5无水硫酸纳：经650℃灼烧4h，置于1燥器巾条用。4.6流动相：乙十0.1m0171.乙酸铵溶液（12十88）4.7磺胺醋酰、磺胺甲噻二唑、磺胺三甲嗯唑、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺甲基异唑,磺胺噻唑、磺胺-6-氧嘧啶、磺胺基嘧啶.磺胺邻中氧嘧啶、磺胺吡啶，磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺一甲啶磺胺苯吡唑，磺腰间二中靠蟀啶标准物质：纯度学99%4.8十入种磺胺标准诺备溶液：0.1 mg/ml准确称取适量的每种磺胺标准物质，用醇配成0.1mg/mlL.的标准储备溶液，该溶液在4℃保存，可使用二个月1
GB/T 20759—2006
4.9基质混个标准工作济液：根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度(1g/mI)的基质混合标准工作溶液·基质混合标推工竹溶液在4℃保荐.可使用-周4.10滤膜：0.2um
5仅器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2句质器，
5.3旋转蒸发器。
5.4液体混勾幕。
5.5离心机。
5.6分析大平：感量0.1mg，0.0g5.7移液器:1 mL,2 mL
5.8 心瓶:100 ml.。
5.9样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖6试样的制备与保存
6.1试样的制备
成全部样品中最出有代表性品约1k，充分搅碎，混勺，均分成两份，分别装人洁静器内。密封作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2试样保存
将试样于一18℃冷冻保存。
7测定步骤
7.1样品制备
称取5 试样.精确至0. 01 书,置于 50 tnL离心臂巾,人 20 g无水硫酸钠(4. 5)和 20 mT. 乙晴(4.1),均质2min,以3000 r/min离心3min。上清倒人100 rl.鸡心瓶中.残渣再加人20 ml乙睛重复上述操作一次。介并提取液，向鸡心瓶中加入10mL异丙醇（4.2），用旋转蒸发器（5.3）于50℃水浴蒸干,雅确加人1 ImL流动相(4.6)和］rnl.止已烷(4.3)溶解残渣。转移至5ml.离心管中，涡旋1 min,以3000 r/min离心3Tmin,吸取上层止L烷弃去，再加人1 mI.止亡烷，重复上述步骤，直至下层水相变成矮明液体。接「述操作步骤制备样品穿占提取液。取下层清，过0.2μIm滤膜4.10)后，用液相色谱申联质谱仪测定。
7.2色谱测定
7.2.1液相色谱条件
a）色谱杜:Lichrospher 100 RP 18,5 μ,250 m×4.5 mm(肉径)或相当者；流动树：乙睛+0.01 mol/L乙酸铵游液(12+88)：h)
流速:0.8 mT./min;
d）柱温:35℃,
c）进样带：40 μl.;
流出:13,
7.2.2质谱条件
α）离子源：电喷雾离子源：
b）扫描方式：正离子扫描;；
检额方式：多反虚监测：
电喷雾电压：5500V：
雾化气压力：0.076MPa：
气帘气压力：0.069MPa：
辅助气流速:6 1/mint
离子源温度：350℃：
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表「。GB/T 207592006
表 1十六种磺胺的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压中文名称
磺胺醋酰
磺胺甲噻，唑
磺胺甲异恶唑
磺胺氨哒嗪
磺胺嘧啶
磺胺甲基异嘧唑
磺胺噻唑
熨胺-6-甲氧嘧啶
磺胺甲基畴啶
磺胺邻二甲氧嘴啶
磺胺吡啶
磺胺对甲氨嘧啶
磺胺甲氧哒嗪
磺胺二甲嘧啶
磺胺苯吡唑
磺胺间二甲氧嘧啶
荧文名称
sulfacetamide
sulfamcthizole
sulfisoxuzole
sulfachlerpyridazine
sulfaciazine
sulfaet:oxHzole
aulfathiazsle
sulfamonometaoxine
sulfamerazine
sulfadoxin
sulapyridine
sulfameter
sulfamcthoxypyridazine
sulfamethizine
: sullaphcnezole
suifadietxie
定性离子对
215/156
225/1C8
271/156
271/107
288/156
288/113
285/13G
285/108
251/156
251/185
254/136
254/147
256/156
256/107
28:1215
265/156
265/172
311/156
311/158
250/158
250/184
281/156
281/215wwW.bzxz.Net
281/156
281/215
279/156
279/204
315/156
315/160
311/156
311/218
亲量离子对
215/156
271/156
268/156
285/15G
231/1536
254/156
256/156
281/156
265/156
311/156
250/156
281/156
281:155
279/155
3157156
311/156
碰撞气能量/
去簇电压/
GB/T20759—2006
7.2.3液相色谱-串联质谱测定
用混合标准T作溶液（4.9）分别进样，以1.作溶液浓度（ng/ml.)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线.而标准工作曲线对样品进行定量，样品溶波中十六种横胺的响应俏均应在仪器测定的线性范围内，在上述色谱条作和质谱条件下，十六种磺胺的参考保留附间见表2，十六种磺胺混合标准总离子流图参见图 A. 1和图 A. 2.表2十六种磺胺参考保留时间
药物名称
磺腰醋既
碟腰甲噻二唑
磺胺二币异帖唑
磺胺嘧噬
磺胺氯哒嗪
磺胺甲基异哗唑
啖胺噻唑
強胺-G-甲氧嘧啶
7.3平行试验
保留付间/in
按以上步骤，对同试样逊行平行试验测定。7.4空白试验
除不称取群品外，均按述步骤进行8结巢计算
结果按式(1)计算：
药物名购
磺酸下基嘧嵋
磺按邻二平氢嘧啶
磺胺吡啶
磺胺甲筑啶
颜胺甲氧吲嗪
磺胺二中嘧啶
磺胺举吡唑
磺胺间二甲嘧啶
试样啡被测组分娥留景.单位为微克每「克（将/k）：从标准工作面线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每寇升（ng/ml.)：V试样落液定容体积，单位为毫升（ml.)：试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值，
9精密度
保留时间/min
本标准的精密度数据是按照（G1/T\3379.和G3/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值以95的川信度来算，
9. 1 重复性
在重复性条件下，获得的次独主测试结果的绝对差值不超过重复性限，畜离肉中十六种磺胺含量范围及重复性方程见表3。
药物名称
磁胺醋酰
磺胺甲壁二唑
磺胺…甲异哆唑
磺肢氯呕嗪
磺胺嘧啶
磺晓中品德唑
磺胺喔哦
磺胺6甲其啶
磺胺中基嘧啶
醍胺邻。年氧嘧涟
磺胺吡啶
磺胺对甲氧密啶
癫胺甲氧哒嗪
磺胺二甲嘧淀
磺按芡吡唑
磺胺间二甲氧嘧啶
表3含量范围及重复性和再现性方程含量范围/（2g/kg)
5.0--100.0
5.0--105.0
3. 0~-100, 0
1c. 0.-.200. 0
:. 0--103. 0
5.0.-105,0
5. 0 -~ 10:1. 4)
3. 0.~ 100, C
20.0.--403.0
10. 0--200. 0
20. 0--400. 0
30.0-~603.0
10.0.~200.0
注：引为两次测定值的算术半均值。贡复性限r
Igr-0. 833 7igm :, 8a1: 8
Igr -:1. 148 21gm-2, 206 2
Igr-0.916 6lgr: C.949 8
Igr-- 1, 037 0lgm-:. 104 9
kgr-1. 006 5lgm2. 095 7
Igr-1. 003 9lgm—1.132 0
Igr -.C. 895 8lgm-0. 873 4
Igr=C. 815 6lgm--0.752 3
Igr= 1. 246 8lgm-1. 441 5
Igr- 181 81gm 1.213 1
1gr—0. $67 2lgm-1. 026 (
Igr-0. 778 9lgm-0, 584 2
Igr-0. 817 3tgm -0. 822 5
igr=0. 970 2igm-0. 997 0
1gr-1. 083 9tgm 1. 199 4
Igr—1. 069 7lgm-1. 302 0
GB/T 20759—2006
再现性限R
IgR=0. 885 7lgm -- 0, 473 6
IgR-0. 872 olgm: 0.671 9
IgR.. 0. 972 1gm-0. 764 8
gR-3.762 9lgm—0.481 1
lgR-0. 86? 6lgm 0. 707 7
Igk-0. 766 9lgm: -0. 472 5
gR-0,779 21ym—0. -13 7
IgR-5. 842 2Igm--0. 613 9
IgR- 0. 016 9lgm-0. 7C2 4
lgR 3. 886 lm0. 694 4
gR-- 0. 855 1lgm 0. 671 6
igR-0. 788 01gm-0. 150 2
ig-0. 738 5lgm-0. 449 8
IgR--0, 855 4g-0. 589 2
1gR-1. G13 1lgmt 0. 823 3
lgR-0. 763 7lgm -t1. 121 8
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性
在内现性条件下，获得的两次独文测试结果的绝对差值不超过再现性限尺.畜离肉小「六种磺胺的含量范围皮再现性方程见表3.
GB/T20759—2006
附录A
(资料性附录）
标准物质总离子流图
A.1-f-一种磺胺混合标准物质总肉子流图，见图A.1。6. 1c4
102141618202224262830
磁胺醋酰，2.61min;
碘胺甲障.唑-4,64 mir;
磺胺嘧啶：5.20mi；
磺胺繁哒嗪,6.51 min;
础胺甲基异啮唑,5.21 min:
磺胺甲基嘧啶,9. 93 min;
磺胺吡啶,11.62 min;
磺胺对甲氧嘧啶，12.65 min;
磺胺甲氧哒嗪.17. 28 mi:
磺胺苯吡唑.22.29mim
磺胺间二甲氧密啶，28.97i：
图A，1十一种磺胺混合标准物质总离子流图A.2五种磺胺泥合标准物质总离子流图，见图A，2. 5. Ge1 1
1. ne:4 -
胺.甲异噬胖，1.lmin;
磺肢嘧唑,3.15 m12;
磺胺 8 甲氧嘧啶,9.48 min；
磺胺邻甲氧密啶,11.29 msitl;
磺胺二嘧啶,17. 95 rrin.
图A.2五种磺胺混合标准物质总离子流图附录B
（资料性附录）
回收率
本方法中十六种磺胺添加浓度及其平均收率的试验数括，见表B.1.表 B.1十六种磺胺添加浓度及其平均回收率的试验数据药物名称
磺胺醋酰
磺胺甲藻二唑
磺胺嘧啶
磺胺氯哒嗪
磺胺甲基异曬唑
磺胺甲基嘛啶
磺胺吡啶
磁胺对甲氧嘧啶
添加浓度/(ig/kg）
GB/T20759--2006
平均同收率/（%）
GB/T 207592006
药名称
磺胺中氧啮嗪
磺胺苯吡哗
磺腰间二月氧瞬啶
磺胺甲异腰唑
磺胺-6-中氢嘧啶
胺喹唑
磺咳邻二巾笔啶
磺胺甲崎啶
表 R.1(续)
添圳浓度/（ug/kg）
平均回收率（号)
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