【国家标准(GB)】 畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定 液相色谱-紫外检测法

ICS 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T20755—2006
畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Method for the determination of nine penicillins residues inlivestork and poultry muscles-LC-MS-MS method
2006-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-03-01实施
本标准的附录A和渐录B为资料性附录，本标准由中华人民共和国秦室岛山人境检验检疫局提出。本标滩出中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。本标准起带单位：中华人民共和国泰皇岛出人境检验检疫局。GB/T20755-—2006
本标准主要起草人：庞国芳、李学民、张进杰、尊彦忠、刘晓茂、范春林、刘永明、赵为本标准系首次发布的国家标准，范围
葡禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T20755-2006
本标准规定广牛，羊，猪利鸡肉中儿种青霉素类药物残留量的液相负谱-串联质谱测定方法。本标准适用十牛,羊、猪和鸡肉中儿种肯霉系类约物残留量的测定，本标准的方法检出限:蔡大西林为 0.25 \g/kg,霉素 G 为 0. 5 μg/k.哌应西林,青霉素 V、苯唑西林为1.0μg/kg，阿西林，氨下四林、氯哗西林，双氯西林为2.0μg/kg2规范性引用文件
下列文件中的条款通过木标准的引用而成为本标推的条款。凡是注口期的引用文件，具随后所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标推，然而，鼓励根锯本标理送成协设的各方研究是否可使历这些文件的最新版，凡是不注口期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1 - 2004,1S() 5725-1:1994,IDI)CB/T6379.2测最方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标难测量方法重复性与再现性的基本方法（G13/T6379.2—2004,ISO57252:1994,IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--1992.neqIS(）3696：1987）3原理
试样中青需素类药物残留用0.15 mol/I.磷酸氢钠(pH一8.5)缀冲溶液提取，经离心，上清液用固相睾取杆净化，相色谱串联质谱仪测定，外标法定量，4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GR/T6682规定的-·级水。4.1中醇：色谱纯。
4.2乙腈：色谱纯，
4.3磷酸氢钠(NaH,PO4)
4.4氨氨化钠，
4.5艺酸，
4.6乙腈水(1！1):量敢50 rL乙睛(4.2)与 50 nL水混合4.7氢氧化钠溶液：5mo:/1。称收20\氢氛化钠(4.1),用水溶解，定容个100inL，4.8磷酸.氢钠缓冲落液：0.15mol/L：称取18.0g磷酸二氢钠(4.3)用水溶解-定容至1000ml.,然后用氢氧化钠溶液(.7)调节至pH一8.5。4.9阿莫西林、氨芒西林、拉西林、市舜素（、青霉素V、苯西林,氯唑西栋、蔡犬西林.双氯西林儿种青霉素标准物质：纯度9%，
4.10九种青霉素标准储备溶液；雅确称取适罩的舟种标准物质（1.9)，分别用水配制成浓度为1.0 mg/ml.的标难储备溶液。储备液贮存在一18℃冰柜中4.11九种背霉素标推王作溶液：根锯需要吸取适量的衔种背霉素标准储备溶液（4.10），用宰凸样品提GB/T 20755--2006
取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液4.12BUINDFL.UITC固相萃取柱或相当者：5(0mg，6ml.。使用前分别用5ml.甲醇（4.1）5mL水和10)m.酸二氢钠缓冲溶液(4.8)预处埋，保持杜体湿润。4. 130.2m滤膜，
5仪器
液相色谱串联四极杆质谱仪，配有电唢雾离子源，5.2
分析平：感景0.1mg和0.01H，
振荡幕。
固相萃取真空装置。
贮液器：50InL
微量注射器;25 μI.,100 I.。
刻度样品管:5 nL,精度为0.1 nlL..离心机:带有 50 ml. 具塞离心管。FH计:测量精度 0. 02 pH 单位。5. 9
测定步
6. 1试样溶液的制备
称收3试样（精确到0.01)置下离心机(5.8)中,加人25 ml.磷酸二氢缓冲溶液(4.8)，于振荡器上振荡 10 min.然后、以4 000 r/min离心10 min,把上层提取液移至下接BUND ELLT C,固相苯取柱(4、12)的贮液器中,以3 ml./min 的流速通过固相萃柱后,而 2 ml 水洗柱，弃去全部流山液。而3L乙睛十水（4.6)洗脱收集洗脱液于刻度样品管（5.中，用睛一水定至3tmL摇勾后，划0.2m滤膜（4.13).供液相色谱-联质语仪测定，按照上述操作步骤制备空白样品提取液6. 2 测定
6.2.1液相色谱条件
色谱柱:SunFirerM Cis，3.5 nn,150 mnx2. 1 mn(内径）或柑当者;流动相梯度程序及流速见表1：
柱说:30℃：
进样量：20ul.。
流速！
(μt[./min)
流动相梯度程序及流速
水含0.酸)
乙（含0.%乙酸）
（%）
6.2.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源：
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应监测；
电喷雾电压：5500V；
雾化气力：0.055MPa;
气帝压力.0.079 MPa：
辅助气流速：T./min
离子源温度：400℃,
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定性离于对、定量离子对和去簇电压（DP）、聚焦电压（FP）、碰撞气能量（CE）及碰撞室出口电压(CXP)见表2。
九种雷霉素的定性离子对、定量离子对、去簇电压、聚焦电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压定性
阿奠西林
amoxicillin
氮卡西林
anpielin
娠嗪西林
Figerareillin
青莓紫
Penieillin G
青莓素√
PeneilinV
苯唑西林
oxecillin
cloxucillir免费标准bzxz.net
蔡犬西杜
nafeillin
双氯西殊
dieloxaet:lin
离子对
366/:14
366/208
350/292
350/160
518/160
518/143
335/160
3357176
351/160
Sa1/192
4c2/160
4C2/243
4367160
4367277
115/171
170/160
170/311
6.2.3液相色谱-串联质谱测定
6. 2. 3. 1 定性测定
离子对
366/205
350/160
518/143
335/16:0
351/163
402/160
4:36/169
415799
170/160
碰撞气
能量/
电压/
电压/
碰撞室
出口电压/
选择种待测物质的一个母离了，三个以上了离了：在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与基质标准溶液中对应物质的保留时问偏差在土2.5火之内：样品色谱图中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准溶液的色谱图中离子相对半度相比,若偏差不超过表3规定的范国,则可判定为样品中存在对成的待测物：
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相对离了-[度
允诈的最大偏差
6.2.3.2定量测定
表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差5
>20~50
10 --20
用九种青霉索标准储备溶液配成的基质混介标准溶液(4.11)分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准下作曲线。用标准下作曲线对样品迹行定量，样品溶液中九种背莓索的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，九种青毒素标准物质的总离子流图参见图 A. 1。九种青霉素的保留时间见表 4。表 4 九种青睾素的参考保留时间青霉素名称
阿莞西林
芋西林
赈拉西林
苯唑西林
氯唑西林
蔡夫西林
双氯西林
本方法的添加回收率数据参见表B.1：6.3平行试验
按上述步骤，对同一试样逊行平行试验测定。6.4空白试验
除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。7 结果计算
试样中青霉素残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：X=c
式中：
试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（ug/kg)；保留时间/min
从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样溶液定容体积，单位为毫升(ml.)：最终试样溶被所代表的试样质量，单位为克（g），注：计算给果需将空凹值扣除。精密度
本标准的精密度数据是按照（F13/T6379,1和GB/T6379,2规定确定的.其重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
8.1重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独测试结果的绝对差俏不超过重复性限一，试样中儿利青霉素含量范国围及重复性方程见表5。表 5 九种青霉素含量范围及重复性和再现性方程青霉紫名称
阿莫西林
氨苦西林
哌拉酉林
青霉素
青素V
茉唑西林
氯唑西林
蝶夫西林
双氧西椿
含量范围/(ug/kg)）
2~·20
0.25~-2, 5
注：新为两次测定结果的算术平均值。重复性限？
1gr=0.9248lgm—1.573
Igx-0, 551 Ilgan 1.353 1
+.: 0. 018 2m -C, 026 2
Igr=0. 325 2gm 1. 326 0
Igr=1. 496 31gm-1. 751 3
Igr=0. 871 3lgm—:.432 3
Igr-0.831 31gm1.33*7
Igr-c. 998 0gm-1. 192 7
Igr—:.280 0lgn-1.679 1
GB/1 20755—2006
冉现性限R
IgR-0. 988 11gm0. 945 1
IgR-C. 9S5 7g ---0. 946 4
IgR=0. 903 0lgm -0. 961 6
Igl-0. 968 31gn-- 5. 952 7
IgR-1. 020 1lgm 0. 975 4
IgR--0. 992 1lgm-0, 961 6
lgk-0. 097 31gm--0.958 2
R=0. 108 1m 1-0, 000 4
IgR-1.031 3lgm0. 382 3
如果两次测定值的差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。8.2再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，试样中九种击霉素含量范国及重复性方程见表5。
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（资料性附录）
九种青霉素标准物质的总离子流图九种寿霉素标准物质的总离子流图见图A,1.3.9e5
阿莫西林，2.50min
冤芋西林,9.82 mir;
哌拉西林.11.79 min;
青素(i,12. 71 min:
5 ..-—青幕素 V,13.48 inin;
苯唑西林，14.18min
氯唑西林,15,22min：
蔡夫西林,15. 45 min
双筑两林,17.30 min,
图 A.1九种青霉素标准物质的总离子流图5
附录B
（资料性附录）
回收率
九种青得素添加浓度及其平均问收率的试验数据，见表B.1表B.1
九种青霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据青霉素名称
冈莫西林
岚芸西林
哌拉西林
青霉素G
青霉素V
蔡夫西林
苯唑西林
氯唑西林
双氯西林
添加浓度/(ng/kg）
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回收率(%)
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