【国家标准(GB)】 牛肌肉、肝、肾中的α-群勃龙、β-群勃龙残留量的测定 液相色谱-紫外检测法和液相色谱-串联质谱法

1范圈
G3/T20760—2006
牛肌肉、肝、肾中的0-群勃龙、群勃龙残留量的测定液相色谱-紫外检测法和液相色谱-串联质谱法本标谁规定了肌肉、肝、肾中α-群勤燕解窈龙双雷盈椒题相色谱-紫外检测法和液相色谱-串联质语测定方法。
本标准适用于牛肌肉、肝、些串α-群勃龙辛群勤宠残留竖的测定。本标准的方法检出限：α-群，群勃龙的液相色谱-紫外橙法和液色谱-市联质谱法的检出限均为2g/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款逆本标准
的修改单(不包括勘的容)或修
是否可使用这些文伴的最新版本。GE/T 6879.11方法与线
(GR/T 6379. 12004SO 5725-1.
GB/T6379.幸刚意方法与结聘
性与再现性的基本摆GB/T8379
GB/T 6682
3原理
新实验室用水
家样下加酶水
试样在 pH=5.
挂化，用就有紫外橙狮器液祖谁试剂和材料
期的引用文御
疏骗度
注口期曾的引文件，其随后所有龈船本标维达魔协议的各方研究强本适用于体标准。
第1部绿：总则与定义
2部分：确漫标满谢量方法重复
.neqISO3$96:1987)
整凝胶色净悠仪（GPC)利硅胶
外标法楚屋
除另有说明外+所月试剂均为效析纯，水为GB/T6682规定的一一级求
甲醇：色谱纯。
4.2乙酸：色谱纯。
之睛：位谱纯
乙酸乙酯。
4.5环烷。
丙酮。
正已烷。
B-葡萄糖苷酸酶和芳然硫酸酯(B-gluclronirlaseand aryl sulfatase)：loo oo0 unit/m-。乙酸乙酯+环己烷：50+50。
4,10 丙酮－正已烷：10一90。
丙酮+王已烷：30+70。
4.12乙酸钠缓冲液：0.02mo1/TpH=5.0。称取无水乙酸钠0.82g溶于500mL水中，用乙酸调节pH=5.0.
GB/T20760—2006
4.13α-群勃龙β-群勃龙标推物质：纯度≥98%。4.14标准情备溶液：分别精确称取a-群勃龙、β-群勃龙标准物质（4.13)各0.0100g，用乙臂（4.3)溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的标谁储备落液，此溶液一18℃冷冻保存，可使用六个月。4.15混合标准工作浴秘：取标准储备搭液《414）各5mL室50L容塑瓶中，用艺脑定容至刻度，配制成混合标准作溶液，浓度为10μg/mL，批溶液78℃冷冻保存，可使用三个月。4.16硅胶固相萃取柱：500m，3mL;使用前用5mL丙酮+正已烷（4.10)预处现，保持柱体湿润。4.170.45μ滤膜。
5仪器和设备
5.1液相色谱仪配有紫外检测器。5.2液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(EST)。5.3凝胶色谱仪。
5.4均质器。
5.5旋转蒸发仪。
5.6 旋涡混合器。
5.7离心机:最大转速 5 000 1/min。5.8算气液缩仪。
5.9潮湿水浴摇店。
6试样的制备与保标
6.1试样的制备
牛肌肉、肝、肾组织用组织揭碎机绞碎，分出0.5kg作为试样备用。6.2试样保荐
制各好的试样置于一18℃冰栖中避光保存。7测定步骤
7.1混合避质标准校准溶液的制备7、1.1试样的称取
称取5个阴性样品，每个样品为5g（精确到0.01，置于50mL具塞离心誉中，再分别加人不同最混合标准工作溶液（4.[5），便各被测组分的浓度均为2.5ng/mL，5ng/mL、10ng/ml、50ng/mL、100 ng/mL:
7.1.2提取
向上述盛有5个阴性样品的50mL具塞离心管中，加入5mL乙藏销缓冲液（4.12)和20μL9-衔萄糖苷酸酶和芳基硫酸（4.8），摇勾后盖好塞子置于恒温水浴摇床（5，）上，了℃振荡水解过夜（25h）。待水解液冷却至室温后，加人20mI乙殿乙酷，在均质器（5.4)上以10000z/min的速度均质提取1min后，30001/min高心（5.7）10min，将上清液过滤至鸡心瓶中。币用20mL乙酸乙重复提取一次，合并上消液于同一鸡心瓶中。7.1.3净化
7.1.3.1疑胶色谱仪(GPC)条件
a）净化柱：22$-X3Bin-Beads填料，200耳~400月，200mm×25mm（内径）或相当者：b）流动相：z酸乙酯+环己烷(50+50),流速5.0 ml/min；2
c）定环:5 mL;
GB/T 20760-2006
d）净化程序:0 min~10.5min弃去洗悦液,10.5 min~15,5 min收洗脱液，15.5min~18 min弃宏洗脱液。
：-7.1.3.2GPC及础胶固相萃净化将提取液在45℃下蒸至近下，用乙酸乙醋十环已烷（4.9)定容至10mL的玻璃试管印，接7.1.3.1中GPC条件净化：净化后将收集的洗脱微蒸于，用3mL两阐十正巴烷（4.10）旋涡派满（5.6）溶孵残渣，将溶被转移到预洗过的硅胶固相辈取柱（4.16）上的贮液器中，然后再用3mL两酮十正已烷（10十-90）溶解一次，将合并的落解激过硅胶固相萃取柱，接著用3mL丙酮+正巴烷（10+-90)淋洗硅胶柱，最用5mL丙+正已烷（4.11）洗脱分析物并收集。洗脱液用微气浓缩仪（5.8)在60℃水中吹于，用1mL流动相旋涡振荡溶解，过0.45um滤膜（4.17)供液相色谱-紫外检测和液相色谱-串联质谱测定。
7.2试样溶液的制备此内容来自标准下载网
称取待测样品6g（精确到0.01g）于50mL带塞离心管中，接7.1.2和7.1.3操作。7.3空白基质溶液的制备
称取性栏品5g（籍确到0.01g)于50mL.带鑫离心管中，按7.1.2和7.1.3操作。7.4液相色谱法测定
7.4.1液相色谱条件
a）色谱柱：DiamonsilC5μm，150mmx4.6mm（闪径）或相当老：b）流动相：0.1%乙酸水溶液-乙-甲醇（50-F20+30)；c
流速：l.0mL/min:
d）检测波长：845mm；
胜温：40℃；
进摔最：50mL
7.4.2色谱测定
在仪韶晟佳工作条件下，对基质混合标准校准溶被进样，以峰面积为纵坐标，基质混合校准溶液浓度为横坐标绘制标雄工作山线，用标准工作曲线对样品逆行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器定的线性范围内。在上述色谱条件下，β-群勃龙、-群勃龙的保留时间分别约为11.2mim和13.4min。标准物质的液相色谐阁参见图A.1。本方法的源加回收率数据参见表B.1。7.5液相色谱-串联质谱法測定
7.5.1液相色谱条件
色谱柱：InertsilC，5um，150mm×2.1mm（内径）或相当者；a)
流动相：0.1%乙酸水溶液+乙腈（62+38)；流速：0.3mL/min
色谱柱温度：35℃：
进样量：20mL：
质谱条件
a）离子源 ESI,正模式；
雾化喷嘴压力：0.24MPa
干爆气流摄9.0L/min
干燥气温度：350℃C：
e）毛细管电压、去簇电压、碱撞电压等电压值应优化至最优灵敏度；检测离子对见装1。
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被测物各称
9-弹勃龙
-群勃龙
定盘离子。
7.5.3定性测定
被测物的保留时间、母离子和子离子保留时阅/ni
海商（m）
子离子(m/)
每种被测组分选择1个性离子，2个以上于离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质混合标准校准溶液中对应的保留时敲储整在三2.多之月样品谱图中各组分定性离子的相对半度与浓度接近的基质混合标准校臀液谱图中对应的定性离子的格车度进行比较，若偏差不超过表2规定的范，则可判定为样中存在对庭的得测物。泰
相对离子度
允许的相对误差
7.5.4定测定
，性确证时相对离子丰度的最大妊误差se
在仪器最佳工作就对基质
度为债坐标绘制标滑：作痛线，用标鼎测定的线丝范用瘦选色谱和
本方法的添加馨效据参见者
苹行试验
按以上步骤，对间一试式样行平7,7回败率试验
吸瑕适量混合标雅工作榕薇，得度的标准校准游液。
结果计募
群品中添加
试样中被测组分残阐妞数
武中：
220~50
对样品进行
示越凝离三
镀的混合标连祥
系统计算拨式（1）计算
×1000
X试样中被测组分残留量单位为薇每丢点&k>1020
织坐标基质绳合校推溶液浓
容液中待测物的韵应值均应在仪图A.2.
日基质溶液（7.稀释戒所需浓
样品添加的回收率。
c——从标准工作用线得到的被泌分溶液浓度，单位为纳京笔升（ng/mL)；—样品溶液最终定容体积，单位为掌弃T2
9精密度
样晶溶液所代表最终试样的辈，单位为克(g)本标准的清痛度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以 95%的可信度来计弹。
9.1无复性
在雪复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，被测物的含量范围及重复性方程见表3。
裁别名称
P群勃龙
r-群教龙
表3两种群勃龙的含邀范阖及重复性和再现性方程含量范因/《uμg/kg）
無复性限？
Ig r=0. 437 6 Ig m-0. 712 2
lg r 0. 499 o 1g m 0. 754 3GB/T20760-—2006
再现性暖R
1g R-0.5430 ig m-0.526 2
Ig R0, B25 3 ig -0, 720 7
注：的为两饮浏定结果的算术平均值。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并量新完成两次单个试验的测定。9.2再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的含邀范圈及再现性方程见表3。
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附录A
（资料性骑录）
标准物质液循色谱图
A.1α-群勃龙、β-群勃龙标雅物质的色谱图，宠图A.1。3.0
白-菲勃龙
a-鞘勃龙
图A，1α-群勃龙、阝群勃龙标准物的色谱图A.2、α-群勃龙、F群勃龙标准物质的选择离子1.C-MS-MS图，见图A.2。Anietis
α-游勒龙
图A.2α-群勃龙，I-群勃龙标准物质的选择离子LC-MS+MS图16
fhemin
附录B
【资料性附录）
回收率
GE/T 20760—2006
群勃龙的添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B1。装 B.1群勃龙的添加浓度及其平均回收率的试验数据(n=10)添加水孚/（g/kg）
被洲物名称
群勃龙
u-群勃龙
平均回收率/<%)
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