【国家标准(GB)】 鳗鱼及制品中十五种喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T 20751-2006
鳗鱼及制品中五种喹诺酮类药物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Method for the determination of 15 quinolone residuesin eels and eel products--
LC-MS-MS method
2006-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-03-01实施
本标雅的附录 A和附录B为资料性附录。言
本标推由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总届归口。GB/T20751-2006
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、食品安全分析与检测技术教育部重点实验室(福州大学)。本标雅主要起草人：庞国芳、杨方、刘正才、余孔捷、卢声宇、李耀平、陈国南。本标雅系首次发布的国家标雅。1范围
GB/T 20751—-2006
鳗鱼及制品中十五种喹诺酮类药物残留愛的測定液相色谱-串联质谱法
本标准规定了鳗鱼及制品中十五和喹诺酮类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于鳗位及制品中五种喹诺酮类药物的测定。本标准的方法检出限：十五种喹诺谢类药物的检出限均为5ug/kg，2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用函成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修收单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的备方研究是否可使用这些文件的最新版木。凡是不注H期的引用文件，其最新版术适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 8379.12004,ISO 5725-1:1994,IDI)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/I6379.2-2004,ISO.5725-2:1994,IDT)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--1992，neq1S)3696：1987）3原理
试样中残留的喹诺酮类药物采用乙腈提取，提取液经正己烷液液分配脱脂后，以强阳离子固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水：4.1乙睛：色谱纯。
4.2中醇：色谱纯，
4.3正已烷。
4.4浓氨水。
中酸。
4.6 乙铵。
无水硫酸钠：650℃灼烧4h，冷却后储于密封容器巾备用，4.8氨水+甲醇：25--75。量取25mL氨水（4.4）以甲醇（4.2)定容100ml,混匀4.9甲酸溶液：0.1%。移取1mL甲酸(4.5).以水定容1L。4.10乙酸铵缓冲液，10mmol/L。称取0.77g乙酸镂（4.6），溶于约70）ml.水中，以甲酸调节PH-.6,以水定容1 L
4.11十五种喹诺酮类药物标谁物质：氟罗沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、洛美沙星、单诺沙、奥比沙犀、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、嗯噻酸、萘啶酸、氟甲喹，纯度均≥98%。4.12标准储备溶液：10)mg/L。准确称取十五种喹诺酮类药物标准物质（4.11)各10.0mg，分别用甲醇溶解并定容至100mL，该标储备液置于4℃冰箱中可保存个月。GB/T 20751---2006
4.13标准工作溶液：根据需要取适量标推催备液（4.12），以甲酸溶液（4.9十乙睛（4.1)(9十1)稀释成适当浓度的混合标准工作溶液。标准工作溶液要现配现用，4，14强阳离子交换柱（SCXSPE柱或相当者：500tng3mL用前依次以3mL甲醇、3ml.水、3ml10mmol/1.乙酸数缓冲液（4.10)活化，保特柱体湿润4.150.22mm滤膜。
5仗器
液相色谱-串联四极杆质仪，配有电喷雾离子源。5.1
分析天平：感量.0.1mg和0.01g，5.2
组织捣碎机。
旋涡振荡器。
分散器：转速戚达到10000r/min。超声波发生器。
5.7.氮气浓缩仪。
固相萃取装置：
真空泵：真空度应达到80kPaa
5. 10 微景注射器:1 mL～~5 mL,100 μL~1 000 μL5. 11
离心机：转速应达到4000z/min
6试样的制备与保存
.6.1试样制备
鳗鱼去头，将皮、肉分离后先取鱼皮置于微波中，以中高坊率加热30s后取出切成小块，将鱼肉切成小块：将二者一并放入组织搞碎机均质，充分混勾，装人清洁容器内，并标明标记。鳗鱼制品取可食部分切成小块，放人组织捣碎机均质，充分混匀，装入清洁容器内，并标明标记。制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2试样保存
试样于—18℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2℃~6℃贮存72h。7测定步骤
7.1提取
称取5g试样（精确至0.01g）置于50mL丙烯离心管中，加入约5g无水硫酸钠（4.7），25mL乙睛，使用分散器（5.5），在10000r/min分微提取30s，4000r/min离心（5.11)5min，l：消液转移至50ml.比色管中，另取一50ml离心管加人15ml乙，洗涤分散刀头10s，洗涤液移人第~支离心管中，用玻搅动残渣，旋涡振荡（5.4）提取1min，超声波振荡（5.6）提取5min，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，线渣再灿人15ml.乙晴，旋涡振荡提取1min，4000r/min离心5min，上清液合并室50mL比色管，乙睛定容至50.0mL。摇勾后移取10.0mL乙提取液，以2×5mL正已烷（4.3)振摇脱瞻，使用氮气浓缩仪（5.7)在35℃下氮吹至近干，如太3mL乙酸铵缓冲液（4.10），旋涡振满30s，待净化。
7.2净化
将7.1所得的溶液以约1ml./thin的流速全部通过强阳离子交换柱(4,14).抽干，先后以1.5,mL中醇3mL氨水+甲醇（4.8)洗脱，合并洗脱液，35℃下氮吹至近下，以甲酸溶液（4.9）+艺晴（4.1)（9+1）定容至1mL、过.0.22.um滤膜（4.15）、供液相色谱-串联质谱分析。7.3.空白基质溶液的制备
称取阴性样品5g（精确至.0.01·客），按7.1和7.2操作。2
7.4测定
液相色谱条件
色谱柱：Ci，5mm，150mm×2.1mm或相当者：柱温：30℃；
流速:200 μL/mim;
进样量：20μL！
梯度洗脱，洗脱程序见表1。
表1液相色谱梯度洗脱程序
时间/min
质谱条件
流速/μL/min)
离子源：电喷雾源EST；
乙睛/（%)
扫描方式：多反应监测（MRM)，正离子模式离子源温度：490℃，
甲醇/(%)
GB/T20751—2006
0.1%甲酸/(%)
雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氨气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测求
噬蓄电压！去簇电压，碰撞能等电压值应优化室最优灵缴度：定性离子对、定罩离子对、去簇电压和溅撞气能量见表2。表2十五种喹诺酮类药物的质谱参数药物名称
氟罗沙星
氧氟沙星
依诺沙星
谱氟沙星
环内沙星
恩诺沙昱
洛美沙显
英文名称
flercxucin
ofluxacin
efoxacin
eflaxaein
ciprofloxacin
enrofloxacin
lomefloxarin
斑性离了对
370.4/326,4
370.4/269.4
362,4/318.4
362.4/261.3
321.1/303.4
321.1/232,2
320,4/276.6
320,4/233,2
332, 4/288.3
332.4/245.3
360.6/316.4
360.6/245.1
332,3/308.4
352.3/265,4
定量离子对
370.4/326.4
362.1/318.4
321.1/303.1
320.4/276.6
332.4/288.3
360.6/316.4
352,3/308,4
碰撞气能盘/V
碰撞池出口电压/V
GB/T 20751—-2006
药物名称
单诺沙里
奥比沙革
双氟沙星
沙拉沙单
司帕沙星
嗯噬酸
萘啶酸
英文名称
dancfloxacin
orhifloxacini
difloxacin
aTafloxacin
spatfleaxacir
oxolinic acid
nalidixic acid
luncquin
7.4.3液相色谱-事联质谱测定
定性离子对
(Gn/e)
358.3/340,3
358.3/283.4
396.3/352.3
396.3/295.4
.400.1/356.2
40门.4/299.3
386, 1/342. 3
386.1/299.2
393.3/349.4
393. 3/292.4
262. 3/244. 2
262. 3/216. 3
233.3/215.2
233.3/187.4
262.3/244.3
262,3/202.3
表2(续）
定量离子对
338.3/340.3
396, 3/352. 3
400.4/356.2
386.4/342.3
393.3/349,4
262,3/244.2
233.a/215.2
262.3/244.3
碰撞气能量/V
趣撞池出口电压/V
7.4.3.1定性测定
每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离了，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混分基质标准校推溶液中对应浓度标准校准溶液的保留时间偏差在土2.5兴之内：且样品谱图各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对半度逃行比较，荐偏差不超过表3规定的范围，划可判定为样品中存在对应的待测物表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差州对离子丰度
允许的最人偏差
*20~-50
.210-~20
7.4.3.2定量测定
外标法定量：在仪器晟住工作条件下，对混基质标准校准溶液进样，以峰面积为纵坐标，混合基质校准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标痛工作曲线对样品进行定量，样品潜液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，五和喹诺酮类药物的参考保留时间见表4，『五种喹诺测类药物的多反应监测（MRM)色谱图密见图A.！十五种唑诺酮类药物的添加浓度及其平均回收率的试验数据渗见装·E]。表4。十五种喹诺酮类药物的参考保留时间药呦名称
氟罗莎星
睾氟沙显
筱诺沙星
诺氟沙呈
环丙沙显
保留时间/initi
药物名称
思诸沙星
洛美沙星
单诺沙型
奥比沙望
双氟沙星
保窗时间/min
药物名称
沙拉沙革
可帕沙屌
瞩喹酸
蔡啶酸
氧甲噬
探留时间/min
.10.85
7.5平行试验
接以上步，对间一试样进行乎行试验测定。7. 6 回收率试验
GB/T 20751—2006
在阴性样品中添加适鼠标摊溶液,按7.1和7.2操作,测定后计算样品添加的同收率。8绪果计算
战样中五噗诺酮类药物残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：X—×
式中：
X-试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（g/kg）；C：从标推作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫（ng/nL）；样辫定容体积，单位为毫mI.)：r
试样辫液所代表试样的质量，单位为克（么）注，计算结果应扣除空值、
精密度
术部分的精密度数据是按照GJ3/T 679.1和G3/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以5%的可信度来计算。
9.1重复性
在重复性试验条件下，状得的两次独立測试结果的绝对差值不超过重复性限，被测物的含量池围及重复性方程见表5
氟罗沙鼠
氧氟沙垦
依诺沙层
诺氣沙垦
环丙沙星
恩诺沙星
格美沙属
单诺沙显
十五种喹诺酮类药物的含量范围及重复性和再现性方程含量范围/（g/k）
4, C-~0, 0
5, 0~-40. 0
5.0~.40.0
-5. 0-- 40. 0
5.0~~40,0
5.0--10.0
样品基体
重复性限r
r -- C.316 1 m
r = C. 284 9 m+0, 034 8
r= 0. 302 1 m
— 0. 287 6 vr
0.188 m+0.968 4
- 0, 134 w+1, 612 8
r = U. 219 3 m+0. 112 7
0. 204 1 m.10,560 5
r = 0. 133 5 m / 0, 609 8
r = 0. 221 8 tn-10. 971 7
= 0. 3:5 6 m / 0. 386 2
r = 0. 215 1 m 1 0. 651 9
r . 0. 196 m-10. 115 7
F = 0. 495 7 m
0. 252 2 n—5. 851 4
再现性限R
R 0. 360 5 97
R = 0. 361 5 m
R=0.2080m+0.1299
R -- 0. 276 9 m+0. 324 8
R = 0. 159 9 m+1. 283 1
R- 0.312 6m
R - 0. 202 6 m+1. 228 8
R = (0. 261 8 m [ 0. 121 1
R = 0. 282 5 m I 0. 133
R = (, 269 4 m+-0, 419 2
R = 0. 223 3m/:. 081 3
R = 0. 370 1 m
R - 0.230 6 m-C. 77
R -- 0. 210 m-0. 168 1
R = 0. 367 2 m-C. 0±9 3
0. 276 5 yr--.0. 491 8
GB/T20751—2006
奥比渺显
双氟沙星
沙拉沙
司的钞星
曦噬酸
紫啶酸
氮甲噬
含量范围/(μg/kg)
5, 0--40. 0
5. 0 ~-40. 0
5. 0-[, 们
5. [~40. 0
5.0~-40.0
注：m为两次谢定结巢的算术平均值，表5（续）
样品基体
重复性限7
= 0. 232 5 m
r - 0. 211 m
0.3163 nz+0.358 7
r = 0. 289 3 m
= 0. 291 9 m
r = 0. 21 m
r = 0. 250 5 m+0, 491 7
r = C. 177 6
r = 0. 395 8 m
r = 0. 200 7 m+1. 176 1
r= 0. 249 m+0. 449 7
r=0.196#+0.2194
: r=0.243 w+0, 474 9
r = 0. 453 m
再现性限R
R -- 0. 260 4 m+0. 599 7
R = 0. 256 T m+0. 230 4
R = C. 839 7 m+0, 488
R = C. 367 2 m+0, 059 3
R = c. 303 1 m
R = 0. 25 m
R= 0, 258 8 m+0.287 1
R = 0. 290 2 m
R 0. 385 m+0. 463 2
R 0. 269 3.m1. 315 G
R = 0. 404 4 m-0. 436 1
R = 0. 364 1 m
R 0. 288 6 m+0. 680 8
R 0, 203 2 m+C. 673 5
如果差简超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性
在再现性试验条作下，状得的两次独立测试结果的绝对煮值不超过再现性限R，被测物的含量范围及再现性方程见表5。
附录A
【资料性附录】
·十五种喹诺酮类药物标准物质的多反应监测(MRM)色谱十五种喹诺酮类药物标准物质的多反应监测(MRM)色谱图，见图A.1a. Ce4+
L Oet+
氧罗沙里
6 8 10 22 14 16 18 20
“华氨沙里
810214161820
猎英沙里
. Qrid
10121461820
双氧沙型
101214181820
14181H20
2 4 6 10 12 1 16 18 20
环丙汐显
101214161820
单诸涉星
70 12 14 13 19 20
拉沙革
2 46810 1214 16 18 0
3810/21416820
做诺沙呆
GB/T 20751--2006
80240820
思诺里
0121161820
奥比沙虫
0 12 14 16 t8 20
创帕至
81021418180
氧甲降
a810 1214 161820
干五种唑诺酮类药物的多反应监测(MRM)色谱图GB/T20751—2006
附录B
（资料性附录）
十式种嗪诺酮类药物的添加滋度及其回收率范用的试验数据，见表B.1表 3. 1
唑诺类药物
氟罗沙垒
氧氰沙望
依诺沙屋
诺氟沙垦
环丙沙星
恩诺沙星
洛美沙星
十五种座诺酮类药物的添加浓度及其回收率范围的试验数据添加浓度/(ug/kg)
回收率范围/（%）
69, 6 -~ 93. 6
68.0 *~ 105, 0www.bzxz.net
68. 5-105.5
65.3*~104:0
75. 8 -~ 98, 2
75.3~104.0
82, 5 ~ 97,c
65.5 ~~ 97,.3
67. 4 ~ 98. 0
79.0 - 100: 0
78.5 ~ 103. 0
64. 8 ~- 101. c
68. 2. ~ 97. 0
34, 7 ~ 102,
73. 0 ~~ 9%5
68. 8 -~ 97. 5
68.2 ~ 91. 0
78.4 -~ 101. 0
79. 0 -~- 97. 5
71. 5. ~- 102. 8
65.8 -~ 98.2
80.8 ~ 105, 0
70.5 -~ 98,5
77. 5 ~ 96, 5
68.8 --. 98.0
75. 3 104.0 :
74. 0 ~. 96, 0
73.5*-- 100,8
75, 8 ~- 101. 2
75: 5 ~ 93 1
75. 5 -~ 98, 5
79.8 ~- 94,5
73. 8 -- 90, 4
76.1.~ 91, 1
75. 5 ~ 98. 5
73. 3 ~~ :04. 8
74, 0 -~ 100. 4
73. 2 -~ 88. 4
73.0 ~~ 92, 0
75.0 - 96.0
76,2~103,8
74. 0 ~- 93. 5
76. 5 ~: 118. 3
79. 5. -~ 94. 8
77.8 ~* 94. 4
72.7 - 98. 4
75.0 ~33. 5
72. 8 - 90. 8
73.2～100,4
70.0 ~86.2
64. 0 ~ 96. 3
61.3 ~ 96,8
.69.4, *- 94. 4.
73. 6 ~06,1
75, 5 ~ 108. C
75. 3-. 91.8
唾诺醇类药懒
单诺沙
奥比沙
双氟沙革
沙拉沙虽
司伯沙皇
紫啶较
氟中确
表B.1（续）
加浓度/（μg/ksg）
GB/T 20751—2006
同收率范因（元）
70, 6 -~ 90, 8
70. 9 - 105. 0
74. 5 ~~ 101. 5
65. 0 --- 102. 8
70.6 ~ 85. 4
71.9 ~ 96. 9
78.0-- 92.0
68.8 -. 92.0
72. 6 -~. 97.0
77.1 -94. 9
8..0 -- 99. 5
79.5--- 96. 3
69. 2 .- 94, 2
74.1 --.95.0
71. 5 -~ 103. 0
72.5 --. 97. 3
71.2 --. 83.6
74. 3-. 95. 1
78, 0 -- 100.5
67. 5 *- 99.0
69, 8 -~ 99. 6
73. 2 --- 107.0
72. 0 ~- 105. 0
71.0 -- 107.0
73. 2 ~ 82. 2
78. 2 ~. 98. 0
76.5 -~. 96.0
58.0 -~ 97.8
66. 2 -- 193. 0
79. 6 *~ 93, 5
75. 5 .-- 134. 0
73. 3 - 90. 8
76, 4 ~- 100. 6
68. 9 -- 31. 7
69.C -- 102. 5
75. 8 ~ 92. 8
78. G --- 101. G
76.0 99.0
77.5 -- 99,0
76. 3 -~ 100, 5
69.0 - 94.2
72.9 ~ 94. 8
72, 5 r~ 100, 5
73. $3 -~ 92, 0
75. 2 ~ 90, 8
76. 7 - 102. t
73. 5 -~ 106, 5
75.0 -~ 95,0
79.2 ~ 109. 6
73.2 -~ 96, 4
78. 5-~ 94. 6
73.3 - 99.5
67. 8 ~22. 0
64. 0 ~: 104. 0
74.0 -*-106. 0
70.3-. 93.8
71.2 --: 105,.4
76.3 .~ 107. 0
R5. 5 ~ 100. 0
73, 5 -~ 96. 3
75. 2 ~ 95. 4
74.2 --- 107. 0
77. (f -~ 99. 5
77. 3 -~ 95. 3
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。