【国家标准(GB)】 水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉测定法

1适用范围
中华人民共和国国家标准
水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉测定法
Determination of amylose
in grains of rice,maize and millet本标准适用于水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉含量的测定。2参考标准
GB 5006-—85《谷物籽粒粗淀粉测定法》GB3523——83《谷类、油料作物种子水分测定法》3测定原理
UDC633.1:543
GB7648—87
淀粉与碘形成碘淀粉复合物，并具有特殊的颜色反应。支链淀粉与碘生成棕红色复合物，直链淀粉与碘生成深蓝色复合物。在淀粉总量不变条件下，将这两种淀粉分散液按不同比例混合，在一定的波长和酸度条件下与碘作用，生成由紫红到深蓝一系列颜色，代表其不同直链淀粉与支链淀粉含量比例，根据吸光度与直链淀粉浓度线性关系，可用分光光度计测定。4仪器、设备
4.1粉碎机（实验室用旋风磨）。4.2分光光度计：721型或具有相同性能的其他型号。4.3分析天平：感量0.0001g。
4.4玻璃仪器：50ml具塞刻度试管，100ml容量瓶。5试剂配制
除注明者外均为分析纯，水为蒸馏水。5.1氢氧化钠(GB629—81)，1mol·L-1、0.09mol·L-1水溶液，准确标定。5.2冰乙酸（GB676—78)，1mol·L-1水溶液，准确标定。5.3碘贮备溶液及碘试剂：称2g碘和20g碘化钾（GB1272--77）用蒸馏水溶解并稀释至100m1，即为碘贮备液。取10ml碘贮备液稀释至100ml,即为碘试剂。5.4马铃薯直链淀粉标准溶液：1mg/ml，取烘干（55~~56℃真空干燥）的马铃薯直链淀粉纯品，称取重量相当于含0.1000g淀粉，放入100ml容量瓶中，加入1ml无水乙醇湿润样品，再加9ml1mol·L-1氢氧化钠溶液，于沸水浴分散10min，迅速冷却后，用水定容。5.5支链淀粉标准溶液：1mg/ml，选择与待测谷物样品相应的蜡质谷物标准品，称取重量相当于含0.1000g粗淀粉，放入100ml容量瓶中，加1ml无水乙醇，再加9m!1mol·L~1氢氧化钠溶液，于沸水浴加中华人民共和国农牧渔业部1987-03-26批准1987-11-15实施
热10min，迅速冷却后，用水定容。GB 7648 - 87
5.6石油醚（HG3—1003-76)，沸程60～90℃。6样品的选取和制备
6.1将样品挑选干净（谷子脱壳、稻谷制成精米），按四分法取样20g。6.2用粉碎机将样品粉碎，全部通过0.177mm孔径筛（80号），混勾装入磨口瓶备用。7测定步骤
7.1混含校准曲线绘制
取6个100ml容量瓶，分别加入1mg/ml马铃薯直链淀粉标准溶液0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00ml，再依次加入1mg/ml支链淀粉标准溶液5、4.75、4.50、4.00.3.50、3.00ml，总量为5ml。另取1个100ml容量瓶，加入0.09mol·L-氢氧化钠溶液5ml作空白。然后于各瓶中依次加入约50ml水、1ml1mol·L-乙酸及1ml碘试剂。用水定容后显色10min，在620nm处读取吸光度。以直链淀粉毫克数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线或建立回归方程。7.2．样品测定
7.2.1按GB5006—85《谷物籽粒粗淀粉测定法》和GB3523—83《谷类、油料作物种子水分测定法》测定样品的粗淀粉含量和水分。7.2.2样品分散：称取相当于0.1000g粗淀粉的样品（如按样品干重计算直链淀粉百分含量时，称取样品100mg）于100ml容量瓶中，加1ml无水乙醇，充分湿润样品，再加入9ml1mol-L-1氢氧化钠溶液，于沸水浴中分散10min，迅速冷却，用水定容。7.2.3脱脂：取20ml分散液于50ml具塞刻度试管中，加入7～10ml石油醚，间歇摇动70min，静止15min，分层后用连接在水泵上的吸管抽吸，吸去上部石油醚层。重复以上操作2～3次（精米脱脂二次，玉米、谷子须脱脂三次）。
7.2.4测定：吸取脱脂后的碱分散液5.00ml于100ml容量瓶中，加水50ml，再加人1mol·L-乙酸溶液1ml及碘试剂1ml，用水定容。显色10min后，在620nm处读取吸光度。注：测定样品与绘制校准曲线时的温度相差不能超过士1℃。8结果计算
8.1计算公式
a．直链淀粉（%，占淀粉总量)按式(1)计算：直链淀粉(%，占淀粉总量）=G×100×100-m×5
b．直链淀粉（%，占样品干重）按式(2)计算：G×100
直链淀粉（%，占样品干重）一
m2X5×(1-H)
式中G从相应的混合校准曲线或回归方程求出的直链淀粉质量，mg；mi
-称取样品中所含粗淀粉的质量，100mg，m,--—称取样品的质量，100mg，一水分百分率。
8.2结果表示
（2）
两个平行测定的结果，用算术平均值表示。保留小数点后两位。第三位数的舍入见GB1.1一81《标准化工作导则编写标准的一般规定》附录C。8.3结果的允许误差
两个平行测定值的相对误差，不得超过2%。310
A.1仪器、设备
A.1.1离心机（4000r/min）。
A.1.2电动搅拌器。
A.1.3冰箱。
A.1.4真空干燥箱。
A.1.5磁力搅拌器。
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附录A
马铃馨直链淀粉纯品制备方法
(参考件)
A.1.6232型甘汞电极或具有相同性能的其他型号。A.1.7213型铂电极或具有相同性能的其他型号。A.1.80~1.000V毫伏表。
A.2试剂
除注明者外，均为分析纯，水为蒸馏水。A.2,1氢氧化钠(GB629-—81)，0.5mol·L-水溶液。A.2.2盐酸（GB622—77)，1mol·L-、1.5mol·L-、2mol·L-水溶液。A.2.3正丁醇(HG 3—1012—76)。A. 2. 4异戊醇(HG 3— 996- 76)。A.2.5碘酸钾标准溶液：称取0.1784g碘酸钾（GB651-77，优级纯）用水溶解后，转入1000ml容量瓶中用水定容，即8.34×10-mol·L-lA.2.6碘化钾溶液：称取66.40g碘化钾（GB1272一77)用水稀释至1000ml,即0.4mol·L-1A.3制备方法
称取马铃薯淀粉10g，加少量无水乙醇使样品湿润，再加入350m10.5mol·L-氢氧化钠，放入沸水浴中加热搅拌20min至完全分散，冷却，以4000r/min离心20min，取上清液用1.5mol·L-盐酸调至pH6.5（用pH精密试纸），然后加入1：1V/V）丁醇-异戊醇80ml，在沸水浴中加热搅拌10min，冷却至室温。移入冰箱内（2～4℃）静置24h去掉上层污物层，以4000r/min离心15min，弃掉上清液，沉淀物即为粗直链淀粉。
用饱和正丁醇水溶液洗涤沉淀物（粗直链淀粉），4000r/min离心15min，将沉淀物转入200ml饱和正丁醇水溶液中，在沸水浴中加热溶解（10～15min），冷却至室温，放入冰箱内（2~4℃)24h，弃去上层污物层，以4000r/min离心15min，沉淀物再加200ml饱和正丁醇水溶液加热溶解，反复纯化三次。最后沉淀物用无水乙醇反复洗涤离心3～4次，在真空干燥箱中（55~56℃）干燥。即得直链淀粉纯品。A.4纯品质量鉴定
A.4.1淀粉含量测定
称0.1000g纯品加入10m10.5mol·L-1氢氧化钠在沸水浴中加热分散，再加入21.5ml2mol·L-*盐酸，在沸水浴回流水解2h，用费林氏液法（GB5513-—85《粮食、油料检验还原糖和非还原糖测定法》）测定还原糖，乘以0.9即得淀粉量，计算纯品含量。A.4.2碘-淀粉复合物吸收光谱测定311
GB7648—87
取5.4溶液2ml（1mg/ml直链淀粉）及0.09mol·L-氢氧化钠溶液3ml加50ml水稀释后，再加入1mol.L-乙酸溶液1ml和碘试剂1ml，用水定容至100ml，显色10min，于分光光度计测定500～800nm的吸收谱。
A.4.3碘结合量测定
A.4.3.1测定
称取重量相当于含0.1000g淀粉的烘干马铃薯直链淀粉纯品于100ml容量瓶中，加几滴无水乙醇湿润后再加入0.5molL-l氢氧化钠溶液10ml，置沸水浴完全分散，冷却、加水定容。吸5ml（含直链淀粉5mg）分散液放入200ml烧杯中，加入85ml水，5ml1mol·L-2盐酸及5ml0.4mol·L-l碘化钾溶液，按电位滴定装置要求，把烧杯置于电磁搅拌器上，将铂电极及甘汞电极插入液面下，在电磁搅拌下，用5ml微量滴定管滴加碘酸钾标准溶液，每次滴加0.2ml（或0.1ml)，加后1min读取毫伏数，滴定终点用二次微商法计算。
A.4.3.2计算
0.6346×T×100
直链淀粉碘结合量，%=
式中：m-直链淀粉质量，mg，
—8.34×10-mol·L-碘酸钾溶液滴定体积，ml；每毫升8.34×10-*mol·L-碘酸钾溶液相当于碘的质量，0.6346mg。A.4.4马铃善直链淀粉纯品标准
马铃薯直链淀粉纯品必须具备：a.amax为640~650nm；b.淀粉含量在85%以上，c.碘结合量在19.5以上：d．A%，入max在20℃时为340以上。312
GB 7648-87
附录B
水稻、玉米、谷子支链淀粉标准品的选择与制备（参考件）
B.1碘-淀粉复合物吸收光谱测定取5.5溶液5ml（1mg/ml支链淀粉），加50ml水稀释后，再加入1mol·L=1乙酸溶液1ml和碘试剂1ml，加水至100ml，显色10min，用分光光度计测定400～640nm的吸收谱。B.2标准品的选择
水稻、玉米、谷子支链淀粉标准品可以从相应的蜡质谷物品种中选择，标准品必须分别具备：水稻：amax520～530nm，Aiep%，620nm，在20℃时为17以下，玉米；^mx530~540nm，A%*%，620nm，在20℃时为25以下；谷子：amx530~540nm，A%*%，620nm，在20℃时为22以下。B.3标准品制备
取适量（10～20g）通过0.177~～0.149mm孔径筛（80~100号）的蜡质谷粉，分别用甲醇及石油醚在索式脂肪抽提器回流脱脂16h，放入真空干燥箱烘干（55~56℃）备用，同时按GB5006-—85测定淀粉含量。
附加说明：
本标准由黑龙江省农业科学院综合化验室负责起草。本标准主要起草人盂广琴、李體辉、何照范。313
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