【国家标准(GB)】 饲料显微镜检查方法

中华人民共和国国家标准
饲料显微镜检查方法
Method for the test of feed microscopy1 主题内容与适用范围
GB/T 14698-—93
本标准规定了单一饲料及配合饲料的显微镜检查方法，适用于单一饲料及配合饲料的显微镜定性检查。
2引用标准www.bzxz.net
GB6682实验室用水规格
3原理
借助显微镜扩展检查者的视觉功能，参照各饲料原料标推样品和杂质样品的外形、色泽、硬度、组织结构、细胞形态及染色特征等，对样品的种类、品质进行鉴别和评价。4仪器
4.1立体显微镜：放大7～40倍，可变倍，配照明装置（可用阅读台灯）；4.2生物显微镜：三位以上换镜旋座，放大40～500倍、斜式接目镜、机械载物台，配照明装置（可用阅读台灯）；
4.3放大镜：3倍；
4.4筛子：可套在-起的孔径2.00.0.84、0.42、0.25、0.177mm的筛及底盘；4.5研钵；
4.6点滴板：黑色和白色；
4.7培养皿、载玻片、盖玻片；
4.8尖头镊子、尖头探针等；
4.9电热干燥箱、电炉、酒精灯及实验室常用仪器。5试剂及溶液
除特殊规定外，本标准所用试剂均为化学纯，水为蒸馏水。5.1氟仿：化学纯，p:1.484g/mL。5.2丙酮（3+1）：3体积的丙酮（p:0.788g/mL）与1体积的水混合。5.3盐酸：p1.18g/mL。
5.3.1盐酸（1十1)：1体积盐酸（5.3)与1体积的水混合。5.4硫酸（1+1):1体积硫酸（p:1.84g/mL）与1体积的水混合。5.5碘溶液：0.75g碘化钾和0.1g碘溶于30mL水中，贮存于棕色瓶内。5.6Millon试剂：1份重量的汞加入2份重量的硝酸（p:1.46g/mL）中，稍加热溶解，再与2份重量的国家技术监督局1993-11-06批准192
1994-06-01实施
GB/T14698-93
水混合，静置过夜，取上清液保存在棕色瓶中；5.710%硝酸铵溶液：10g硝酸铵溶手100mL水中；5.8销酸溶液：20gMo0：溶入30mL氨水与50mL水的混舍液中，将此液缓慢倒入100ml.硝酸（p:1.46g/ml.）与250mL水的混合液中，微热溶解，冷却后与10%硝酸铵溶液混合；5.9悬浮剂I：溶解10g水合氯醛10mL水中，加入10ml甘油，混匀，贮存在棕色瓶中；5.10悬浮剂I：溶解160g水合氯醛于100mL水中，并加人10ml.盐酸（5.3）；5.11硝酸银溶液（10%）：溶解10g硝酸银于100mL水中；5.12间苯三酚溶液：称取2g间苯三酚溶于100mL95%的乙醇中。6比照样品
6.1饲料原料标准样品：按国家有关实物标准执行；6.2掺杂物样品：搜集木屑、糠壳粉、花生荚壳粉等可能的掺杂物样品：6.3杂草种子：搜集常与谷物混杂的杂草种子，大多可在谷物加工厂清理工序下脚料中找到。储于编号的玻璃瓶中；
6.4必要时可参考有关显微图谱。7直接感观检查
首先以检查者的视、嗅、触觉直接检查样品。将样品摊放于白纸上，在充足的自然光或灯光下观察样品。可利用放大镜，必要时以比照样品在同光源下对比。观察目的在于识别样品标示物质的特征，注意掺杂物、热损、虫蚀，活昆虫等。检查有无杂草种子及有害微生物感染。
嗅气味时应避免环境中其他气味干扰。觉检查目的在于判断被检样品标示物质的固有气味。并确定有无腐败、氨臭、焦糊等其他不良气味。手捻祥品目的在于判断样品硬度等手感特征及湿度等。8试样制备
8.1分样：将样品充分混匀，用四分法分取到检查所需量，一般10～15g即可；8.2筛分：根据样品粒度情况，选用适当组筛，将最大孔径筛置最上面，最小孔径筛置下面，最下是筛底盘。将四分法分取的样品置于套筛上充分振摇后，用药勺从每层筛面及筛底各取部分样品，分别平摊于培养血中；【必要时样品可先经氯仿处理再筛分，参考8.3)】。8.3氯仿处理
油脂含量高或粘附有大量细小颗粒的饲料样品可先用氯仿处理（鱼粉、肉骨粉及大多数家禽饲料和未知饲料最好用此方法处理）。取约10g样品置100ml高型烧杯中，加入约90mL氯仿（5.1）（在通风柜内），搅拌约10s，静置2min，待上下分层清楚后，用勺捞出浮物过滤，稍挥干后置70℃干燥箱中20min，取出冷却至室后将样品过筛。必要时也可将沉淀物过滤、干燥、筛分；8.4两酮处理
因有糖蜜而形成团块结构或模糊不清的饲料样品，可先用此法处理。取约10g样品置100mI.高型烧杯中.加入75ml丙酮（5.2)搅拌数分钟以溶解糖蜜，静置沉降。小心倾析，用丙酮重复洗涤、沉降、倾析二次。稍挥干后置60C干燥箱中20min，取出于室温下冷却；8.5颗粒或团粒饲料样品处理
留几粒于研钵中，用研杆碾压使其分散成各种组分，但不要再将组分本身研碎。初步研磨后过孔径为0.45mm筛。根据研磨后饲料样品的特征，依照8.2，8.3，8.4进行处理。193
9立体显微镜检查
GB/T14698—93
将上述摊有样品的培养斑置立体显微镜下观察，光源可采用充足的散射自然光或用阅读台灯，用台灯时入照光与样品平面以45°角度为好。立体显微镜上载台的衬板选择要考虑样品色泽，一般检查深色颗粒时用白色衬板；检查浅色颗粒时用色衬板。检查一个样品可先用白色衬板看一遍，再用黑色衬板看。另外，也可用蓝色腊光纸做衬板观察样品。
检查时先看粗颗粒，再看细颗粒；先用较低放大倍数，再用较高放大倍数。观察时用尖镊子拨动、翻转，并用探针触探样品颗粒。系统地检查培养皿中的每一组分。为便于观察可对样品进行木质素染色，淀粉质染色（参考12)在检查过程中以比照样品在相同条件下，与被检样品进行对比观察。记录观察到的各种成分，对不是样品所标示的物质，若量小称为杂质（参考国家标准规定的有关饲料含杂质允许量），若量大，则称为掺杂物。要特别注意有害物质。10生物显微镜检查
将立体显微镜下不能确切鉴定的样品颗粒、筛面上及筛底盘中样品分别取少许，置于载玻片上，加二滴悬浮液1（5.9），用探针搅拌分散，浸透均匀，加盖玻片，在生物显微镜下观察，先在较低倍数镜下搜索观察，对各目标进一步加大倍数观察，与比照样品进行比较，取下载玻片，揭开盖玻片，加一滴碘溶液（5.5），搅匀，再加盖玻片，置镜下观察。此时淀粉被染成蓝色至黑色，酵母及其他蛋白质细胞呈黄色至棕色。如样品粒透明度低不易观察时，可取少量样品，加入约5mL悬浮液1（5.10），煮沸1min，冷却，取1～2滴底部沉淀物置载玻片上，加盖玻片镜检。11主要无机组分的鉴别
将干燥后的沉淀物（8.3)置于孔径0.42、0.25.0.177mm筛及底盘之组筛上筛分，将筛分出的四部分分别臀于培养血中，用立体显微镜检查（参照9），动物和鱼类的骨、鱼鳞、软体动物的外壳一般是易于识别的。盐通常呈立方体；石灰石中的方解石呈菱形六面体。12鉴别试验
用镊子将未知颗粒放在点滴板上，轻轻压碎，以下工作均在立体显微镜下进行，将颗粒彼此分开，使之相距2.5cm，每颗周围滴一滴有关试剂，用细玻棒推入液体，并观察界面处的变化。此实验也可在黑色点滴板上进行。
12.1硝酸银试验
将未知颗粒推入硝酸银（5.11)溶液中，观察现象：12.1.1如果生成白色晶体，并慢慢变大，说明未知颗粒是氯化物，可能是盐；12.1.2如果生成黄色结晶，并生成黄色针状，说明未知颗粒为磷酸氢二盐或磷酸二氢盐，通常是磷酸二氢钙：
12.1.3如果生成能略为溶解的白色针状，说明是硫酸盐；12.1.4如果颗粒慢慢变暗，说明未知颗粒是骨。12-2稀盐酸试验
将未知颗粒推入稀盐酸溶液（5.3.1)中，观察现象：12.2.1如果剧烈起泡，说明未知颗粒为CaCO312.2.2如果慢慢起泡或不起泡，须进行下列试验，12.3钼酸盐试验
GB/T14698—93
将未知颗粒推入钼酸盐溶液(5.8)中，观察现象：12.3.1如果在接近未知颗粒的地方生成微小黄色结晶，说明未知颗粒为磷酸三钙或磷酸盐、磷矿石或骨(所有磷酸盐均有此反应，但磷酸二氢盐和磷酸氢二盐均已用硝酸银鉴别)。12.4Millon试剂试验
将未知颗粒推入Millon试剂(5.6)中，观察现象：12.4.1如形成的颗粒大多漂浮，颜色由粉红色变为红色，说明是蛋白质，而5min后退色者说明是骨磷酸盐；
12.4.2如形成的颗粒膨胀、碎裂，但仍沉于底部，说明未知颗粒为脱氟磷酸盐；12.4.3如颗粒只是慢慢分裂，说明未知颗粒是磷酸盐矿物。12.5稀硫酸试验
将未知颗粒上滴加盐酸（5.3.1)后，再滴入稀硫酸溶液（5.4)，如慢慢形成细长的白色针状物，说明未知颗粒为钙盐。
12.6间苯三酚试验
将间苯三酚溶液漫润样品，放置5min，滴加入盐酸（5.3)如样品含有木质素，则显深红色。13结果表示
结果表示应包括样品的外观、色泽、气味及显微镜下所见到的物质，并给出所检样品是否与送检名称相符合的结论。
附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部、农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化委员会归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(武汉)负责起草。本标准主要起草人杨海鹏、杨林。本标准等效采用AOAC7.129（1984）。195
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