【水产行业标准(SC)】 水产品中甲醛的测定

ICS67.050
中华人民共和国水产行业标准
SC/T3025-—2006
水产品中甲醛的测定
Determination of formaldehyde in aquatic products2006-01-26发布
2006-04-01实施
中华人民共和国农业部
本标准附录A、附录B为资料性附录。前言
本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心。本标主要起草人：周德庆、马敬军、李晓川、翟毓秀、王联珠。SC/T3025—2006
1范围
水产品中甲醛的测定
SC/T3025—2006
本标准规定了水产品中甲醛含量的测定方法：定性方法、分光光度法、高效液相色谱法。本标准适用于水产品中甲醛含量的定性筛选和定量测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T5009.1食品卫生检验方法理化部分总则3定性筛选方法
3.1原理
利用水溶液中游离的甲醛与某些化学试剂的特异性反应，形成特定的颜色进行鉴别。3.2仪器
3.2.1组织捣碎机
3.2.210mL纳氏比色管
3.3试剂
3.3.1下列所用试剂均为分析纯，所用化学试剂应符合GB/T602要求。实验用水应符合GB/T6682的要求。
3.3.21%间苯三酚溶液：称取固体间苯三酚1g，溶于100mL12%氢氧化钠溶液中。此溶液临用时现配。
3.3.34%盐酸苯溶液。此溶液临用时现配。3.3.4盐酸溶液（1+9)：量取盐酸100mL,加到900mL的水中。3.3.55%亚硝酸亚铁氰化钠溶液。此溶液临用时现配。3.3.610%氢氧化钾溶液。
3.4操作步骤
3.4.1取样
3.4.1.1鲜活水产品
鲜活水产品取肌肉等可食部分测定。鱼类去头、去鳞，取背部和腹部肌肉：虾去头、去壳、去肠腺后敢肉；贝类去壳后取肉；蟹类去壳、去性腺和肝脏后取肉。3.4.1.2冷冻水产品
冷冻水产品经半解冻直接取样，不可用水清洗。3.4.1.3水发水产品
水发水产品可取其水发溶液直接测定。或将样品沥水后，取可食部分测定。1
SC/T30252006
3.4.1.4干制水产品
干制水产品取肌肉等可食部分测定3.4.2试样的制备
可直接取用水发水产品的水发溶液，进行定性筛选实验。将取得的样品用组织捣碎机捣碎，称取10g于三角瓶中，加人20mL蒸馏水，震荡30min，离心后取上清液作为制备液进行定性测定。3.4.3测定
3.4.3.1间苯三酚法
a）取样品制备液5mL于10mL纳氏比色管中，然后加人1mL1%间苯三酚溶液，2min内观察颜色变化。溶液若呈橙红色，则有甲醛存在，且甲醛含量较高：溶液若呈浅红色，则含有甲醛，且含量较低：溶液若无颜色变化，甲醛未检出。该方法操作时显色时间短，应在2min内观察颜色的变化。水发鱿鱼、水发虾仁等样品的制备b)
液因带浅红色，不适合此法。
3.4.3.2亚硝基亚铁氰化钠法
a）取样品制备溶液5mL于10mL纳氏比色管中，然后加人1mL4%盐酸苯肼，3滴~5滴新配的5%亚硝基亚铁氰化钠溶液，再加入3滴5滴10%氢氧化钾溶液，5min内观察颜色变化。溶液若呈蓝色或灰蓝色，说明有甲醛，且甲醛含量高；溶液若呈浅蓝色，说明有甲醛，且甲醛含量低；溶液若呈淡黄色，甲醛未检出。b）该方法显色时间短，应5min内观察颜色的变化3.4.3.3以上两种方法中任何一种方法都可作为甲醛的定性测定方法，必要时两种方法同时使用。4定量测定方法
4.1分光光度法
4.1.1原理
水产品中的甲醛在磷酸介质中经水蒸气加热蒸馏，冷凝后经水溶液吸收，蒸馏液与乙酰内丙酮反应，生成黄色的二乙酰基二氢二甲基吡啶，用分光光度计在413nm处比色定量，甲醛分光光度计吸收光谱见附录A。
4.1.2仪器
4.1.2.1分光光度计：波长范围为360nm~800nm。4.1.2.2圆底烧瓶：1000mL/2000mL、250mL；容量瓶；200mL；纳氏比色管：20mL4.1.2.3调温电热套或电炉。
4.1.2.4组织捣碎机。
4.1.2.5蒸馏液冷凝、接收装置。4.1.3试剂
4.1.3.1磷酸溶液(1+9)：取100mL磷酸，加到900mL的水溶液，混匀。4.1.3.2乙酰丙酮溶液：称取乙酸铵25g，溶手100mL蒸馏水中，加冰乙酸3mL和乙酰丙酮0.4mL混勾，贮存于棕色瓶，在2℃一8℃冰箱内可保存一个月。4.1.3.30.1mol/L碘溶液：称取40g碘化钾，溶于25mL水中，加入12.7g碘，待碘完全溶解后，加水定容至1000mL，移入棕色瓶中，暗处忙存4.1.3.41mol/氢氧化钠溶液。
4.1.3.5硫酸溶液（1+9)。
4.1.3.60.1mol/L硫代硫酸钠标准溶液：按GB/T5009.1中规定的方法标定。2
4.1.3.70.5%淀粉溶液：此液应当日配置。SC/T3025—2006
4.1.3.8甲醛标准贮备溶液：吸取0.3mL含量为36%~38%甲醛溶液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，为甲醛标准贮备溶液，冷藏保存两周。按本标准4.1.5.1条规定的碘量法标定。4.1.3.9甲醛标准溶液（5μg/mL）：根据甲醛标准贮备液的浓度，精密吸取适量于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，配置甲醛标准溶液(5ug/mL)，混勾备用，此液应当日配置。4.1.4样品处理
将接3.4.1要求取得样品，用组织捣碎机捣碎，混合均匀后称取10.00g于250mL圆底烧瓶中，加人20mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌混勾，浸泡30min后加10mL磷酸（1+9）溶液后立即通入水蒸气蒸馏。接收管下口事先插人盛有20mL蒸馏水且置于冰浴的蒸馏液接收装置中。收集蒸增液至200mL，同时做空白对照实验。
4.1.5操作方法
4.1.5.1甲醛标准贮备溶液的标定精密吸取4.1.3.8制备的溶液10.00mL，置于250mL碘量瓶中，加人25.00mLQ.1mol/碘溶液，7.50mL1mcl/L氢氧化钠溶液，放置15min再加人10.00mL（1+9）硫酸，放置15min：用浓度为0.1mol/L的硫代硫酸钠标准溶液滴定，当滴至淡黄色时，加入1.00mL0.5%淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失，记录所用硫代硫酸钠体积（V1）mL。同时用水作试剂空白滴定，记录空白滴定所用硫代硫酸钠体积（Vo）mLe
甲醛标准贮备液的浓度用式（1)计算：X=(V-V)×C×15×1000
式中：
甲醛标准贮备溶液中甲醛的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；Va
空白滴定消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积数，单位为室升（mL）滴定甲醛消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积数，单位为毫升（mL)V
硫代硫酸钠溶液准确的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol/L）：-1mL1mol/L碘相当甲醛的量，单位为毫克（mg）；15
10—一所用甲醛标准贴备溶液的体积，单位为毫升（mL）。4.1.5.2标准曲线的绘制
精密吸取5g/mL甲醛标准液0mL2.0mL.4.0mL.6.0mL8.0mL、10.0mL于20mL纳氏比色管中，加水至10mL；加人1mL乙酰丙酮溶液，混合均勾，置沸水浴中加热10min，取出用水冷却至室温：以空白液为参比，于波长413nm处，以1cm比色血进行比色，测定吸光度，绘制标准曲线。4.1.5.3样品测定
根据样品蒸馅液中甲醛浓度高低，吸取蒸馅液1mL~10mL补充蒸馏水至10mL，测定过程同4.1.5.2，记录吸光度。每个样品应作两个平行测定，以其算术平均值为分析结果。4.16结果计算
试样中甲醛的含量按式（2）计算，计算结果保留两位小数。Cx10
X2=m2x×200
式中：
X2—水产品中甲醛含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；C2查曲线结果，单位为微克每毫升（μg/mL）;10显色溶液的总体积，单位为毫升（mL）；(2)
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m2—样品质量，单位为克（g）：V2一样品测定取蒸馏液的体积，单位为毫升（mL）;200一蒸留液总体积，单位为毫升（mL）。4.1.7回收率
回收率≥60%。
4.1.8检出限
样品中甲醛的检出限为0.50mg/kg。4.1.9精密度
在重复性条件下获得两次独立测定结果：样品中甲醛含量≤5mg/kg时，相对偏差≤10%；样品中甲醛含量>5mg/kg时，相对偏差≤5%。4.2高效液相色谱法
4.2.1原理
甲醛在酸性条件下与2.4-二硝基苯肼在60℃水浴衍生化生成2.4-二硝基苯腺，经二氯甲烷反复分离提取后，经无水硫酸钠脱水，水浴蒸于，甲醇溶解残渣。ODS-C1s柱分离，紫外检测器338nm检测，以保留时间定性，根据峰面积定量，测定甲醛含量，甲醛溶液高效液相色谱图见附录B。4.2.2仪器
4.2.2.1高效液相色谱，附紫外检测器。4.2.2.2
高速离心机。
10mm×150mm具塞玻璃层析柱。
恒温水浴锅。
旋涡混合器
移液器：1mL；微量进样器：20pl;5mL具塞比色管。4.2.2.70.22m滤膜。
4.2.3试剂
4.2.3.1甲醇：色谱纯，经过滤、脱气后使用。二氯甲烷。
4.2.3.32.4-二硝基苯肼溶液：称取100mg2,4-二硝基苯耕溶解于24mL浓盐酸中，加水定容至100mL
4.2.3.4甲醛标准贮备溶液：配制及标定见本标准4.1.3.8条，临用时稀释至20g/mL。4.2.3.5无水硫酸钠：经550℃高温购烧，干燥器中贴存冷却后使用。4.2.4测定步骤
4.2.4.1样品处理
取4.1.4制备水蒸气蒸馏液0.1mL~1.0mL，置于5mL具塞比色管中，补充蒸馅水至1.0mL，加人0.2mL2，4-二硝基苯肼溶液，置60℃水浴15min，然后在流水中快速冷却，加人2mL二氯甲烷，旋涡混合器震荡萃取1min，3000r/min，离心2min，取上清液再用1mL二氟甲烷萃取两次，合并3次萃取的下层黄色溶液，将萃取液经无水硫酸钠柱脱水，60℃水浴蒸干，放冷，取1.0mL色谱纯甲醇溶解残渣，经孔径0.22um滤膜过滤后做液相色谱分析用。4.2.4.2色谱条件免费标准下载网bzxz
4.2.4.2.1色谱柱：ODS-Cg柱.5μm，4.6nm×250nm4
4.2.4.2.2色谱柱温度：40℃。
4.2.4.2.3流动相：甲醇+水（60+40）,0.5mL/min4.2.4.2.4检测器波长：338nm。4.2.4.3标准曲线的绘制
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分别取20μg/mL的甲醛应用液0.0mL0.1mL0.25mL.0.5mL.0.75ml,1.0mL（相当于0pg，2pg，5μg，10μg，15μg，20μg）于5mL具塞比色管中，加蒸馏水至1.0mL，按4.2.4.1处理后取20μL进样。根据出现时间定性（5.1min），峰面积定量，每个浓度做两次，取平均值，用峰面积与甲醛含量做图，绘制标准曲线。取样品处理液20山注人液相色谱测得积分面积后从标准曲线查出相应的液度。4.2.5结果计算
样品中甲醛的含量按式（3)计算，计算结果保留两位小数。C
X3=MexV
式中：
水产品中甲醛含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：查曲线结果，单位为微克每毫升（ug/mL）；M3——样品质量，单位为克(g)；Ve
样品测定取蒸馏液的体积，单位为毫升（mL）：蒸馏液总体积，单位为毫升（mL）。4.2.6回收率
样品蒸馏液中添加甲醛标准溶液计算得到的回收率>90%。4.2.7精密度
在重复性条件下获得两次独立测定结果：当样品中甲醛含量≤5mg/kg时，相对偏差≤10%；当样品中甲醛含量>5mg/kg时，相对偏差≤5%。4.2.8检出限
样品中甲醛的检出限为0.20mg/kg。(3)
SC/T3025-2006
附录A
（资料性附录）
甲醛分光光度计吸收光谱扫描图96WNO
附录B
（资料性附录）
甲醛标准溶液高效液相色谱图
DA D1B.Sig=338.10 Ref=300.20(ZHOU9-07/5.D)mAU
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