【国家标准(GB)】 食物中磷的测定方法

GB12393—1990
中华人民共和国国家标准
食物中磷的测定方法
Methods for determination of phosphorus in foodsGB/T12393—1990
本标准参照采用国际标准IS03946—1982《淀粉和淀粉制品中总磷的测定分光光度法》和IS02962一1984《乳和乳制品中总磷的测定一分子吸收光谱法》。
1主题内容与适用范围
本标准规定了用分光光度法测定食物中的磷含量。本标准适用于各类食物中总磷的测定。第一篇
2原理
食物中的有机物经酸氧化：使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。此化合物经过苯二酚、亚硫酸钠还原成蓝色化合物一一钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸光值，以定量分析磷含量。本方法最低检出限为2ug。
3试剂
本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。试剂纯度均为分析纯。3.1硫酸：比重1.84。
3.2高氯酸-硝酸消化液：1+4混合液。3.315%硫酸溶液（V/V）：取15mL硫酸徐徐加入到80mL水中混匀。冷却后用水稀释至100mL。
3.4钼酸铵溶液：称取5g钼酸铵［（NH4）6Mo7O244H2O]用15%硫酸稀释至100mL。
3.5对苯二酚溶液：称取0.5g对苯二酚于100mL水中，使其溶解，并加入一滴浓硫酸（减缓氧化作用）。
3.6亚硫酸钠溶液：称取20g亚硫酸钠于100mL水中，使其溶解。此溶液最好于实验前临时配制，否则可使钼蓝溶液发生混浊。3.7磷标准储备液（100μg/mL）：精确称取在105℃下干燥的磷酸二氧钾（优级纯）0.4394g，置于1000mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。此溶液每毫升含100ug磷。
3.8磷标准使用液（10ug/mL）：准确吸取10mL磷标准储备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升含磷10μg。4仪器与设备
4.1实验室常用设备。
中华人民共和国卫生部1990—03—19批准1990—12—01实施
4.2分光光度计。
5测定步骤
5.1样品消化
GB12393—1990
5.1.1.称取各类食物的均匀干样0.1～0.5g或温样2～5g于100mL凯氏烧瓶中，加入3mL硫酸，3mL高氯酸-硝酸消化液，置于消化炉上，瓶中液体初为棕黑色。待溶液变成无色或微带黄色清亮液体时，即消化完全。将溶液放冷，加20mL，冷却后转移至100mL容量瓶中，用水多次洗涤凯氏烧瓶，洗液合并倒入容量瓶内，加水至刻度，混匀。此溶液为样品测定液。5.1.2取与消化样品同量的硫酸、高氯酸-硝酸消化液，按同一方法做空白溶液。
5．2磷标准曲线
准确吸取磷标准使用液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL（相当于含磷量0、5、10、20、30、40、50ug），分别置于20mL具塞试管中，依次加入2mL钼酸溶液摇匀，静置几秒钟。加入1mL亚硫酸钠溶液，1mL对苯二酚溶液摇匀。加水至刻度，混勾。静置0.5h以后，在分光光度计660nm波长处测定吸光度。以测出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。o.s
5.3样品测定
磷标准曲线
准确吸取样品测定液2mL及同量的空白溶液（5.1.2），分别置于20mL具塞试管中，其余操作步骤同标准曲线（5.2），以测出的吸光度在标准曲线上查得未知液中的磷含量。
5.4计算
式中：X-
样品中磷含量，mg/100g；
由标准曲线查得或由回归方程算得样品测定液中磷含量，mg；-样品消化液定容总体积，mL；
测定用样品消化液的体积，mL；样品质量，g。
6结果的重复性
中华人民共和国卫生部1990—03-19批准1990—12—01实施
GB12393—1990
同一实验室平行测定或重复测定结果相对偏差绝对值<5%。第二篇
7原理
食品中的有机物经酸破坏以后，磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。用氯化亚锡、硫酸肼还原磷钼酸铵生成蓝色化合物一一钼蓝。蓝色强度与磷含量成正比，可进行比色定量。8试剂
本法所用试剂除注明外。均为分析纯。所有实验用水均为去离子水或蒸馏水。
8.1硝酸。
8.2硫酸：比重1.84。
8.3高氯酸。下载标准就来标准下载网
8.415%硫酸溶液：取15mL硫酸，加入到80mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL
8。55%硫酸溶液：取5mL硫酸，加入到90mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL。
8.63%硫酸溶液：取3mL硫酸，加入到90mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL。
8.7钼酸铵溶液：同3.4。
8.8氯化亚锡-硫酸肼混合液：称取0.1g氯化亚锡（SnC12·2H,0），0.2g硫酸肼（NH,NH·H,S0g），加3%硫酸溶液并用其稀释至100mL。此溶液置棕色瓶中，贮冰箱至少可保存一个月。
8.9磷标准储备液：精确称取在105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾（优级纯）0.4394g，用水溶解于100mL容量瓶中，并加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含1mg磷。置聚乙烯瓶贮于冰箱中保存。8.10磷标准使用液：准确吸取磷标准储备液1.00mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升含10ug磷。9仪器
9.1分光光度计。
10操作方法
10.1样品处理
称取各类食品的均匀样0.1～0.5g，湿样5g左右于100mL三角瓶中，加硝酸15mL，高氯酸2mL，硫酸2mL，混勺。于电热板或电炉上小火加热消化，瓶中液体开始变棕黑色时，不断沿瓶壁补加硝酸至有机质分解完全，加大火力，至消化液发生浓密的白烟，溶液澄明或微带黄色。消化液放冷，加水20mL。放冷以后转移至100mL容量瓶中，用水多次洗涤三角瓶，合并洗液于容量瓶中，加水至刻度，混匀。作为样品测定溶液。取与消化样品同量的硝酸、高氯酸、硫酸，按同一方法做试剂空白溶液。10.2标准曲线绘制
中华人民共和国卫生部1990—03—19批准1990—12—01实施
GB12393—1990
取磷标准使用液0、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0mL（相当于磷0、2、4、6、8、10ug），分别置于25mL比色管中，各加水约15mL、5%硫酸溶液2.5mL，钼酸铵溶液2mL，氯化亚锡-硫酸肼混合液0.5mL，各管均补加水至25mL，混匀。在室温放置20min以后，用2cm比色杯，在660nm波长处，以零管作参比，在分光光度计上分别测定其吸光管，以吸光度对磷含量绘制标准曲线。10.3样品测定
准确吸取样品测定溶液1～2mL及同量的试剂空白液，分别置于25mL比色管中，各加水约15mL，5%硫酸溶液2.5mL，钼酸铵溶液2mL，氯化亚锡-磷酸肼混合液0.5mL。各管均补加水至25mL，混匀。在室温放置20min以后，用2cm比色杯，在660nm波长处，用水作参比，在分光光度计分别测定其吸光度。以测出的吸光度在标准曲线上查得未知液的磷含量。10.4计算
(c-co)×V100
式中：X样品中磷含量，mg/100gc
由标准曲线上查得样品测定溶液中磷含量，ug；-空白溶液中磷含量，ug；
样品质量，g；
-样品消化液的总体积，mL；
测定用样品消化液的体积，mL。附加说明：
（2）
本标准由中华人民共和国卫生部卫生监督司提出，食品卫生标准分委员会审查通过。
本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所、北京市卫生防疫站起草。
本标准主要起草人王光亚、曲宁、涂小明。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫生部1990—03—19批准1990—12—01实施
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