【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验

GB 4789.5—1994
中华人民共和国国家标准
食品卫生微生物学检验
志贺氏菌检验
Microbiclogicl examination of food hygieneExamination of Shigella
GB4789.5—1994
1主题内容与适用范围
本标准规定了食品中志贺菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。2引用标准
GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料
3.1天平：乐取检样用。
3。2均质器或乳钵。
3.3温箱。
显微镜。
灭菌广口瓶：500mL。
灭菌三角烧瓶：500mL，250mL。灭菌平皿：90mm×15mm。
载玻片。
酒精灯。
3。10灭菌金属匙或玻璃棒。
接种棒，镍铬丝。
3.12试管架，试管篓。
硝酸纤维素滤膜：150mm×50mm，Φ0.45um。临用时切成两张，每张3.13
70mm×50mm，用铅笔划格，每格6mm×6mm。每行10格，分6行。灭菌备用。4培养基和试剂
CN增菌液：按GB4789.28中4.17规定。4.2HE琼脂：按GB4789.28中4.21规定。4.3
SS琼脂：按GB4789.28中4.22规定。4.4
麦康凯琼脂：按GB4789.28中4.24规定。伊红美蓝琼脂（EMB）：按GB4789.28中4.25规定。三糖铁琼脂（TSI）：按GB4789.28中4.26、4.27规定。葡萄糖半固体管：按GB4789.28中4.31规定。半固体管：按GB4789.28中4.30规定。4.8
葡萄糖铵琼脂：按GB4789.28中4.30规定。4.10
尿素琼脂（pH7.2）：按GB4789.28中3.15规定。4.11
西蒙氏柠檬酸盐琼脂：按GB4789.28中3.5规定。氰化钾（KCN）培养基：按GB4789.28中3.16规定。氨基酸脱羧酶试验培养基：赖氨酸、鸟氨酸及对照培养基，按GB4789.28中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
GB4789.5—1994
中3.12规定。
4。14糖发酵管：棉子糖、甘露醇、甘油、七叶苷，按GB4789.28中4.32规定。
4.155%乳糖发酵管：按GB4789.28中4.32规定。4.16蛋白陈水、靛基质试剂：按GB4789.28中3.13规定。4。17志贺氏菌属诊断血清。
5检验程序
志贺氏菌检验程序如下：
6操作步骤
6.1增菌
称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。6．2分离和初步生化试验
6.2.1取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板1个，于36℃培养18～24h，志贺氏菌在这些培养工丰呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。6.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。6.2.3下述培养物可以弃去：
a.在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物b.在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d。产气的培养物；
e.有动力的培养物；
f.产生硫化氢的培养物；
6.2.4凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。6.3血清学分型和进一步的生化试验6.3.1血清学分型
挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在大同小而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
GB 4789. 5—1994
菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。
4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用115各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。表1
型和亚型
x变体
Y变体
福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原型抗原
群抗原
1，2，4，5，
1，2，4，5，
1, 3, 4..
1, 7, 8, 9.....
1,6,7,8,
1, 3, 4, 6.***.
1, (3, 4)......
1, 3, 4, 6******
1，3，,4.
1,5, 7,...
1，2，4)
1, 7, 8, 9...
注：+凝集；-不凝集；（）有或无。6．3．2进一步的生化试验
在群因子血清中的凝集
在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羟酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨苷和七叶苷的分解。除宽阔内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性某杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。已判农副业志贺氏菌属的培养物，应进一步做5%乳糖发酵，甘露醇、棉子糖和甘油的发酵和靛基质试验。志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似，见表2。表2
生化群
A群：痫疾志贺氏菌
B群：福氏志贺氏菌
C群：鲍氏志贺氏菌
D群：宋内氏志贺氏菌
志贺氏菌属四个群的生化特性
甘露醇
5%乳糖
1+/(+)
棉子糖bZxz.net
靛基质
注：+阳性；-/+多数阴性，少数阳性（+）迟缓阳性；d有不同生化型6.4结果报告：综合报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
GB4789.5—1994
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由江西省卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人何晓青。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09-—01实施
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