【国家标准(GB)】 蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异恶唑、磺胺二甲氧嘧啶残留量的测定方法 液相色谱法

ICS 67. 180. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T18932.5—2002
蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二单氧嘧啶残留量的测定方法
液相色谱法
Method for the determination of sulfacetamide,suifapyridinesulfamerazine,sulfamethoxypyridazine,sulfametersulfachloropyridazine,sulfamethaxazole and suifadimethoxineresidues in honey---Liguid chromatographic method2002-12-30发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2003-06-01实施
GB/T 18932—2002分为12个部分,本部分为第5部分。GB/T18932.5—2002
GB/T18932的本部分修改采用加拿大国家标准ACC-019-V3.0蜂中磺胺噻唑和磺胺类兽药残留量测定方法一-高效液相色谱荧光法》，修改的主要内容是：测定品种所有调整；
增加了苯磺酸型阳离子交换柱和Qasis HLB柱净化步骤；使用的液相色谱柱和流动相不同。本部分遵循GB/T1.1一2000&标化工作导则第1部分：标推的结构和编写规则》和GB/T20001.4一2001《标准缩编写规则第4部分：化学分析方法\的编写规则。本部分的附录A、附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国国家质监督检验检疫总局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位：中华人民共和国案室岛出人境检验检疫局。本部分主要起草人：庞国芳、曹彦忠、范春林，张进杰、李学民、林忠。本部分系首次发布的国家标准。1
1范围
蜂蜜中磺腰醋酰、磺腰吡啶、磺腰甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异唑、磺胺二甲氧啶残留量的测定方法
液相色谱法
GB/T 18932.5—2002
GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氣哒嗪、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲氧嘧啶残留量液相色谱测定方法。本部分适用于蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲氧嘧啶残留量的测定。本部分的方法检出限：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氨哒嗪、磺胺甲基异唑、磺胺二甲氧嘧啶均为0.010mg/kg。2规范性引用女件
下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然面，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GH/T6379-1986测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性(neq ISO 5725:1981)
GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法（negISO3696：1987)3原理
试样中磺胺类药物残留用磷酸溶液（pH=2)提取，过滤后，经阳离子交换柱和OasisHLB或相当的固相萃取柱净化，用甲醇洗脱并蒸于，残渣用0.1mal/L盐酸溶液溶解。用荧光胺衍生后，样品溶被供配有荧光检测器的高效液相色谱测定，外标法定量，4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682一1992规定的一级水。4.1甲醇：一级色谱纯。
4.2乙腈：一级色谱纯。
4.3磷酸：优级纯。
4.4庚烷磺酸钠(C,HlNaSH,O)：一级色谱纯。4.5盐酸。
4.6乙酸钠。
GB/T18932.5—2002
4.7丙酮。
4.8荧光胺。
4.9磷酸二氢钾：优级纯。
4.10磷酸氢二钾：优级纯。
4.11磷酸溶液:pH=2。1 000 mL水中加人 1 mL磷酸(4. 3),在pH计上再滴加磷酸以调节溶液pH=2。
4.12磷酸盐缓冲溶液：0.2mal/L，pH=8。分别称取1.05g磷酸二氢钾（4.9)和33.46g磷酸氢二钾（4.10）.用水溶解，定容至1000mL。4.13庚烷磺酸钠溶液：0.5mol/L。称取11g庚烷磺酸钠（4.4）用水溶解，定容至100mL。4.14盐酸溶液：0.1mol/L。吸取盐酸（4.5)8.25mL用水稀释至1000mL。4.15乙酸钠缓冲溶液：0.6mol/L。称取4.92g乙酸钠（4.6）,用水溶解，定容100mL,并用盐酸调至pH=3.0。
4.16荧光胺丙酮溶液：0.02%。称10.0mg荧光胺（4.8）用丙酮溶解定容至50mL，溶液有效期为30天。
4.17阳离子交换柱：苯磺酸型，500mg，3mL湿润。
用前分别用5mL甲醇和10mL水处理，保持柱体4.18OasisHLB柱或相当者：60mg.3mL。用前分别用3mL甲醇和6mL水处理.保持柱体湿润。4.19磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氨哒嗪、磺胺甲基异唑、磺胺二甲氧嘧啶标准物质：纯度≥99%。4.20磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异曬唑.磺胺二甲氧嘧啶标准溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备液。根据需要用流动相或0.1mol/L盐酸溶液稀释成混合标准工作溶液。5仪器
高效液相色谱仪.配有荧光检测器。5.1
5.2固相萃取真空装置
旋转蒸发器。
冷却吸气机。
液体混匀器。
分析天平：感量0.1mg.0.01g
冷热恒温水浴：精度士0.50.
真空泵。
微量注射器：25L，100±。
移液器：0.2mL,1mL,2mL.
鸡心瓶：150mL。
样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。玻璃贮液器：50mL。
5.14PH计：测量精度±0.02。
6试样制备与保存
6.1试样的制备
对无结晶的实验室样品，将其搅拌均勾。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样2
品瓶中，密封，并标明标记。
6.2试样的保存
将试样于常温下保存。
7测定步骤
7.1提取
GB/T18932.5—2002
称取5g试样，精确至0.01g。置于150mL三角瓶中，加入25mL磷酸溶液（4.11)，于液体混勾器上快速混匀1min，使试样完全溶解7.2净化
将塞有玻璃棉塞的玻璃贮液器连到阳离子交换柱上，把样液（7.1)倒人玻璃贮液器中，在减压情况下使样液以≤3mL/min的流速通过苯磺酸型阳离子交换柱，待样液完全流出后，分别用5mL磷酸溶液和5mL水洗柱，弃去全部流出液。最后用40mL磷酸盐缓冲溶液(4. 12)洗脱，收集洗脱液于100mL平底烧瓶中。在洗脱液中加入1.5mL庚烷磺酸钠液（4.18),然后用磷酸（4.3)调至pH=6。按上述方法将调好pH的洗脱液过OasisHLB或相当的固相萃取柱，调节流速≤3mL/min，待洗脱液完全流出后，再用3ml水洗柱，弃去全部流出液。在65kPa负压下，减压抽干5min，最后用10mL甲醇（4.1）洗脱，洗脱液收集于150mL鸡心瓶中。用旋转蒸发器于45C水浴中减压蒸发至干。准确加人1.0mL盐酸溶液（4.14)溶解残渣，待衍生7.3衍生化
用1mL移液器准确移取0.5mL样品溶液（7.2）或标准溶液，放人2mL样品瓶中，加人0.5mL乙酸钠缓冲溶液4.15)，拧好旋盖，摇勾。再加人0.2mL荧光胺丙酮溶液（4,16），再拧好旋盖，摇勾，放人18℃水浴中衍生30min。衍生后的样品溶液用液相色谱-荧光检测器测定。7.4色谱测定
7.4.1液相色谱条件
色谱柱：S
mmetryShieldTMPR18,5um，3.9mmX150mm或相当者；流动相
腈+0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（27+73）流速：10mL/min；
检测波长
激发波长405nm，发射波长495nm;e）柱温：55；
进样量：100
7.4.2液相色谱测定
根据样液中磺胺类药物种类和含量情况，选定峰高相近的标准工作液，标准工作溶液和样品溶液中磺胺类药物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。对标准工作溶液和样品溶液等体积参插进行测定。在上述色谱条件下，八种磺胺类药物色谱峰的分离度应大于1，其出峰顺序和参考保留时间如下。药物名称
磺胺醋酰
磺胺吡啶
磺胺甲基嘧啶
磺胺甲氧哒嗪
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺氯哒嗪
磺胺甲基异唑
磺胺二甲氧嘧啶
八种磺胺标准物质色谱图见附录A中图A.1。保留时间/min
GB/T 18932. 5-—2002免费标准下载网bzxz
本方法的添加回收率数据参见附录B。7.5平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7. 6空自试验
除不称取样品外，均按上述步骤进行。8结果计算
结果按式(1)计算：
X——试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg)；—样品溶液中被测组分的峰高，单位为离米(mm)c,一标准工作溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升(μg/mI.);V—样品溶液定容体积，单位为毫升（mL)：h，一标准工作浴液中被测组分的峰高，单位为毫米（mm)；772.
一所称样品的质量，单位为克（g）。注，计算结果应扣除空白值。
9精密度
GB/T18932的本部分精密度数据是按照GB/T6379—1986的规定，通过13个实验室、四个加水平的试样所做的试验中确定的。获得重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。9.1重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的测定值，在以下给出的平均值的范围内，这两个测试结果的绝对差值不超过重复性限（*），蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基噬啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对中氧嘧啶、磺胺氣哒嗪、磺胺甲基异嘧唑，磺胺二甲氧嘧啶含量范围及重复性方程见表1。表1含量范围及重复性和再现性方程名称
磺胺醋酰
磺胺吡啶
磺胺甲基嘧啶
磺胺甲氧哒嗪
磺胺对甲载嘧啶
磺胺氨哒嗪
磺胺甲基异嘧唑
胺二甲氧嘧啶
含量范围/（mg/kg）
0. 010 ~0. 20
0.0100.20
0. 010~~0.20
0. 010~ 0. 20
0. 010~0. 20
0.010~0.20
0.010~0.20
0.010~~0.20
注：m为两饮测定结果的算术平均值重复性限，
Igr- 1. 016 7 1gm1--0. 905 2Igr=0, 851 2 1gm-1. 158 2
Igr=0. 683 8 1gm—1. 447 6
lgr 1. 051 6 lgm- 0. 897 7
Igr=0. 954 7 Igm-0. 997 1
Igr=0. 615 1 Igm-1. 394 0
Igr=0.6742lgm-1.2860
1gr=0, 999 8 lgm-0.914 3
单位为毫克每千克
再现性限R
R=0. 252 0 m+0. 001 3
igR= 0. 878 3 lgm—0. 991 0
lgR=0. 821 7 lgm—1. 042 2
1gR=0. 781 6 Igm- 0, 989 1
1gR0.790 2 lgm-0.953 0
R=0. 146 4 m+0. 001 5
IgR=0.8268lgm-0.8362
lgR=0. 910 9 lgm-0. 891 5
如果差值超过重复性限（r)，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的测定值，在以下给出的平均值的范围内，这两个测试结果的绝对差值不超过再现性限（R），蜂簧中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲氧嘧啶的含量范围及再现性方程见表1。4
附录A
(资料性附录)
标准物质色谱图
GB/T 18932. 5-2002
为磺胺醋酰
为磺胺吡啶
为醇胺甲苯嘧啶
11.170min
13.532min
为磺胺甲镇哒哦
16.289min
为磺胺对甲氧啶
16.811min
20. 386 min
29.409min
25. 0030. 00
八种磺胺标准物质液相色谱图
为磺胺氧哒嗪
为磺胺甲基异响唑
为碳胺二甲氨噻啶
GB/T18932.5-2002
附录B
(资料性附录)
回收率
本方法中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲氧嘧啶添加浓度及其回收率的试验数据，见表B.1。表B. 1
药物名称
磺胺醋酰
磺胺吡啶
磺胺甲基嘧啶
磺胺甲氧啮嗪
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺氨哒嗪
磺胺甲基异嗯唑
磺胺二甲氧嘧啶
添加度/（mg/kg）
回收率/（%)
GB/T 18932.5-2002
中华人民共和国
国家标雅
蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶,磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氨哒嗪、磺胺甲基异呕唑、磺胺二甲氧嘧啶残留量的测定方法
液相色谱法
GB/T 18932. 5---2002
中国标准出版社出版
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开本880×12301/16印张3/4宇数15千字2003年3月第一版2003年3月第一次印刷印数上—400
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