【国家标准(GB)】 蜂蜜中青霉素残留量的测定方法 杯碟法

IC8 57.180,10
中华人民共和国国家标
GB/T18932,9—2002
蜂蜜中青霉素残留量的测定方法杯碟法
Method for the determination uf penicillin residues in huney-Cylinder plalemethod
2002-12-30发布
华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2003-06-01实施
G1518332--2002分为12今部分，本部分为第5帝分B/T18932.3—2002
B/T18332的本部分遵诚5/7C，—3001标准编写规则第4部分：化学分析方法的缅本部分的附录A是规范性泵·附录3是资料巨附求。本部分由中华人共和国国家质敏益哲检验检疫总前批出本部分出中华全国祺销作总社归口本部分起毕争堂，华人民共本再奔皇岛出人境检验检疫局。本部分主案起草虑国方、村宝莲林忠本部分系首次发布的国家标准：1范压
蜂蜜中胃霉素残留量的测定方法杯碟法
G1TR232的本部分规定「蜂资中青雄案好最轮杯储测定方法：部分适用三各种蜂数中古命素线留取的测定。分肯年的法稳出限125
2规宽性引用文件
1/118932.9—2002
下件中的条款迪过B/T189的产部的引用而成为本部分的条款。凡甚注引用文性其随后所有的修改单（不包活出误的内容》或静订版均不适用于本部分，然页，效刚根据本部分达成协设范各方研疗是否可使用这些文件的股薪版事，凡是不注日期的引用文件，其最新版本追用二本：
1[6373--193澳试方达的精需通过实验究间试验确定标准谢试方法的重友性和再现出(nen[5s725.198)
B/T3682—102分折突验牢用水规格和试验方法（unJS)7G9G：997）3原理
必杆中残留的青基案经用理感盐竭中液落解，与心后，取工需液作杯酬法测定，并升标准曲线进行定血：育册款的伴确证试验。
A试剂和材料
除导有见定外，所用战利均为分纯，本为/682一1992中规定的三级水。4.1试验末种
菲英激课f（MierueuccusLnteus）。首神号(ClirMi-alia1CultureCalle-iorCMCCkE5)2600。4.2标准物资
有每素纳。1GILI/g尚餐
,3青末的(内胺酶)）
4.4工作溶流的配制
4. 4. 1南酸缓溶波:[H6. 1,称取H, 0 无水磷酸一氢,2. 0≥无水酵酸氢二钾,解于水中并容。
4.4.2生理垫本H，5/L。称取B.5g案化销，溶郭+10m中，121℃尚压天菌2\min4.5标准率没的配制
4.5.1青军掌标准部洛落减：准确称取【抗确至（.1mL）青囊求标物成（1.).用薛酸盛规冲溶(4.4.1>落解并定容为1（(H/m7按效计换算的标准境备游做，当大配制，当天使用4.5.2需素标准工作路液：取标循储备落该（4.5.1用磷单盐诺冲落拨稀释，配制微度火C200.1Cc，斤、c，c259.0125g/的标准工作落没。当天配制当天使用，1
GB/I18932.9——2002
4.6培苏基
4. 6. 1培弃基J,见第 A, 1 旦
4.6.2券H2：见第.2新：
4.7商是漆的制备
将证册4.1）接手于培齐量2（46.2网，经、351)落18h--243：增成诺乘报析培养基1(4.0.斜（331培养1--24，1州势(1.4.2)洗F菌普茵液，4保存吃期限
5收器
5.1点器：转压个低小3003/mm
5.2离心机转速不低于4r/。
5. 3生化培养：(33=1)，
5.4商下灭南带。
5.5培养正：内经SCmm，点郭乎书收滑的玻培血敲率料血具附瓦益5.6牛杯，不锈钢小管，外在8.+0.1）m1内径（e.一0.1）m高度（10.士（.1)t.m5,诺标F尺：测量范压0mr230mm，精土心.02mm心试样的制备与保存
6.1样品的制各
将品觉拌为勾。分山0.3作为试样，剂量好的试单整于择靠中，密封：开加以标识6.2试样的保存
将样品于常温下保存
测定步骤
7. 1提取
称取1m试样，精确至.01，于501川l.离心音中。刘人21ml.磷搬盐缓冲熔变（1..1)授匀，静置1omn，月器均盈：minGcrrin）商心inin（：s）min）称款全部上清夜划20其试管中半用碘酸益凝冲激渡定存主系变，是率使含试样量为3.g/L。7.2测定
了.2.1菌悬液压再的烈定
在实京退实前、将不同依黄的菌尽减（7)加人定量的培养基！（1.6.1)中培养，能重0.C125g/L浓度的有紫标准工作溶液产生直径人十10am.消晰.完整的抑菌医为地适密恶液用最。
7.2.2检定用平的制备
将以7.2.1所得的世适菌患液所或加人已济化并冷至48%--50%左右的培券基14.5.1中，充分混可并文即做注准火有培养血市，4平血划人量“m.胃水台上辉固占，在年个检定用平板计放昏人个牛杯，他每个牛洋格在半径对2.8m的圆面成5角间距：前币平板应当天制各，7.2.3标准曲线的制备
系标证作微<1.5.2:0.20,0.10,C.050.0950.0125g/.五个法中，0.05m1标准工作游商为多专依度，
每个需索标准工作浮跟（4.5.2>液度除态亏萨变（r.5%/1mL)外，各攻二个检定用平板（7.22）为一组西组共12个检定用板，每个应定用平板中的三个牛杯内注满季考浓度(0.55g/r:L>标注工作税，另兰个牛声怀中则分别注满其他能变的标确下作溶液：这样参旁依度<0/%L>标泄GR/T18932.3-2002
工作等滚格疗出33小菌座直择效的数撕，片栏液度标准工传率液将咨得九个抑和图互作读数为数规。
益好需瓦盖，需<35=1容养18h土：后收出：翻专孕板，去十洋径执游标：尺滑院地测量名抑派降（确到1）求出济妇平板十标准工作策第及考浓（.)抑直径密数的7以值以及参考浓0品），33个内闲栏实内总半均佳。用雾考依3.3g的平均值满组李求变（005的均值之差为效以北值式他浓度标准工作游液及放测撑品范液抑医自径读教的平当道。将务组校正代人式>和克()，求出和值，在半数坐标工，以抑商图直径为纵坐标（篇本级）以标准工作溶链微度为坐标（效级），研出.和H点，进一直线即为标准L(3+26c-e)/3
I =(3e: 2d )/5
我中：
—标准曲线上最话浓度（2/m的脑图经，单位为米（m：标洋额上最高液度（0.20/)的抑南图直经，单检为整米m)c——零淡（0.c5g/mL)抑自轻的总平值单位为案来（mm）2)
.t——分别表示标准内线中其他老浓变标准T作落液（.1.2510..20rr:1)拍菌图直径效据的校下值，单位为毫.米（mm>7.2,4样晶浴液的别定www.bzxz.net
每份样品案液需一个检定用平被（7.2.）.按7.2.3标消面线司盗的要求放留二冲杯，各平板户的三个牛冲杯注满率考度.g/)标准作范技：三个半杯中让满敏测栏品落限：将险瓦益益好，.35士1)℃培养1H1=11后.翻转平板，除去牛津杯，伪游标卡尺准破地即或首图直径（精确到0，1mm），分则求出被测择战器液及垂专度抑菌雕直各读效的均。7.3确证试验
血被测样品落液排菌自经读数范平与值含mm时+应做确正式驱。取青罩素融（=.3）按产品说味稀释，将此稀释资波按比例加别样品筛液日：（1一1S），（3=1)℃旁养31ir，取三个检定用平板.接7.2.3标准出线制备的要求放置牛洋不，各平板的两个牛痒杯中注满参考流度（0.05/L)标满工作穿液，与两个牛冲怀户注满未对临处理的津品带湾.最后两个牛冲杯中违满经处理的学品滤：将陶此盖好，三1培差士」后如经酶处理过的样品穿液光冲圈形成，来经酵处妞的样品落液仍有拆菌图形成：说所样品溶波中的抑声物质确为吉综索，
本方法的系加可收牵数培参见附录，B随果计剪
如被测托品培策抑菌国宜读数的平均值m，服报告为“未检出”。效测样品落液抑函圈自径法数的平均值2m按7.8.3要衣校正后，从标准曲载上查山拓应的青亦索含量（/n，再无以样品的释释系激？即得出以/m.卡有素含量，限起确正试验（7.2报告辅果。如来样中青毒素的等盘单悦月m/kg表示时.将/rl.按式（3)进行换件t
式中：
X---样品济液中青获家的量，单位为考克干克g/kR：3
GB/T 18932.9—2002
C一从标准业线上否白方样品落液中销度的市称系含量，单位为微克在洲m别一最终品落液定所代表的样品量羊位为克升m）9精密度
GB18932的本分梳密质效折按B6379一1383的划定，别过个实案对叫个添加水半的试举所做的试验确庭为获得求和再现作的值是以%的可信亲计算。9.1至复性
在亚性条件下我得的两次独京测试结来的地对差使不超运重复性限（，今部分方法的重复限技方程（4)计算：
蜂统中青需索的含在：.22uma/R).2)mg/kg光4gr = 0. 839 8 -4w - 1. 162 543
式中：
-两次测定值的半均值，单位为变克每克kg：如果差但起过点查性权，应含试结果升平射完成两次单个试焕的测定。9.2再现性
在再现条件下，获得的次独文测试站果的绝对券值不超过币现性服R，本那分方法再项性刷抗程（5)证算：
降中放含在0035mg/ka--,2u0g/g池围：IgR = 0.308 6m0,862
式中：
附...两次测定值的平均值，单位为毫克每干克（mg/kg)。（）
A,1培养基1
牛内膏
甄化钠
附录A
规范性而
喆养基
15 -- 2t:
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将上速成分于蒸水加热答解，用1w1/.公更化约或（100)的盐醒证节法其灭后7.3G.，分装角瓶内于21火.
培养基2
蛋白陈
二肉商
氧化钠
蒸瘤水
将工咨各成分T案留水中加热率解，月1mnl/.金数化销落随或<1090)的款融源节pH，传其灭斤2J为7.3+0.1.分装于成收中，的1Gml.于121高压灭前15mm。5
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