【国家标准(GB)】 家畜日本血吸虫病诊断技术

GB/T18640-2002
日本血吸虫病（schistosomoiasis Japonicum）是牛、马、猪、羊、犬、猫等几十种哺乳动物和人的种共患寄生虫病，流行于亚洲部分国家，在我国发生于准河以南有钉螺生长的地区，是人的主要寄生虫病之一，家畜中主要发生于牛，其次是猪、羊。本病的病原是日本分体吸虫（schistosoma Japonicum），亦称日本血吸虫，简称血吸虫。诊断本病的方法有检查粪便中虫卵、粪便毛坳孵化、环卵沉淀试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验、酶联免疫吸附试验、斑点酶标记等。改进的粪便毛蜘孵化法和间接血凝试验可作为该病首选检疫技术。前者是病原检查诸法中检出率较高的方法，后者属血清学诊断，操作简便、省时、敏感性高、结果判定容易。两法均可用于家畜血吸虫病检疫、诊断和流行病学调查、后者还可用于吸虫病基本消灭和消灭地区的监测。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归。本标准起草单位：中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所。本标准主要起草人：沈杰、钱承贵。151
1范围
中华人民共和国国家标准
家畜白本血吸虫病诊断技术
Diagnostic techniques for domesticanimals schistosomoiasis Japonicum本标准规定了粪便毛蚜孵化法和间接血凝试验技术。GB/T 18640—2002
本标准适用于家畜日本血吸虫病的诊断、检疫、流行病学调查,间接血凝试验还可用于基本消灭和消灭地区血吸虫病的监测。wwW.bzxz.Net
2粪便毛蝴孵化法
2.1材料准备
2.1.1水：pH值6.8~7.2，无水虫和化学物质污染（包括氯气)的澄清水，否则需先分别作如下处理。2.1.1.1有氯气的自来水应在盛具中存放8h以上。2.1.1.2河水、池水、井水、雨水等混有水虫的水加温至60C，冷后再用。或在每5万ml.水中加含30%有效氯漂白粉0.35g，搅匀，存放20h，待氯气逸尽；也可在放漂白粉后加人硫代硫酸钠0.2g～0.4g脱氯，0.5h后用。
2.1.1.3对浑浊的水，于每5万ml.水中明矾3g5g，充分搅拌待水澄清后用。2.1.2器材、试剂：竹筷、40～80孔的铜筛滤杯、260孔的尼龙筛兜、500ml.量杯、粪桶、放大镜、显微镜、吸管、载玻片、盖玻片、炉、水温计、盆、水缸、水桶、剪刀、闹钟、天平、200mL250mL.三角烧瓶、500ml.~~1000ml.长颈平底烧瓶、脱脂棉、食盐。2.1.3送粪卡：包括村名、组名、饲养员或畜主姓名、畜别、畜名或畜号、性别、年龄、有无孕、采粪日期。2.1.4孵食室（箱）。室温低于20C时需有保持20C～25C的环境条件，如温箱或有取暖设备的房间。2.2操作方法
2.2.1采粪和送检：采粪季节宜于春、秋两季，其次是夏季，不宜于冬季。采粪时间最好于清晨从家畜直肠中采取，或新排出的粪便。采粪量：牛、马粪200g，猪粪100g，羊和狗粪（农家）40g。每份粪样需附上填好的送粪卡，于采粪当天送到检验室。2.2.2洗粪和孵化：将每头家畜的粪便分三份，每份粪量牛、马50g，猪20g，羊、犬10g。然后根据实际情况选用下列一种方法进一步操作。2.2.2.1尼龙筛淘洗孵化（25C）后，放在铜筛中淘洗，弃去滤杯，滤液倒人尼龙筛兜中用水淘洗干净，最后将洗粪渣倒人三角烧瓶或平底长颈烧瓶中加满25C左右清水。为便于观察毛蜘，在瓶颈下二分之-一处加一块2cm～3cm厚的脱脂棉，再加满水。2.2.2.2塑料杯顶管孵化：置粪于铜筛滤杯中，在盛满水的特别塑料杯内充分淘洗后，弃去滤杯，沉淀30min，倒去三分之二，加25C水，盖上中间有孔的塑料杯盖，再加满水，再将盛满水的试管口寒一块2 cm～~3cm厚的脱脂棉，倒插人塑料杯的孔中。2.2.2.3直孵：将粪置于量杯中加少量水搅勾，再加满水，沉淀30min左有，倒去三分之--至一分之一，余下的粪水倒入平底长颈烧瓶中，加水至瓶颈下三分之一处，加人2cm～3cm脱脂梯球，再加满孵中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-02-19批准152
2002-05-01实施
化用水。
GB/T18640—2002
2.2.3孵育：将装好的三角烧瓶（平底长颈烧瓶或塑料杯）放于20C～26C箱（室）中，在有一定光线的条件下进行孵育。
2.2.4判定：从孵育开始到1h、3h、5h后各观察～一次，每个样品每次观察应在2min以.上。发现血吸虫毛即判为阳性。血吸虫毛坳眼观为针尖大小，灰白色、梭形，折光强，和水中其它小虫不同处是近水面作水平或斜向直线运动。当用肉眼观察难与水中的其它小虫相区别时，可用滴管将虫吸出置显微镜下观察，显微镜下可见毛蝴前部宽，中间有个顶突，两侧对称，后渐窄，周身有纤毛。在一个样品中有1～5个毛蝴为十，6～10个毛蝴为十十，11～20个毛为十++，21个毛蝴以上为++++。3间接血凝试验
3.1材料准备
3.1.1器材：V形微孔有机玻璃血凝板（孔底角90°），25μL定量移液器，滴管、可插针头的滴管或1mL～2ml注射器，12号针头。
3.1.2生理盐水、蒸馏水。
3.1.3诊断液和阴、阳性血清：按说明书处理和保藏。3.2操作方法
3.2.1用滴管滴4滴生理盐水于血凝板左边第1孔内，用同一滴管加人被检血清1滴，使血清成5倍稀释。
3.2.2用带12号针头滴管在板左边第2、3孔中各加生理盐水1滴（μL）。3.2.3用移液器将第1孔中血清混勾，混勾方法是反复吸吹三次，然后吸25μL已混匀液加人右边邻孔中，此孔血清成1：10稀释。
3.2.4用移液器和3.2.3一样混勾第2孔血清，吸取25ul.加入第3孔中，此时该孔血清成1：20稀释。
3.2.5用移液器和3.2.4一样混匀第3孔血清，吸取25μl丢弃。3.2.6每份被检血清和阳、阴性血清按同样方法用3个孔，也可不用阴性血清而设生理盐水对照孔，此时另取2个孔各加25μL生理盐水作空白对照。3.2.7用带12号针头的滴管加人1：10及1：20血清稀释孔及空白对照孔各一滴诊断液，振荡血凝板，使诊断液和血清混匀，置20C～37C条件下1h2h，等空白或阴性血清对照孔中血球全部沉于孔底中央，呈一圆形红点，且阳性血清两孔中血球没有全部沉人孔底中央即无圆形红点或仪有很小的圆形红点即可判定结果。
3.3.1判定标准
a）红血球全部下沉到孔底中央，形成紧密红色圆点，周缘整齐为阴性（一）；b）红血球少量沉于孔底中央，形成-较阴性小的红色圆点，周围有少量凝集红血球为弱阳性（+）；c）红血球约半数沉于孔底中央，形成一更小红色圆点，周围有-层淡红色凝集红血球为阳性(++）;
d）红血球均勾地分散于孔底，形成一淡红色薄层为强阳性（+十十）。3.3.2结果判定：以血清10倍和20倍稀释孔出现3.3.1中的b)、c）、d)凝集现象时，被检血清判为阴性，
3.3如阴性或生理盐水对照孔2h后红血球沉淀图象不标准，说明生理盐水质量不合标准或血凝板孔未洗净，需检查原因，重新操作。153
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。