【国家标准(GB)】 猪旋毛虫病诊断技术

GB/T186422002
旋毛出病（trichinellosis in swine）是·种危害很大的人曾共患寄生虫病。它不仪给畜牧业和肉品工业造成严重的经济损失，前H对人类健康也构成严重威胁。本病病原为旋毛虫，是英国学者JamesPamesPaget1835年首次于伦敦-体中发现，同年（wen定名为：trichincllaspiralis简称旋毛虫。后来证实，出此虫引起的旋毛虫病是-一种杜界分布的人兽共患寄生虫病，可感染人和150多种哺乳动物，目前全世界都有本病的发生。本病的诊断方法主要有两类。一是病原学诊断，包括直接采集肌肉进行目检、压片镜检和集样消化；另··类是血清学诊断，包括皮内反应、补体结合反应、对流免疫电泳、胶乳凝集试验、间接荧光抗体、皂土絮凝试验、间接血凝试验、环坳沉淀试验、酶联免疫吸附试验(EIISA)等。为了保证《中华人民共和国动物防疫法》的实施，结合世界动物卫生组织［WorldOrganizationfonAnimalHealth（英），)ffice IntentionaldesEpizootic（法），OIE编写的该病检疫方法，特制定本标准。本标准规定旋毛虫压片镜检、集样消化两种方法。主要用于感染旋毛虫猪的定性。上述方法具有操作简便，快速.根据不同情况可作为产地、琚宰加「和流行病学调查以及进出口猪和猪肉的检疫。本标准的附录A、附录B都是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出：本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归目。本标准起草单位：中国人民解放军农牧大学。本标准主要起草人：徐克成、阎去河、郑明光、周志江。163
1范围
中华人民共和国国家标准
猪旋毛虫病诊断技术
Diagnostic techniques for trichinella spiralis in swine本标准规定了璇毛虫压片镜检、集样消化等诊断技术。GB/T 18642--2002
本标准适用产地检疫、屠宰加工、流行病学调查和进出口猪及猪肉的检疫。2压片镜检法
2.1实验材料
2.1.1甘油透明液、盐酸溶液、美蓝溶液［见附录A（标准的附录))。2.1.2仪器：显微镜。
2.2操作方法
2.2.1新鲜肉检验
2.2.1.1采样
自躺体两侧的横膈膜肌脚部各采样块，记为份肉样，其质量不少于50g～100g，与躺体编成相间号码。如果是部分嗣体，可从励闻肌、腰肌、咬肌、舌肌等处采样。2.2. 1. 211检
撕去膈肌的肌膜，将膈肌肉缠在检验者左手食指第指节上，使肌纤维垂直子手指伸展方向，再将左于握成半握拳武，借助于拇指的第节和中指的第二节将肉块固定在食指上面，随即使左手掌心转向检验者，右手拇指拨动肌纤维，在充足的光线下，仔细视检肉样的表面有无针尖大半透明乳白色或灰白色隆起的小点。检完一面后再将隔肌翻转，用同样方法检验膈肌的另面。凡发现上述小点可怀疑为虫体。
2.2.1.3压片
前按下述方法制备压片：
a）放置夹压玻片：将漩毛虫夹压玻片放在检验台的边沿，靠近检验者；b）剪取小肉样：用剪刀顺肌纤维方向，按随机采样的要求，自肉上剪取燕麦粒大小的肉样24粒，使肉粒均匀地在玻片1.排成排（或用载玻片，每片12粒）；c）压片：将另·夹压片重选在放有肉粒的夹压片上，并旋动螺丝，使肉粒压成薄片。2.2.1.4镜捡
将制好的压片放在低倍显微镜下，从压片…端的边沿开始观察，真到另端为止。2.2.1.5判定标准
镜检判定标准如下：
a）没有形成包囊期的旋毛虫：在肌纤维之间呈直杆状或逐渐蜷曲状态，或虫体被挤于压出的肌浆中
b）包囊形成期的旋毛虫：在淡薇色背景上，可看到发光透明的圆形或椭圆形物，囊中央是曲的虫体。成熟的包囊位于相邻肌细胞所形成的梭形肌腔内。中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002~02-19批准164
2002-05-01实施
GB/T18642--2002
c）钙化的旋毛虫：在包囊内可见数量不等、浓淡不均的黑色钙化物，或可见到模糊不清的虫体，此时启开压玻片，向肉片稍加10%的盐酸溶液，待1min～2min后，再行观察。d）机化的旋毛虫：此时压玻片庐开平放桌上，滴加数滴甘油透明剂于肉片上，待肉片变得透明时，再覆盖夹压玻片，置低倍镜下观察，虫体被肉芽组织包围、变大，形成纺锤形、椭圆形或圆形的肉芽肿。被包围的虫体结构完整或破碎，乃至完全消失。2.2.2炼肉的检验
2.2.2.1冻肉的检验同2.2.1。
2.2.2.2冻肉的染色方法如下：
a）压片：同2.2.1.3。
b）染色：在肉片1:滴加1~2滴美蓝或盐酸水溶液.漫渍1min，盖上夹压玻片。c）镜检：美蓝染色法：肌纤维呈淡青色，脂舫组织不着染或周围具淡酱薇色。旋毛虫包囊呈淡紫色、蔷薇色或蓝色。虫体完全不着染。盐酸透明法：肌纤维呈淡灰色且透明，包囊膨大具有明显轮廓，虫体清楚。
3集样消化法
3.1实验材料
3.1.1消化液：配制方法见附录B(标准的附录）。3.1.2器械：80目铜网（网眼直径为士0.18mm）、漏斗、分液漏斗、凹面Ⅲ、组织捣碎机、溢度计、加热磁力搅拌器、显微镜（或倒置显微镜）。3.2操作方法
3.2.1采样
3.2.1.1部位：采集嗣体横膈肌脚和舌肌。3.2.1.2方法：去除脂肪、肌膜或腱膜。3.2.1.3数量：每头猪取1个肉样（100g），再从每个肉样上剪取1g小样，集中100个小样（个别旋毛虫病高发地区以15～20个小样为一组)进行检验。3.2.2绞碎肉样
将100个肉样（重100g）放人组织捣碎机内以2000r/min，捣碎时间30s～60s，以无肉眼可见细碎肉块为度。
3.2.3加搅拌
将已绞碎的肉样放人置有消化液的烧杯中，肉样与消化液（见附录B)的比例为1：20，置烧杯于加热磁力搅拌器上，启动开关，消化液逐渐被搅成一漩涡，液温控制在40（～43C之间，加温搅拌30min～60min，以无肉眼可见沉淀物为度。3.2.4过滤
取80目的筛子，置于漏斗上。漏斗下再接一分液漏斗，将加温后的消化液徐徐倒人筛-广。滤液滤人分液漏斗中，待滤干后，弃去筛子上的残渣3.2.5沉淀
滤液在分液凝斗内沉淀10min～20min，旋毛虫逐渐沉到底层，此时轻轻分几次放出底层沉淀物于3.2.6漂洗
沿间面Ⅲ边缘用带乳头的10ml.吸管徐徐珊人37激自来永，然后沉淀1min~2mn，并轻轻沿叫面皿边缘再轻轻多次吸出其中的液体如此反复多次，加人或吸出凹面皿中的液体均以不冲起其沉物为度，直至沉淀于凹面血中心的沉淀物上清透明（或用量简自然沉淀，反复吸取清的方法进行漂洗）。
GB/T18642--2002
3.2.7镜检
将带有沉淀物的凹面放入倒置显微镜或在80～100倍的通显微镜下调节好光源，将凹面IⅢL左右或来回税动，镜下捕提虫体、包囊等，发现虫体时再对这·样品采用分组消化法进…步复检（或压片镜检），直到确定病猪为止。
甘油透明液
加双蒸水至
盐酸水溶液www.bzxz.net
盐酸(HCI)
加双蒸水至
美蓝溶液
饱和美蓝酒精溶液
加双蒸水至
胃蛋白酶（3000国际单位）
盐酸（密度1.19）
加蒸馏水至
加温40C搅拌溶解，现用现配。
GB/T18642
附录A
（标准的附录）
旋毛虫压片法用溶液配制
附录B
（标准的附录）
消化液的配制
1000 mL
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