【国家标准(GB)】 小麦粉破损淀粉测定法 α-淀粉酶法

中华人民共和国国家标准
小麦粉破损淀粉测定法
α-淀粉酶法
Methodfordeterminationofstarchdamageinflour-Alpha-amylasemethod
主题内容与适用范围
GB/T9826-88
本标准规定了用α-淀粉酶测定小麦粉破损淀粉值的原理使用的试剂、仪器、分析的步骤以及结果计算。
本标准适用于小麦粉破损淀粉值的测定。2方法原理
小麦粉中破损淀粉对α-淀粉酶的敏感性大大高于未破损淀粉,在常温下能被α-淀粉酶降解生成糊精和一定量的还原糖。利用此特性在规定的条件下用α一淀粉酶降解小麦粉中破损淀粉，再用铁氰化钾法测定其还原糖量，并根据法兰德的经验公式计算小麦粉中的破损淀粉值。
3试剂
以下试剂未经标明的均为分析纯试剂,水为蒸馏水。3.1
缓冲溶液
溶解4.1g无水乙酸钠于水中，加入3mL冰乙酸，再用水稀释至1000mL，pH值应为4.7土0.1。
3.2提取溶液
将20g氯化钠及0.2g乙酸钙溶于水中，再稀释至1000mL。3.3α-淀粉酶液
称取活性相当于15000土1500A的α-淀粉酶制剂溶于500mL提取液中再加入500mlL缓冲液,α-淀粉酶活性测定见附录A(补充件)α-淀粉酶活性测定。此溶液用时现配。3.410%(V/V)硫酸溶液。
3.512%钨酸钠溶液。
3.60.1M碱性铁氰化钾溶液
称取32.9g干燥纯净的铁氰化钾与44.0g无水碳酸钠溶于1000mL水中，贮于棕色瓶避光
保存。
3.7乙酸盐溶液
70g氯化钾和40g硫酸锌溶于水中，加入200mL冰乙酸，再用水稀释至1000mL。3.810%碘化钾溶液。
3.91%淀粉溶液。
3.100.1M硫代硫酸钠溶液
称取24.82g硫代硫酸钠（含5个结晶水）和3.8g四硼酸钠溶于1000mL水中，贮于棕色瓶避
光保存，一星期后按GB5490《粮食、油料和植物油脂检验一般规则》附录B规定方法标定其浓度。
3.11酸洗石英砂。
4仪器和用具
4.1玻璃试管：Φ25×220mm。
4.2量筒：50mL；25mL。
4.3恒温水浴：可控温30士0.1℃。4.4秒表。
4.5加液器或移液管：2mL;10mL。4.6移液管：5mL。
4.7玻璃漏斗及中速滤纸。
4.8电炉。
4.9锥形瓶：100mL。
4.10滴定管：10mL。
4.11天平：感量0.01g;0.1mg。
4.12pH计或精密pH试纸：可测pH4.7土0.1。5分析步骤
5.1称样量
一般小麦粉均假定其水分含量为14.0%，淀粉含量为68%～72%，称样量为1.00土0.01g。如果淀粉含量过高或过低时,则称样量应按式(1)计算：70
称样量(g)=
(95-P-M)
式中：P—100g试样中蛋白质的克数(含氮量×5.7);M—100g试样中水分的克数。
5.2酶解
称取5.1规定量的试样于玻璃试管中，加入1小勺酸洗石英砂，混匀并将式样摇松倾斜于试管底部,准确量取46mL已预热至30℃的α-淀粉酶液,先将少许α-淀粉酶液加入试样中并尽量摇匀，立即计时，再加入其余α-淀粉酶液，加盖试管并上下颠倒摇动约30次使试样均匀悬浮.迅速将试管浸入30c水浴中.然后每隔10min取出试管，上下颠倒摇动10次使试样重新均匀悬浮恒温酶解刚好60min时，取出试管,立即加入2mL10%硫酸溶液,充分混匀后,再加入2ml12%钨酸钠溶液，摇匀并放置约2min后，用中速滤纸过滤。充去最初几滴，收集滤液于干净锥形瓶中,此滤液即为试样测定液。另取一支试管不加小麦粉试样，同时同上操作，所得滤液即为空白对照。5.3测定还原糖
准确吸取5ml试样液于试管中,再准确加入10mL0.1M碱性铁氰化钾溶液,混合后将试管
浸入剧烈沸腾的水中（可将试管置于铁丝笼架放入铝锅煮沸的水中，每次可同时作多个样品的测定）继续加热待水再沸腾后开始计时.准确反应20min后.取出试管立即置流水冷却。冷却后将试管中溶液倒入锥形瓶中,并用25mL乙酸盐溶液分三次洗涤试管一并倒入锥形瓶内，再加入10mL10%碘化钾溶液。然后用0.1M硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，再加入约1mL1%淀粉液，继续滴定至溶液蓝色消失（半分钟内溶液不返蓝色）,记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为V1(mL)。
吸取空白对照液5mL代替试样液，同上操作，记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为V2(mL)。
6结果计算
6.1氧化5mL样品液（相当于0.1g小麦粉样品）中还原糖所需0.1M铁氰化钾体积V按式(2)计算：
V=(V2 - V1)x
式中：V
氧化试样液中还原糖所需的0.1M铁氰化钾液的体积,mL；-滴定试样液用去硫代硫酸钠的体积,mL；滴定空白液用去硫代硫酸钠的体积，mL：硫代硫酸钠的摩尔浓度,M；
换算成0.1M铁氰化钾溶液体积的系数。6.2小麦粉麦芽糖值的确定
根据式(2)计算所得V值在表1中用插入法查出相应的100g小麦粉中含有麦芽糖的克数,即为该样品的麦芽糖值L。
表1小麦破损淀粉的麦芽糖值换算表每100g
被还原的
铁氰化钾
｜面粉麦
芽糖值
【被还原的丨
|被还原的|每100g|被还原每100g每100g面
面粉麦【的0.1M|面粉麦
铁氰化钾粉麦芽糖值丨铁氰化钾「芽糖值丨铁氰化丨芽糖值1钾mL1g
2.4 1 1.21
6.3小麦粉破损淀粉值(P)按式(3)计算P=(5XL-3.5)X6
式中：L一小麦粉麦芽糖值。
7结果允许差
两次测定结果之差不得超过平均值的5%，测定结果保留小数点后一位。附录A
α-淀粉酶活性的测定
(补充件)
A1主题内容和适用范围
本补充件规定了用比色法测定α-淀粉酶活性的方法。(3)
本补充件适用于各种来源的α一淀粉酶制剂及谷类产品的α-淀粉酶活性的测定。A2方法原理
α-淀粉酶能降解β-限制糊精经过不同的反应时间后.反应混合物与碘的显色强度随时间增加而降低,用测定这种显色强度随时间降低的速度来反映α-淀粉酶的活性。A3试剂
以下试剂未经标明的均为分析纯,水为蒸馏水。A3.10.2%氯化钙溶液。
A3.2碘贮备液
溶解11.0g碘化钾于少量水中，加入5.5g结晶碘，搅抖至碘完全溶解，再稀释至250mL置棕色瓶中贮于暗处。此液可保存一个月。A3.3碘稀释液
溶解40.0g碘化钾于水中，加入4.0mL碘贮备液，用水稀释至1000ml,用时现配。A3.4缓冲溶液
溶解164g无水乙酸钠或272g三水乙酸钠（CH3C00Na·3H2O)于水中，加入120ml冰乙
酸,用水稀释至1000mL。
A3.5可溶性淀粉。
A3.6β-淀粉酶液
取10g具有酶活性的新鲜黄豆粉（粗细度为通过1.5mm孔筛的筛下物）于烧杯中，加入85mL水和15mL0.05M硫酸溶液,充分搅匀，静置15min后，用中速滤纸过滤,该滤液用于制备β-限制糊精。
A3.70.05M硫酸溶液。
A3.8β-限制糊精
称取5.00g(以干态计）可溶性淀粉于小烧杯中，加入约20ml水，搅拌使成悬浮液，然后将悬浮液边搅拌边缓慢倒入盛有约100mL沸腾水的高型烧杯中,并用洗瓶将小烧杯中淀粉全部转
移至高型烧杯，继续搅拌并加热使缓慢沸腾2min，然后用表面血盖上烧杯口，取出用流水冷却，再加入25mL缓冲溶液及50mLβ-淀粉酶液，在室温下，放置24h后，加入一匙浮石粉，在10min内缓慢加热至沸，保持沸腾5min后,取出流水冷却,最后用水定容至250mL,摇匀、过滤，滤液中加几滴甲苯,在25℃以下贮存5天，此溶液的pH须在4.7士0.1。A4仪器和用具
A4.1玻璃试管。
高型烧杯：250mL。
A4.3容量瓶：250mL;100mL。
玻璃漏斗：Φ6cm。
A4.5表面血：Φ7cm。
移液管：2mL;5mL;15mL。
量筒：25mL；50mL。
加液器或移液管：10mL。
电炉：1000W。
恒温水浴：可控温30±0.1℃及20+0.5℃。A4.11秒表。
实验磨粉机。
A4.13筛子：孔径为1.0mm及0.8mm。A4.14pH计或精密pH试纸：可测pH4.7土0.1。A4.15分光光度计。
A5分析步骤
A5.1α-淀粉酶溶液的配制
A5.1.1酶制剂α-淀粉酶液的配制称取α-淀粉酶制剂4~8mg,用0.2%氯化钙溶液溶解并稀释至100mL。根据该溶液酶活性的大小再用0.2%氯化钙稀释至适合于测定活性的溶液，稀释后的溶液应使35%～60%的限制糊精在15～40min内被降解，即最后测得的吸光度值应为底物校时吸光度值的40%~65%。
A5.1.2麦芽粉及其他产品α-淀粉酶液的配制测定麦芽粉可称样100g,如测定其他产品，则根据酶活性的大小拟定称样量,均按下述步骤提取酶液。
将预先在30℃水浴中恒温10min以上的0.2%氯化钙溶液100土0.5mL加入试样中，加塞振摇使充分混合，立即置于30℃c水浴中，每隔15min取出试管，上下颠倒混合10次，再浸入水浴(振摇次数与程度对结果有影响),恒温提取60min后取出过滤(不要振摇),此滤液即为酶提取液，
A5.2底物的校准
A5.2.1混合5mLβ限制糊精及15mL0.2%氯化钙溶液于烧杯中。A5.2.2在试管中先加入10mL稀释碘液，再加入A5.2.1的混合液2mL,然后用适量的水稀释(一般稀释水量为20～40mL之间）混合后在20℃下用1cm比色杯在波长575nm下测其吸光度。
A5.2.3调整原稀释水量再按A5.2.2操作，反复多次直至测得的吸光度值在0.55～0.6之间，记录此时稀释水量V（mL），即为该底物的校正水量。A5.2.4在另一支已加入10mL稀释碘液的试管中，加入2mL0.2%氯化钙液代替混合液，同A5.2.2操作,作为A5.2.2测定吸光度时的空白对照。A5.3α-淀粉酶活性测定
A5.3.1将待用B-限制糊精预热至30℃。A5.3.2吸取A5.1稀释后的酶液15mL于试管中，置30℃水浴恒温5~10min。A5.3.3用速流移液管吸取5mL已预热的β-限制糊精迅速加入含15mL酶液的试管中,在加入糊精的同时立即用秒表计时，然后分别在30℃恒温10min和30min时吸取此混合液，按下述操作。
A5.3.4吸取2mL上述混合液立即加入预先加入10mL稀释碘液的试管中，再加入A5.2.3测得的水的体积V(mL)(即校正水量),混匀后在20℃下恒温，并用1cm比色杯在波长575nm下测定吸光度（如测定一系列样品可在所有样品均完成显色后再一起测定吸光度但最长间隔时间不得超过1h)。
A5.3.5用2mL0.2%氯化钙溶液代替混合液，同A5.3.4操作，作为A5.3.4测定吸光度时的空白对照。
A6结果计算bzxz.net
α-淀粉酶活性(A)用水解B-限制糊精的速度常数表示,按式(A1)计算：500K·f
式中：A-—α-淀粉酶活性；
G称取酶制剂的毫克数或其他产品的克数：(A1)
f—指称取酶量溶于100mL氯化钙后再稀释的倍数（例称取5.0mg的酶制剂溶于100mL氯化钙后，再吸取该液2mL稀释至100mL，此时f=100/2=50)；500换算成实用值的因素；
K——水解β限制糊精的速度常数,按式(A2)计算：IgEtl-lgEt2
（A2)
式中：lgEt1—在10min时测得的反应混合物的吸光度的对数；IgEt2——在30min时测得的反应混合物的吸光度的对数；t1——A5.3.3中第一次吸出反应混合物的时间,min;t2—A5.3.3中第二次吸出反应混合物的时间,min。A7结果表示及允许差
A7.1测定结果的活度单位在50以内的,取小数点后第1位；测得结果活度单位在50～500，取至个位；活度单位在500～5000时，取至十位；活度单位在5000～50000时，取至百位。A7.2两次测得结果之差不得超过平均值的10%,如平均值低于2个单位，则不得超过0.2个单位。
附加说明：
本标准由商业部粮食储运局归口。本标准由商业部四川粮食储藏科学研究所负责起草。本标准主要起草人祁先美、李志明、杨浩然。中华人民共和国商业部1988-07-06批准1989-03-01实施
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。