【国家标准(GB)】 柱液相色谱分析法通则

7cs 71.040.40
中华人民共和国国家标
GB/T16631-1996
柱液相色谱分析法通则
Gcncral riles for analytical ethodsof liguid column chromatograpby1996-12-02发市
1997-05-01实施
国家技术监督局发布
CB/T 16631--1996
引用标准
方法概要
流动相
性速充剂
试验前的准备工忙
色措社的评价
色谨图的
底性分析 -
定量分析
13分于蛋的测牢
附景A（提示的断录)
附录B（提示的除录）
时录C（提示的附录）
附录D(提示的脂录
附录E（提示的附录）
附录F（提示的附录）
陆录G（提示的附录）
附录H提示的谢录
录J（提示的解录）
附录K（提示的附录）
附录1.(提示的附求)
附录M《提示的录）
附录N（提示的附示）
附录P(提示的附录）
明于液相色谐法中溶剂的生质
二元落剂体系的组成与其强皮的关系溶剂的选择性三角坐托
离了交换色借法中用的授中剂
柱填充剂
化学键合相柱填充卉
环境要类
安全要求
典型标难色谱函的操作登教
鉴定分离组分的仪器和化学方送.\定甚分析方法的证算公式
使用营适校准进行分子量测定的M一H常数典弹的体识排除色谱法色诺图
均分注年的单示例
GA/T16631:-1596
本标准延考日本JISK0124--1B3高效液相年谱分析通则以及有关国内，再女资物按G8/T二，1一1933标准化工作守则第1单元：标准的起苹与表述规则第1部外：标准缩写的基本现定制炭的。
本JSK124--1933仅仪适用十高效袋村垒谱法，内穿陷单。本标适用于柱接相负诺法（包括高效柱液相色谱稳）并且增划了章、条及其相关内客，本标准附录、附求.附录C、附录、附录E、附F.附求G、附最H.附求、附、附录I附永M、随录N,附录P都是示的防录。本标准由中华人民共和画化学工业部据出本标准由化学工业标准化研究所归。本标准起草单位：化学工业部标准化研究所、天津大学，术标准主要超草人，架建安，赵秋安，1范围
中华人民共租国国家标准
柱液相色谱分析法通则
(eneral rules for analytical methodsnf liquid eolumn chromalagraphyGE/T 16631—1996
本标准裁定了性液相色活（筒称波相色谱，下可}分析法遇期，透用于采用液过色谱分析法对无机，有机化合物的定性、定分析，以及对高分子化合物的分予量的测定的一教要求。2引用标准
下列标准所付含的条文：过在本确准中写用而构感为本标准的条支，本标准归版时，所求费本品为有效。所有标准都会龄修订，便用本标随的各为面座深讨快用下列标证最新版本的可能性。GB/T SC09·S8腋相鱼谐法术谱柱液相色消法和·半面色谱法3方法概翼
液相色谱分析法是在性营内进行组分处离整被相色游法。液体或固体试样用液态流体（溶剂或榕液>偿为流动相便其遇注色推，出十试栏益历定板和肺动扫中分配系数和其他作用力的差异，变流体力学体积的不司而被分高成各个组分，流动相中的务个组分通过持性检测器测量以及信导的记景根据各组分的保留值，峰商、瞬面租等选行定性，定量分析和分子量并定。4悦器
波柑色谱仪一般由分离、检测、记录等部件组成。如图1中所示，协瘦汽脱缺器
4.1分离部分
4.7.1储液器
执分收典所
快迎期
图1液相色谐仅示意图
记年裤
数据处理款量
存储流世扫的容器，有的包括划热器、择器、真空川和通性气体的入口。穿解中已轮纯化的流动相，经烧结斗够头（5m），由泵输送到色谱柱，储流器的材质不应流被准动相侵性和污染。一-股应该用玻璃，不诱钢或氨望料等材质组，4.1.2泵
输送流头柜的部件，可以得到所需的账方并能调节及提供稳的、精确的流量（一般是0.1～0.国家梦术监督照1996-12-02批准1997-05-01卖施
G/T156311996
rL/mi）。使用于产效滤相色潜拍余，月提0～5MPu轮压力。索有狂复泵、注射系、气动系、蜗动东等，泵体接流动相的部分不应该缺设性和活实以及穿易选行流动拍的些换。4.1.3格度洗脱装益
供给二元或多元个资剂可接需并连势改变塑分配比的部件，档度洗悦装有两类4.1.3.1症压系统
随动相在常玉下混合或流动相经电阀按比引进入系，然后将其输入色溶杜系统.该装经所用的弱应该是内体积小使流动柜正泵内的混会影响满空最小。妊往左象，4.1.3.2高压系统
一-般将两流动相分另！用泵增压，搭已注入游合器中，再摘人色潜拉系统。该装策所月的混合器的世积要尽基小，使在开始选行混合和在性的入口处山现梯发之间只需要很短的时闻.限合馨家该身于转，
4.1.4进样装百
能将试样注入色诺柱部件，日前使用的有三种方法。4.1.4-1证射器
该法利月啦量注封器（或注射器）将基针头穿过注射口处的随照直接押达样注人色谱性。愿膜材料不仅能经受高压，还应对掩洲有好的稳定性，一股应该也史策快胶整片，当尽力大扩1CM12时，应使用学流进样技术，
4.1.4.2进
该法利月为通阀杠试样坏管与色谨系统相连接，用微孟注射露将试样注入并部分或完全充满环管。通过阀切换使流动相把环管中的试惜携措人色进，六通阀必能耐高压。环件一般用不锈调制成，期体积可从儿个微升到几个毫刀，对丁快用小体积许管时：生购豹白和色谐柱之间不能有明显的死体积。
当换试样时·应该清洗六通阀，以免前后不同试性的平扰。4.1.4.3口动进举器
利用机橘舒由微处理机控制，能将率个试护准确均、剪现性地白动注.人色谱系统，可以改变或样的处理、进梯、分析等系件，行速续自动分析，也能紫急捐人分析。4.1.5转箱
出加热.溢度控制及测温元件等组成的容器，能够保持试验时所需要的温度和容纳试验所燃用的色谱排.
~-般往箱温度的控制精度应在1%之内。在用干述积排除色谱法侧定高分了化合物时，有时需要在较商的差度下操作-以增邯试样在流动归中的落解堆及降低流动相的相度。4.1.6#管
一最月不锈钢.玻璃或其他会成材料等材资制。泌须能承受试验时的揭作压方，不归蔬动相起化学作用,挂管清净，内缠光谢，耐商性。璃封质制成的柱管通带宋能在高于？MPe时捷用H前-般内径4~mm、长5~30m成内径1~2agl、长1~25cm杜管，在带的尺-成与在填弃剂的颗控度相匹配，
4.2检测部分
4.2.1.检测器
检测器有时放置在能课持湿虑或离了柱指盗度范容器中。目前使冠的相色诺检酮翻有两类，总体生能检测器。示荐折光率检测器，（激光>光散射检测器、电孕函检测器等。溶就性能检测器；如数外一可见光检谢，荧光检测能、红外光度计检测器等。G1/T16631-1996
紫外可光险器和示差光率险器是在波相包谱法中常用的一种检侧器。4-7.1.1紧外--可见光检器对避流速变比相对地不敏感，对崇外一可见光有吸收的试样部能拉测，其检测激度由试举在该格测波长下的吸收第数决定，拒在检测器波长范同内尤吸收的试样见不检测
选用的流动相必券在检测器所用的波长处无吸收低吸收·梯度洗脱时，若有微小的吸改，划必源进行肾禁和除，用作流动树拍剂，违窗其紫外数止波民。4.2.1.2示案折光4险测器对任期分的托光率和流动期并折光牵有差别时帮乳使用。检测器对量度的变化抑流量的皱动较数感：值动相组录的改变其行光率亦随之发生变化，固此·示卷新光率检测器不能同于梯度洗脱4.7.1.3二极辨阵划按测器：这是来串光电二设管库列作为检测元件的紫外一可见光验测器，可以多通道并列检构或金光检况，
这种检测器主双持点：
扫恼速度快。可以在不停流的杀件下惑寻洗脱组分的全光讲图，提供光谱资料；一利用比政光落达，判别色谐睦的纯度及分离犬况，年色谱峰的前，后暂和峰高处各取-一点，比将这三个位置的光造图，若三个光诺图完全相立互函断时，说明是纯峰，若不完企匹配，说明峰有杂质能给制三维色谱图，由于扫摘速度快，约10m5可以将190~600口m整个光选范圈扫完，谨过二维色谱图能税察到试择中所有组办对涉长的响应值，又由于每个纠分部有全波段的光谱吸收，因此，可利用色谱谐保留值规律及为谱特征吸收前线握商判别洗脱组分的恒质的能力。4.2.1.4（激光)光散射粒测器是量分子浓的散射光强度，--般测尽高分子物质的分子量。4.2.1.5荧光检测器能测望某些组分在紫外光微发下所发射出的荧光，是-种很灵敏选择生好的检澳器.
4.2.1.6电化学检涵器可以在挂流出液中测受许多浓度很低的其有试化或还原性、电导性以及一此离的组分，是一种与选择性和更敏性的检解。4-2.2疏分收集器
用于收架流出液的装丝。有手控和白动两种：手控的灌分收常器是根据需要分别收策保值不同的组分丁专用的誉内。白动的流分收集器是止储定收举任留值不同的组分，按照预定程序还续地打开战关闭相应的阅门，使流出液自动流向固定的管内，多次进样时，可以重复收别所需组分的流出液，达到制爸纯化试样的旦的。集流出波一般使用孩均材质的等器：4.3证表部分
4.3.1记录辈
能够在录状图统上用记录笔记球色谱图，显示冬组分的色潜峰，4.3.2数处理发码
积分变，接时间累积捡测系统所产坐的电信号，自乱测定峰高及轻面钢的数字典分帮和折印机。微处望几：道过微处理机与色谱仪的接口，将色谐信号及控制丝诺仪各部分管号辑送到微处埋机。微处理航可以按指令控制台变多台色谱仪，并处理客种色谱信号，进行计算及落制外部事件。5流动相
连疫相色借中由于流动相分子态高试详分子及定相分于之可的作用，因此，在液档色谱快中流动相的遗择尽垂要的分离因索。
液相色谱法中使用的值动相一般应该足下列要求，与试样、固定相不发生反应：
G/T166311996
一一不便试详改变性质、引文能接解试样：具有台适的溶剂殖度
滚剂沸点应该高于分离温座20--5CC种度在分离女下不超过C.5必与检测器匹配
一用作流动析的溶剂（神或二种以上)要系相落解；一-—安全毒。
5.1游齐
在选持动相时，必凝专虑潜剂的各性质.求相产谱法中用作试效扫的落剂片性资，见能案人示的对），
5.2分离变与5的关系
减相色谱法中和邻色潜峰的分离状况，可用分离来表征：分商可用公式1)表示：R-+,
......
上式表明分两度受（理论报数）、必（分离区子)及（穿量国子)二个三立的国案的影时对分机。股希R=-。R=1,两告语择之间有2%的重受R-.1.5,两色谱呼达到基线分离）,柱效率愈高，分离愈好因彭，商效感充剂及有效的柱填充方法是取得高效包谱柱关锂。从上面等式中,老”与。相同的条什下.α了·*在！--5之间对R值影响最人.一般在液扫色诺中控制在1～之函《对分及分析对问都比较合造），通过调节落剂的配比，耳谢节溶剂就竞，读组分在此范围内进行洗脱。若在此范国内仍有某些望分不能分离，可以保持此合适落剂强度的情流下，改变流动相性原，达到改变。的日的（。与试样分于，流动相分子之闻相互作用力有关）。5-3剂强与极性的表
5.3.1落剂强度参数.用酵腔，氧化铝柱实充剂测得。溶剂锻性月溶剂强度参数表示，t值的大小表示该溶剂洗脱能方的大小，对于试样所与组分来说，塔加慎床若溶剂强度的增如和&他的融少。在浓固含谱法中，一般都采用二元溶剂混合物作为流动推，一个溶产，为情性落剂·另一个为极性销强的溶剂，但混会后将剂强度不呈浅性变化。二元管辨体系药组成与其逼度的关系，见附录B(据示的附录）.5.3.2流解度参数8。由弹点计算得到，是培剂极性较好的表示方法，流剂相对极性的且度，非极生路剂关肯小，极性落剂的值人，济刺的分与试样分了之间有相互作方，即色散作用方偶极作用力%妥氢质子的能力，质于给于能力%，一般由8查来控制溶剂度，当值调节到合造范逾（1车10)之后，根据试样的准质，可以用选释书值相近，但%8%、8，、8，值不同的贝一件溶剂来改变遇挥性、
5.3.3溶剂极性参数\，是在降解度基死上提出的六此，在液-液丝谱法中P简可以供一个具台一定粘表的摔剂频度实，根据分子间的作用力用X.（质千给于休）X，（质下接受体》，X，（拨短来表降剂为不的偿用月并五将常用的溶剂按强选拯性分成八个织，见降录几（是示的耐录1，间一距内范溶剂其有相似的造择性，这样，当带要改变选择性时，在同一组内只筛选择其与代表性的萍剂即可：正相和反相色谱法中，利用熔剂的选择性三角坐标，见谢录C（提示的对孕图2>，可以大大地简化止相和反相色谱法中拍剂的运握，资他们仍不能满足选择性要求时，可以考忠使用其他组为落剂，成者更精继地资节选择性时可以采月三元溶剂体系，一级可以基础格剂装度调节将利象宽，用另外一种溶热嵌度比来调节选托性。
5.4正相相按相色措法中用流动柜正相色谱法中，柱填充剂一般部具有极性（如硅政、脑供，二静基等化学提台相）.证件应采用非极栏商剂、烃类剂（东正已烷、止庆烷，异产烷等)作为基础溶剂，加人适当比例极生软强的落剂组皮混合陷剂作为流动相
GL,T16631--1996
浮剂强度可以通过改变混合穿剂中设性溶游的比例来遇整.当增大路剂，卫信时，落剂强度增，试样的链减少如值选10以后，组分仍达不到所需的分离度时，可以保持游剂强度，用选择性三均坐标中提供的不叫性所的溶剂来改普色诺峰重登组分的分商度。反期色谐共中，在真充剂-般部是非假的（如望合辛基、十八培基化学辑含相1，迪市应来用极准较强的水作为势落剂，加入适当比例与之混泥合的极性较弱的落剂如中醇新版混合溶剂作为流动相，溶剂温度一般通过改变叫人水中落剂的比例米调整，以达到组分的分离，当落剂P值增加时，熔剂独衰会陷，试伴的值增大，若个别组分达不到所需的分离度时，则可以根据分子问不同作用力性质的游剂来改著，而用乙两或四氢响段代节解或所人到原来甲馨/齐的溶剂体系中以议举分离，三元的求溶控流动柜能对某惊处商损供极好的选择性，5.5离子交换色谱法中匝流动相
在离子空换色谱姿中，流动拍带用含盐的水溶液加人适当的改性剂如甲，乙脑，月程弥落浓持所需要的PH值。
落剂强度和选择性由以下几种变盘决足：缓冲离于和盐的类型和浓度；与水互溶的有机溶剂的炎型抑浓度流勃树的H值。
流动拒的离了弱度够纪分的保留值，当离子强度增列，落剂强度亦随之增加，国为流动相中奇子的增加导致滞动相离子对试样离子在离了交换位的瓷争交换作用增大.致快试择离子加速流脱：同时：流动相离卡的类型对增洲强度有关，在阿离子交英中，具有用同依度耐不的源动相明离子，流动相溶剂强度一般按以下顾序改变：
柠檬酸根硫酸权荣酸根甲酸银乙酸根在阳离子交無中，流动相离子类型的孕化也影响剂验皮，但整别根小，主要是各种拍离子的大小和电荷变化较小，但有时阳离予类型的变比，可能改变选择性。在离了交提色谱法中，PH值的变化对试样高子的离子化及样填充剂的离子化程变都有影响，尚北,控制PH值等变化能改流动相的溶剂强，也能改变选择性。离于交换色谱法中常用的绥冲剂.见附录D(提示的附录)。5.6高予对色谐法中用流动
广对色谱法中可用证棋成反相离子对色逆分商系统，一般反对分离系统的使用更为广泛。反相分禽系统用辛基，十八烷基化学含相对，可采用用略/水或乙胞/水的涅合溶剂作为流动制在适当的缓冲减中加人与试分子形成非离子型的离了对。组分的分离随流动相的H值，缓冲潜滤的禁离子浓度、离子对试剂境革链的长湿、落剂的种类以及源速等国的变化而改变。
当改变一定二元组分限合落剂的相对浓度时，选择性的改变通带是组小的，一般通过改变筛剂来改变选托，而改动动相的H值是改分离选择性的一个很有效的方法。相分需系统中，丁静或戊醇与二款之,烷，二氯烷和（或)王己烷的混合溶剂是通常使形的流动。
一般通过政变流动相的组股来改变分选择性。瞬丁基氧化和磷酸厂基滨化恢（用于酸性化合的）以及戊势磺酸和决烷谢酸（用于玻性化合药)是常用的离子对试剂。
5.了离广色诺法中用流或相
5.1抑制型
一般选择冠作流动相的洗脱剂应浓是离子型水溶液，施从色讲柱上受换阴，阻离子，并在抑制去上发生交换反应，使洗脱高子变成低电导率物质（如水，效酸等)再逃入电孕检别系统.从而瞬决了洗部剂本身具有很高检涵信丹，即背景电导的干涉，阴离于分离时，常最被性洗脱剂，妇氢氧化钢，碳酸氢销、炭酸的、四硼酸销等。般氢的和酸酸钠的二元混合税冲溶授是激证用的流脱剂。GB/T16631-199E
其做学脱剂还有3-对羟性雨氧，甘签酸，硅题盐.对欲配等。阳离子分离时最基本的是酸性流脱剂，妇盐酸，硝毁等以及盐腰利间苯二胺或硝酸和硝酸锋二无混合溶液洗脱剂，
5.7.2非抑制型
一般选择同作诺动推的洗脱剂除和择块充剂有足筝的亲和力，并能将试样的亚，阳响子一-一洋总外应该是本背景电导案软低的物质，不用抑制性，选脱剂通过色谱纤后直接进入电导检测系统.限离子分时.革甲酸盐利邻苯.甲盐的级冲假H一--71是最常币洗脱剂。控檬酸益是-种具较弧洗脱能,小的洗脱剂.例两了产的洗脱颐序环邻案一甲酸延相同：氧化钾和盐的润合性流脱齐对弱模研离子能够得到有效范分离。对于多价引离子，妇避酸等，可用碰耕酸益如入四切酸印H,以的较属爱冲崔力的洗脱剂洗脱。
阳离子分害时：般采用渐酸，盐慢等虎脱剂以&乙一胺确酸盐洗脱润。月具有选托性络能力均性脱滤可以成动均分爽假多旧离了如乙一胶日离了加避酸报或-轻势异了酸根组欧的院脱剂都具有很好的分离效能。在商了色谱法，常需是还过改变流动相来改变选拜性，选择适当的洗脱剂是改善分离的有效方法。其次，洗悦剂的离了频度甜pI1值也是选择性和分离的有效因累，5.召体积排除色送送市统动相
体积排除色谱法与其他液相色谱法不同，不采用改变洗动相的方法来改普办离适.流动相药选择半要考虑其源解试样的能力与性填剂的匹配拟及在分离时的温度下尽否县有低艳度，因为高粘度的流动相释限制扩散作用，降低分离度，流动相必须与检测器匹配外，这么须考虑流动相与柱真充例的证配，用演极性溶剂内制.乙醇，二甲基亚强和水作泄效相时，通常不能同于案基乙炉栏境允剂。在使用软压凝胶时，必须在供动划字如人盘炎以保持裔子唱国，防离子型试样通过色谱壮时导致凝胶收靠及色谱性的净逐性降，前使月便质凝要如硅胶>时，含水的流动相中为H使必乐保持在2--8.5之间，防止填充剂降解.5.9梯度洗脱
在分离范围较宽的互架的混合组分采用梯度洗脱技术，对流动相约要求该是旁剂强度随时可而禁一定规蜂的变化.使得剑的色谱图上的各个期分的谐带都有良好的分离，梯变洗脱可以改书分离，编短组分洗脱的时间以及提高低含量组分检测的灵激度。5.10罐剂的纯北
用作流动相的溶剂在使用之前，度该除去液体中的时体杂质，必要时+还成该纯化.尔化时通带使用硅胶.氧化语.有时亦使用蒸馆，最好使用专门用丁高效液色的纯落齐一般采用加热司流、超声波掘菌、通人制或效气或其空方失脱气，除云溶解在范动相中的空气、免在分高过程中在泵、色培性，检测器里形成气泡，消除冰动相中存农的狼量餐气试件、流动相.长填充制的氧化弹裤作用。
6柱填充剂
高效色谱柱是现代液根色潜案统的核心，他能摄烘分离的组分生母小的谱带置。内此，良好的杜填充剂必是能真究均与，固定拍传质阻力很小的制质。一般使用的社填充齐应流是：
国定相与流动相必新是互不标溶的+一一具有高比表面积的粒状物质或一定孔空的多孔物质，—具有良好的说振性脂。
6.1液阅也游法中生或充剂
G8/T16631-1996
一段来用具有大比衰积（S0--100/g)的吸附剂、适营是硅胶、实化料等。有多孔型柱决充列和海充型述典方列莉音有球形和无定型二种形状.日前上多数液·固色法中使用的是5jm范的多孔型球形硅姿柱填充剂。对载感或省能起增化反应的试样，可以考虑使用泛化绍，吸谢剂表而上吸时水分了，在吸对分离性能中其有重要作用+面爱附剂水含资的控制通常是代准改变汽动相的求含城文实堤：-般用等水落剂作流动科，使用等水剂有以下益处：英次分商对，组分的保随偿变北不大：一亡某些情况下可寒将较高约往效率和减少陷希的拖昆：一一部分外不司扰号类吸附剂之间的差到，：在分离过程中，可减前吸断对就详的不必要的谁化反应。其政，法动划中加入收生剂也能收书分商性能，固色清利漫激色港法中周注填充瓶利载体，见附录E（提尔的附录表E）：6.2液-液年潜法中槛填充剂
：胶是老情性载件上均与地涤法·层固定商或者是用在腋璃珠变心修的表丽沉积一层多孔性阅层（-般用硅腔.也可有氧化铝，形成孝面多引层顺粒，（客孔层序度--般为1--3m）老轮去面多孔良上要欲泻层反是波的源充型拉境充剂，由下讯恢除演的引定液容易灌关，降此·日前在减-液告谱法中多数都使用化学键会相填充剂。6.2.1化学键合相柱块充剂
化举避合相填两剂尺为了克眼机战途资两定液在液-液色谱法中的.不足而发展起来的、出于间定液展经化学链合约载体上的，在使用过程中不愿洗说或者流失+所以，也谱注性能相当毯定，化学經全研标充养毅是准硅胶表函上内硅醇基团与各种有机化合物或有机硅化合物反应，会上各种特定基川前宝的。这些特定基闭，除烧基外，还有芳基、脂基、硝基、烷禹要、二醇基等，形成兵有不同极烂的化学想合利填充剂。化学辑合相填充剂有三外形式：Si（)R陆整错》该读充列容水解热稳定性差，日的已较心使用。若使用硅酸酯培充剂附时，只能原不含水和的市动词。
C印S:-N该携求剂的水解和熟镜定性比硅般酷块充剂性能好。也最，在充剂表面带会品下--些无用战范，彩组分的保留打性或使垒谱峰摘笔。当快用水疫使作流动相，必领将PH值制在-8的范用之内。
S-)-Si-K（硅氧烷》该填充剂是道过硅醇基与单、二或三氯硅烷，二甲基、氨基、尘氨基或烷期基硅境反应而得的争分千层的链会相消充剂，这种班充测28.6的证假范里内水解毯定性是很好的，然您定性也虾，民日前质盘最好、应用最厂泛的化学键合相垣充齐，
如果键合的基引部分（R合有宫能匠，如羊基，上八烷基等，得到的就录非极性化学健合柜，若含有官能日，如磷酸体，，解片等，得到的就是报比化学耀合相。化学链合相填充剂比机诚逸波固定滤的定有很多优之虹：.一不需性用族齿和杜
升：于固定液永久生地链众在载体上，所以，在洗脱过差巾，国定微不易洗脱或流夫，流出液不受定然转染·增虹色语特的您定性和老命；一-乒有很有的性效率利在高医下有作好的机械性能。一能够采月各种程序控制技术，包括偿度洗脱：一一用于可以键台到载体上的官能团药作类欲多，国而，正相和反相色谐的分离都可以用量齿单的?
百接的方式完成。
GA/T16631—1996
波柑色谱法中使用的化学链合相生填充剂，见附录F（提示的附录）E.3商交换色谱法中业充齐
离-产交换色谱法中惊用的柱填充剂应该是：一·需子交换物冠应该定溶解的一·其有化学稳定性：
一有一定的离子交接等望
在定正力下，离了交换真究剂传应该是垒定的，理想的应该是沟句的球述粒。一般使用的离子交换柱实究剂展用形本之烯和二人培成苯共彩物然保，被离子型宫能压所取代的产物的聚合多孔型填充剂。
最节用的是具磺毁基(-S(),H)的闭离子的柯其三烷落铰（-NR,)的阴离子的普通的树脂型离子交换剂.
游旁型填充剂用兼璃微球或表面多孔微轮（薄壳战胶）作减休再涂清一层聚合其有机离子交换布：化学链合相实充剂是以硅胶为茎体，然后在上面键健合上一层台物，除录术之烯外还可月其他集合物（如硅耐，鼠碳合物），再可引人商子交换基团，主于硅脏基体在PH值超过8.时开溶解，斯以他们在张喊条件下不能应月，其次+也可以在多孔或薄壳强战咬上除淡液体离子交换剂，离了交换剂中由丁不瓦的官轮团而录现出不同的特性。册而，在造拓离子交换存时，不间问的照合相柯不同的取代基的离广交换剂<强、弱离了交频剂可以使组分的分离顺厚成分离遗挥性产生差异，对于两性化合物（如氢基酸，活白质等），牵--定的pH值下，可以用阳或阴离了空换齐分离。离子交换剂中离子交换容量得盘要，组分的相对保暂值和试弹的任载盘险离子交换容量的增加所增火。
离子交色谱法中用柱填充剂，见附录E(爆示的附录表E2)，5.4离子对色游法中性填充剂
离对色潜法4大多采用微粒药(5～1心urn)多孔型性填效剂反板分离系统中，月前通常使用非极生化学键合柜柱填分剂。正柜分离系统11，一般使用多理型硅胶作载体，以机战吸收并训有反离子的级冲水落液作固定浓。但是必须发高子从固定相中注失以及水相必须有充分的缓冲作用。6.5离子色谱法中性填充剂
商子色谱中，“一般用多孔型和薄壳型性填充剂，抑制型。色谱性常用赢子交换穿量低，而有很分离效能的薄壳型离子交换剂。抑制栏填无离予交换容基离的中、高交联的退酸型阳高子或源贼型识密子交换剂·担是，块充抑制性在抑制生容量残一一至时.往往会产生基线变差的现象，因此.在使用-一定次数后必须再生.纤抑制是适过离广交换纤维膜米违行抑制反应，但仍受洗脱剂驱度利性尿的限制，也不能用于梯度流脱，新弹的平板做膜抑制柱冠国时具有块允抑制士的离子交换寄量高和纤维扣制性的能凸动过续再生及保持动态平衡的优点，适用于梯度洗脱、
非冲制型。色借性一般采用离子交换容录候的率孔型子交换剂，6.6体积排色谱法中性境充剂
体积排除色谱法中使用的挂英充剂按照化学炎要分为三类：软质，半硬质利硬质凝效教成凝胶。适合于用水溶减作为沉预相这种技术防凝胶过滤色谱法。主汀色谱往潜递性小，只能在低肺述下使用，其次承受压力也很小，固耐也不能在高压下但用。一般分离求陷性的心分子量的物质，平砸质凝改，适合于用有机将剂作为流动剂，这种技术称避咬婆垂色谱法。以于色带出适性良好并具有轻好的强度，序以，可在较商的压力下提高流速时使。一般孔径范围能适用丁从小分子母到分a免费标准下载网bzxz
过的大分于的分。
GL/T76531199E
逆质额胶，可用水缩液或有机落剂作为流动相，日产色港出渗逐很离，强度好，可以在较高玉下垒常速时使用。段托色范其适用于分一最从10--13的大分了的分离，在体排色谱法中，干生块充剂的孔径的大小决定了试样分于量分离的范币雨，因距，在选橘填充齐时，押想的转本列平处子盘对保留值的校性曲践图上，试评分-产大小的保留值成该是在非翰圾双印渗选极限之间的线性滚透性范围之内。体积排除也浩法牛用栏填充剂，贝附录E起示的附求表3).？试验前的准路工作
7.1投器
版相色请这安效的地点应该符合环要求，见附求提示的附录），与色谱样表流降的其接应该产密，在试验设完定的力高或低正>条件下，不能游液+疏速稳定。假舒的灵破递.使线源移成该谢足试验的要求。7.2乌谱性的块光方法
填充色诺柱的策生步三要聚决丁所用的柱填充剂的性质和颗应大小（径）。填充良好的色谱扫应该是改有消的、裂痕树赖粒粒径分级的，均的填充床。柱填充剂要尽可能的肾，但不能任版粒破教，7.2.1十法块光
下法填充的方法与气相色谐法填产色谱柱基本期向适用于批径2Fm的栏填充剂的填装。一般特往营的·一端州金屈网：率孔烧结片，多孔滤网堵住，在振动性督或减压情说下装入任境充齐，待须齐均与鉴诺以后再将注管的一端穿作，7.2.2勾装烘充
使用内证填交剂会在溶剂中落胀或距轨直径小于21m时，一册采同均浆填分。…独选据活当的率剂，将样填充剂题粒分敏在该培剂中，制成均浆签浮体，在加压下填装入持背内。对于大于\m颗粒检径的杆率充制.区沉降速度比较快，最好选择与断粒密安近似开等的落剂配耐&汀本这种方法称等密双匀浆境充非填允之前，上填充剂应终保持性深状态，不聚其钻决，不沉降分级，在落泌中令率帐的柱地充剂，在域充之前，必然预先在读变时册的溶剂中溶账。落剂不应与拉块充剂作用，填装完毕后，蒂剂应学易除大。7.3色谱社的保齐
为使适住保持住效能，延长寿命·必添注意以下事须：一-色谱托应该避免恶动，机恢违击和过高的促康，以欧填充床产生裂效：一一股授出下，成该避风冲，以填充床的移动：一一-色谱格书长期存放，应该用适当的溶剂充消，并将两端对性，以防或充床干裂：·使用时，不超过规定的压力，H使和落剂的限别。车进样得和色增在之问连接根保护出，不使其有害物质行染色诺柱。7.4流试的测造
在液出色造法中，为准确测定误密供和色请峰的大小，保持随录稳定及精确测垫说量是非崇重需的，沉其在体积排除色谱法中，流暨的变化会给分子母测定带来较人的误差。由十自谐挂部分，流动相粘度的变化和温度改变等固素都会使流量发生变化。验常用盐清组的方法是穿盘法。这种方齿趋在规定的时同内收集流动柜体积。在体积排除色治法中，常用一个虹吸计效器自动测盘流基，他是使流动相筑到一十具有一定体积的新吸管单、当虹吸能鼎京时就会国动个光也开关并在记录的色谱图上打上一个记号，恒据已知矩吸管
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