【国家标准(GB)】 贝类 记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定

ICS67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.198-2003
记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定Shellfishes-Test method of domoic acid in amnesicshellfish poisoning2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T5009.198—2003
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人：卫锋、王竹天、陈明生、王玉萍、唐守亭。564
1范围
GB/T5009.198—2003
贝类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定本标准规定了海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品（不包括盐渍制品）的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的检验。
本标准检测限为1.0μg。
本标准线性范围为1μg~250ug。2原理
试样以甲醇/水提取，经LC-SAX强阴离子柱固相萃取（SPE)净化，用RP-HPLC定量分析。3试剂
3.1甲醇：色谱纯。
3.2乙：色谱纯。
3.3三氟乙酸：优级纯。
3.4一水柠檬酸：优级纯。
3.5柠檬酸三铵：优级纯。
3.6乙睛+水（1+9)。
3.70.5mol/L柠檬酸溶液（pH=3.2）：40.4g水柠檬酸和14.0g柠檬酸三铵溶解于400mL水中，以浓氮水调pH一3.2，加人50mL乙睛，完全溶解后，以水定容至500mL。3.8LC-SAX柱:3mL
3.9标准储备液DACS-1C(100pg/mL)，或相当者。3.10软骨藻酸标准溶液：以乙睛+水（1+9)稀释标准储备液分别配成为含软骨藻酸0.1、1.0、2.5、10.0、25.0μg/mL的标准工作溶液。4仪器
4.1效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器。4.2组织均质器：最大转速20000r/min。4.3台式高速离心机：最大转速6000r/min。4.4涡旋均匀器。
4.5超声波清洗器。
5分析步骤
5.1提取
称取试样5.0g（精确到0.1g）于50ml加盖离心管中，加人10mL甲醇+水（1+1)溶液，涡旋混匀1min，超声提取5min，以4000/min离心20min，使固液两相彻底分离。移出上清液至25mL容量瓶中，残渣再加人5mL甲醇+水（1+1）重复提取两遍，上清液均移入25mL容量瓶中，以水定容至刻度，混匀。
GB/T5009.198—2003
5.2净化
取上述提取液5.0mL移人依次经6mL甲醇，3mL水，3mL甲醇+水（1+1)处理过的LC-SAX柱上，待液体以1滴/s的速度流出后，再依次用5mL乙睛+水（1+9），0.5mL柠檬酸洗脱液以1滴/s的速度过柱，弃去流出液，最后用2mL柠檬酸洗脱液洗脱吸附在柱上的软骨藻酸，供HPLC测定。注意：在液体过柱时，当液体凹液面下端与柱填料上端水平时，停止液体流出，避免LC-SAX柱填料与空气接触。5.3测定
5.3.1色谱条件
5.3.1.1色谱柱：ZorbaxSB-Ci，150mm×4.6mm(i.d.）,5μm，或相当者；5.3.1.2流动相：乙腈+0.1%三氟乙酸（13+87)；5.3.1.3流速：1mL/min
进样量：10pL：
5.3.1.5测定波长：242nm
5.3.1.6柱温：室温。
5.3.2色谱测定
分别取样液和标准溶液各10μL（或相同体积）注入高效液相色谱仪进行测定，以保留时间定性，峰面积定量。在上述色谱条件下，软骨藻酸的保留时间约为6.6min。软骨藻酸标准溶液液相色谱图见图1.
图1软骨藻酸标准样品液相色谱图5.4空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。6结果计算
AXc.XVX1000
A.xmx(V./V.)
式中：
X—一试样中软骨藻酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A—样液中软骨藻酸峰面积；此内容来自标准下载网
-标准溶液中软骨藻酸峰面积；
c，——标准溶液中软骨藻酸浓度，单位为微克每毫升（ug/mL)；m称取的试样质量，单位为克(g)。V,—试样提取液总体积，单位为毫升（mL）；V—净化用提取液体积，单位为毫升（mL）；V，洗脱液体积，单位为毫升（mL）。计算结果保留两位有效数字。
CB/T5009.198—2003
注：计算结果需扣除空白值，报告结果时以贝类中可食组织部分的记忆丧失性贝类毒索软骨酸的含盘（mg/kg）报告结果。
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。567
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。