【商检行业标准(SN)】 出口畜产品中炭疽杆菌检验方法

中华人民共和国进出口商品检验行业标准

SN 0331—94

出口畜产品中炭疽杆菌检验方法

Methods for the inspection of bacillus anthrax in animal by-products for export

1994-12-26 发布 1995-05-01 实施

中华人民共和国国家进出口商品检验局 发 布

中华人民共和国进出口商品检验行业标准

出口畜产品中炭疽杆菌检验方法SN 0331—94

Methods for the inspection of bacillus anthrax
in animal by-products for export

代替 ZB X09 010—86

1 主题内容与适用范围

本标准规定了出口畜产品中炭疽杆菌的检验。

本标准适用于出口鬃、毛、绒、野生动物毛皮、生骨粒及其他畜产品中炭疽杆菌的检验。

2 设备和材料

2.1 离心机：带容量在500 mL以上的离心管。

2.2 恒温培养箱：$36 \pm 1$ ℃。

2.3 恒温水浴：$30 \sim 65$ ℃。

2.4 生物学显微镜。

2.5 三角烧瓶：容量250 mL、500 mL和1 000 mL，带胶塞。

2.6 平皿：直径90 mm，或100 mm。

2.7 试管：$10 \text{ mm} \times 120 \text{ mm}$和$20 \text{ mm} \times 140 \text{ mm}$。

2.8 吸管：1 mL和10 mL，带0.01 mL和0.1 mL刻度。

2.9 L形玻璃棒。

2.10 注射器：1 mL带5号针头。

2.11 棉拭子：长180 mm的竹签或铁丝，一端裹$20 \sim 30$ mm长的棉球，用水浸湿，另一端裹在试管的棉塞内，插入试管高压灭菌。

2.12 棉布袋：$70 \text{ mm} \times 130 \text{ mm}$，带缩口绳。

2.13 养鼠罐。

3 培养基和试剂

3.1 溶菌酶多粘菌素琼脂：见A1。

3.2 戊烷脒多粘菌素琼脂：见A2。

3.3 营养肉汤：见A3。

3.4 营养琼脂：见A4。

3.5 洗样液：见A5。

3.6 生理盐水：见A6。

3.7 缓冲生理盐水：见A7。

3.8 固定液：见A8。

3.9 炭疽杆菌噬菌体：见A9。

3.10 革兰氏染色液：见A10。

3.11 大豆凝集素稀释液：见A11。

4 抽样

4.1 鬃、毛、绒、生骨粒

4.1.1 抽样数量

按生产日期或原料来源划分批次。每批按30%开包(箱)抽样或在扎包(装箱)时由每包(箱)各取一份样品。

4.1.2 抽样方法

用火焰灭菌的镊子或戴经消毒的乳胶手套从每包(箱)的不同部位共抽样3～5g，装入灭菌棉布袋内，将袋口扎紧，作上批次标记。

4.1.3 送样

将样品装入塑料袋或铁桶内，密封后送样。

4.2 动物毛皮

4.2.1 抽样比例

逐张取样。

4.2.2 抽样方法

用灭菌棉拭子涂擦样皮的真皮面。将棉拭子插入试管，塞紧棉塞。

4.2.3 送样

将试管逐支用纸包裹，装入铁桶内，再用棉花或软纸填充空隙，密封后送样。

5 样品处理

5.1 鬃、毛、绒、生骨粒

1. 根据样品多少将适当数量的同批样品(最多不超过10份)合编为一个检验样品单位，作好记录。
2. 从合编为一个检验样品单位的每个样品袋中各取1～2g样品，一起放入一个适当大小的灭菌三角烧瓶中。
3. 加样品量30～40倍(W/V)的预冷洗样液于三角烧瓶，用灭菌胶塞将瓶口塞严。
4. 将三角烧瓶放入冰水浴或0～4℃冰箱内，间或摇动约1h。
5. 将瓶中洗样液倒入500mL灭菌离心管内，盖住管口，以3 000 r/min离心20min。
6. 弃去上清液(注意防止污染)，加少许灭菌水，使沉淀均匀悬浮。
7. 将离心管静置5～10min，待杂质下沉后，将上悬液移入另一支灭菌试管内，于65℃恒温水浴加热30min。
8. 加洗样液后的样品于热处理前如不能及时检验，应贮于0～4℃冰箱内，以防芽胞发芽。

5.2 动物毛皮

如不立即检验，将棉拭子放于0～4℃冰箱内。

6 检验方法

6.1 分离培养

6.1.1 鬃、毛、绒、生骨粒

1. 根据每管所包括样品份数之多少，各接种1～3个溶菌酶多粘菌素平板或戊脒肟多粘菌素平板。接种时，用灭菌吸管吸取样液，滴加于平板表面，各0.1～0.3mL。如有剩余样品，可增接数个平板，直至将样品接种完。
2. 用灭菌L形玻璃棒将滴加的样液涂布均匀。如样液较多，可将平板置于36±1℃温箱，微开皿盖，使样液迅速干燥。
3. 翻转平皿，置于36±1℃恒温箱，培养24～48h。