【商检行业标准(SN)】 烟草环斑病毒检疫鉴定方法

SN

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1146—2010

代替 SN/T 1146-2002

烟草环斑病毒检疫鉴定方法

Detection and identification of tobacco ringspot virus

2010-05-27 发布 2010-12-01 实施

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局 发布

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

本标准代替 SN/T 1146—2003《烟草环斑病毒检疫鉴定方法》。

本标准与 SN/T 1146—2003 相比，主要技术变化如下：

• 现场检疫抽样按照 SN/T 2123—2008《进出境植物及植物产品检疫抽样》执行（见 6.2）；
• ——删除了原标准规范性附录 A；
• ——增加了“检疫检查”一节（见 6.3）；
• 免疫电镜方法按照 SN/T 1840—2006《植物病毒免疫电镜检测方法》标准（见 7.3）。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：陈枝楠、邓欣、郑松、袁于丽、郑文军、王东勇。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

• SN/T 1146—2003。

烟草环斑病毒检疫鉴定方法

1 范围

本标准规定了进出境植物检疫中对烟草环斑病毒的检疫鉴定方法。

本标准适用于进出境植物及其产品中烟草环斑病毒的检疫鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

3 原理

烟草环斑病毒（Tobacco ringspot virus，简称 TRSV），异名为银莲花坏死环斑病毒（anemone necrotic ringspot virus）、蓝莓环状斑驳病毒（blueberry speckle ringspot virus）。该病毒为等轴多面体球状病毒，直径 28 nm～29 nm，属线虫传多面体病毒属成员。可侵染54科、300多种植物，其中主要的经济作物有：大豆、马铃薯、甘薯、烟草、西瓜、黄瓜、甜瓜、胡萝卜、芹菜、百合、鸢尾、苹果、葡萄、樱桃桃等。TRSV 侵染的症状因寄主而异，通常叶片出现环状或线纹状、褪绿斑或花叶、坏死症；根腐烂；果实小、畸形等。该病毒主要依靠线虫和种子进行传播，土壤可存活于北美洲、大洋洲、欧洲、亚洲等地区，具有寄主广泛，适应症状明显，免疫原性强，容易制备高滴度、专化性强的血清抗血清等特点（参见附录 A）。通过血清学双抗体夹心法（DAS-ELISA）结合生物学鉴定方法或免疫电镜检测，作为检疫工作中鉴定该病毒的依据。

4 用具、设备、设施

研钵，微量移液器，酶标仪，低温离心机（转速≤10,000 r/min），生物培养箱（具有光照，温度可控范围为0℃～50℃），微孔板（96孔或48孔）、Eppendorf管（体积为1.5 mL）、单道移液器（10 μL、100 μL、1,000 μL）、多通道移液器（100 μL 或 200 μL），恒温水浴锅或恒温培养箱，分析电子天平，pH计，白瓷板（40 cm×30 cm），镊子，离心机控温仪。

5 试剂

5.1 PBS-T Buffer缓冲液

将氯化钠（NaCl）8 g、磷酸二氢钾（KH₂PO₄）2 g、磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）14.5 g、氯化钾（KCl）0.2 g，吐温-20（Tween 20）0.2 mL，溶于蒸馏水，定容至 1,000 mL。

5.2 样品提取缓冲液

将亚硫酸钠（Na₂SO₃）1.3 g、聚乙烯吡咯烷酮（MW40,000～60,000，PVP）20 g、叠氮钠（NaN₃）0.5 g 溶于 PBS-T Buffer缓冲液。