【商检行业标准(SN)】 茨城病免疫琼脂扩散试验方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1357—2004

茨城病免疫琼脂扩散试验方法

Protocol of AGID for ibaraki disease

前 言

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：刘友清、卢晓中、栾风钦、潘学昌、姜勇。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

炭疽病免疫琼脂扩散试验方法

1 范围

本标准规定了牛炭疽病免疫琼脂扩散试验方法。

本标准适用于进出境牛炭疽病的检疫。

2 材料

2.1 试剂

1. 琼脂糖（电泳用）、0.9%生理盐水。
2. 抗原、标准阳性血清。

2.2 器材

1. 吸管、量筒、三角烧瓶、直径为90 mm平皿。
2. 水平台、天平、金属打孔器，可调式微量移液器及吸头。
3. 模板纸：中间一个孔周围六个孔，孔径为4 mm；孔间距（边缘）均为3 mm。

2.3 被检血清

无菌采血，分离血清，4°C暂存或冰冻保存。

3 操作方法

3.1 琼脂平板的制备

取琼脂糖1 g，0.9%生理盐水100 mL，加入三角烧瓶，在水浴中充分煮沸腾化，或115°C 10 min高压，冷却至56°C左右，将洁净干热灭菌的平皿置于水平台上，每个平皿加20 mL（厚度3 mm），加盖凝固后，把平皿倒置，防止水分蒸发，放4°C冷藏保存。

3.2 打孔

反应孔现用现打，从冰箱中取出琼脂凝胶板，放在模板纸上，照图案在固定位置上，立即用金属打孔器打孔，将孔中的琼脂柱用针头轻轻挑出或吸出，勿伤边缘。

3.3 加样

制好孔型的平皿写上日期及编号，用可调式微量移液器加样。使用图1时，“G”孔加抗原，使用图2时，在中央孔加抗原，“+”孔加标准阳性血清，其他孔均加被检血清。每孔均以加满不溢出为度，每加一个样品应换一个吸头。然后将琼脂板放入有湿纱布的带盖湿盒内，置室温（20°C～25°C）使之扩散和反应。