【商检行业标准(SN)】 鱼真鲷虹彩病毒聚合酶链反应操作规程

SN

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1675—2005

鱼真鲷虹彩病毒聚合酶链反应
操作规程

Protocol of polymerase chain reaction (PCR) for red sea-bream iridovirus (RSIV) of fish

2005-09-30 发布 2006-05-01 实施

前 言

本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：刘燕、范万红、罗卫、黄曦、吕建强、秦智锋。

本标准为首次发布的出入境检验检疫行业标准。

鱼真鲷虹彩病毒聚合酶链反应
操作规程

1 范围

本标准规定了用聚合酶链式反应技术检测鱼真鲷虹彩病毒的方法。

本标准适用于鱼真鲷虹彩病毒的检测和鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682—1992 分析实验室用水规格和试验方法 (eqv ISO 3696:1987)

GB/T 18088—2000 出入境动物检疫采样

3 试剂和材料

除特别指明外，本标准使用试剂均为分析纯。

3.1 水：应符合 GB/T 6682—1992 中一级水的规格。

3.2 Taq 酶：5 U/μL，-20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。

3.3 dNTPs：含 dCTP、dGTP、dATP、dTTP 各 10 mmol/L。

3.4 引物：浓度为 40 μmol/L。其序列如下：

RSIV F,5’ GTG ACT GCA CAC CAA TGG AC 3’

RSIV R,5’ GGC TTC CTC AAT CAG CTG GC 3’

3.5 无水乙醇：分析纯，使用前预冷到 -20℃。

3.6 矿物油：使用无热盖的 PCR 仪时使用，要求无 DNA 酶。

3.7 核酸分子量标准参照物。

3.8 溴化十六烷基三甲胺 (CTAB)。

3.9 溴化乙锭 (EB)。

3.10 琼脂糖凝胶。

3.11 三氯甲烷。

3.12 异戊醇。

3.13 琼脂糖。

3.14 三羟甲基氨基甲烷 (Tris)。

3.15 醋酸铵。

3.16 乙二胺四乙酸二钠 (EDTA)。

3.17 溴酚蓝。

3.18 蔗糖。

3.19 盐酸。

4 器材和设备

4.1 PCR 扩增仪。