【商检行业标准(SN)】 猪传染性胃肠炎阻断酶联免疫吸附试验

SN

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1446.1—2004

猪传染性胃肠炎
阻断酶联免疫吸附试验

Blocking ELISA for transmissible gastroenteritis of swine

中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局发布

前 言

本标准的附录A为规范性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：李健、胡永强、王巧会、李树清。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

猪传染性胃肠炎
阻断酶联免疫吸附试验

1 范围

本标准规定了猪传染性胃肠炎阻断酶联免疫吸附试验（ELISA）试验方法。

本标准适用于猪传染性胃肠炎的检疫、流行病学调查、抗体水平检测以及与猪呼吸冠状病毒 (PRCV) 感染的区别诊断。

2 仪器设备、试剂和材料

2.1 仪器设备

普通天平，分析天平，200 μL 可移液器，精密滴头，恒温箱，酶标仪，洗板机等。

2.2 试剂

配制见附录A。所有化学试剂均为分析纯。

2.3 材料

2.3.1 猪传染性胃肠炎标准抗原微孔板。

2.3.2 标准 TGEV 阳性对照血清、TGEV/PRCV 阴性对照血清、PRCV 阳性对照血清。

2.3.3 标准抗 TGEV 单克隆抗体、抗 TGEV/PRCV 单克隆抗体。

2.3.4 辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的抗鼠 IgG：商业采购，使用前对同一批号的产品进行工作浓度测定。

3 操作程序

3.1 样品

血清或血浆。

3.2 操作步骤

1. 3.2.1 使用前取出所有试剂，平衡到室温 (20℃~25℃)。将反应板/条做好标记。
2. 3.2.2 用洗液洗板三次，每次 5 min，最后一次扣下去除所有残留液体。
3. 3.2.3 立即分别加入 TGEV、PRCV 阳性对照血清和 TGEV/PRCV 阴性对照血清到相应血清对照孔，100 μL/孔。具体添加见图1。
4. 3.2.4 用多道移液器添加 PBS-T 到所有样品孔，50 μL/孔。然后加入未稀释的待检血清，50 μL/孔，每份样品两孔。见图1。
5. 3.2.5 密封微孔板，37℃温育 2 h。
6. 3.2.6 按 3.2.2 操作洗板。
7. 3.2.7 立即加入工作浓度的标准抗 TGEV 单克隆抗体和抗 TGEV/PRCV 单克隆抗体，到对应血清孔，100 μL/孔（见图1）。
8. 3.2.8 密封微孔板，室温 (20℃~25℃) 温育 30 min。
9. 3.2.9 按 3.2.2 操作洗板。
10. 3.2.10 加入工作浓度的 HRP 标记抗鼠 IgG，100 μL/孔，密封微孔板，室温 (20℃~25℃) 温育 30 min。
11. 3.2.11 按 3.2.2 操作洗板。
12. 3.2.12 快速加入底物溶液，100 μL/孔，暗室室温 (20℃~25℃) 温育 20 min 左右至颜色变化。