【商检行业标准(SN)】 水泡性口炎补体结合试验操作规程

SN

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1166.1—2002

水泡性口炎补体结合试验操作规程

Protocol of complement fixation test for vesicular stomatitis

2002-11-25发布 2003-05-01实施

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局  发布

前 言

水疱性口炎（Vesicular Stomatitis, VS）补体结合试验在参考国际兽疫局(OIE)《哺乳动物、禽和蜜蜂 A 和 B 类疾病诊断试验和疫苗标准手册》和实践经验的基础上制定。

本标准的附录A为规范性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：花群义、庞晓黎、徐自志。

本标准系首次发布的检验检疫行业标准。

水泡性口炎补体结合试验操作规程

1 范围

本标准规定了水泡性口炎补体结合试验方法。

本标准适用于动物水泡性口炎病毒抗原检测。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过在本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682—1992 分析实验室用水规格和试验方法 (eqv ISO 3696:1987)

3 缩略语

下列缩略语适用于本标准。

• CF：补体结合试验；
• $CH_{50}$：50% 补体溶血单位；
• VSV：水泡性口炎病毒；
• VSV-ND：水泡性口炎病毒新泽西型，VSV-IN：水泡性口炎病毒印地安那型。
• VD：巴比妥缓冲液。
• PBS：磷酸盐缓冲液。

4 原理

补体结合试验包含两个系统，第一系统为反应系统，即已知抗原（或抗体），被检血清（或抗原）和补体。第二系统为指示系统（亦称溶血系统），即溶血素加绵羊红细胞，溶血素即抗绵羊红细胞抗体。补体常用豚鼠血清，它对红细胞只有较弱的溶解能力，补体只能与抗原-抗体复合物结合并被激活产生溶血作用。因此，如果试验系统中的抗原和抗体是对应的，形成了免疫复合物，定量的补体就被结合，这时加入指示系统，由于缺乏游离补体，就不产生溶血，即为阳性反应。反之试验系统中缺乏抗原或特异性抗体，不能形成免疫复合物补体就游离于反应液中，被指示系统，即溶血素加绵羊红细胞免疫复合物激活，发生溶血，即阴性反应。

5 试剂和材料

• 5.1 溶血素：由指定单位提供。也可用 50% 的绵羊红细胞连续免疫家兔而获得兔抗绵羊红细胞血清，即溶血素。
• 5.2 补体：由指定单位提供。也可采集健康的公豚鼠血清，2只～3只豚鼠血清混合，分装成每小管 1 mL，置于-25℃以下低温冰箱保存使用。
• 5.3 2.8%绵羊红细胞悬液的制备：可直接购买保存于阿氏液中的鸡羊红细胞。也可自行采取，保存于阿氏液中。用前将 VD 离心洗涤三次至上清液清亮，若二次离心仍不能使上清液清亮，则应更换新批号的红细胞。取离心沉淀的绵羊红细胞（按离心管上的刻度定即可）2.8 mL，加 97.2 mL 的 VBD。