【商检行业标准(SN)】 山羊关节炎-脑炎抗体检测方法　酶联免疫吸附试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1171.1—2003

山羊关节炎-脑炎抗体检测方法
酶联免疫吸附试验

Detection of antibodies against caprine arthritis-encephalitis virus—
Protocol of enzyme-linked immunosorbent assay

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局

前 言

本标准根据 OIE/chapter 2.4.4《诊断试验和疫苗标准手册》起草。

本标准的附录A、附录B均为资料性附录。

本标准由国家认监委认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、国家质量监督检验检疫总局标准化法规研究中心。

本标准主要起草人：杨宝华、崔路、曾宪生、张艳。

本标准是首次发布的检验检疫行业标准。

山羊关节炎-脑炎抗体检测方法
酶联免疫吸附试验

1 范围

本标准规定了应用酶联免疫吸附试验（ELISA）批量检测山羊血清中抗山羊关节炎-脑炎病毒抗体的方法。

本标准适用于山羊关节炎-脑炎的流行病学调查、诊断、检疫和疫情监测。

2 试验原理

酶联免疫吸附试验（ELISA）的基本原理是将酶分子与抗体或抗原特异性结合，此种结合不改变抗体的免疫反应活性和酶的生化活性。标记抗体可与吸附于固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合，随后加入的底物可在酶分子的作用下呈显色反应，因而可借颜色反应的深浅来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与样品中相应抗体或抗原的量呈正比，通过酶标仪检测颜色反应的光密度值。本标准的反应原理就是将CAE病毒抗原包被在96孔聚苯乙烯微量板上，接着加入按一定比例稀释的待检血清，待反应一定时间后，加入酶标记的抗山羊免疫球蛋白抗体，反应完成后，加入底物显色并检测反应结果。

3 试验准备

3.1 仪器

二氧化碳培养箱、酶标仪、倒置显微镜、超速离心机、高速离心机、细胞培养瓶、多孔道微量加样器、96孔聚苯乙烯微孔板等。

3.2 试剂

3.2.1 TNE缓冲液

0.02 mol/L Tris-HCl, pH7.4；0.01 mol/L 氯化钠，0.001 mol/L EDTA。

3.2.2 洗涤液

含0.05% Tween 20的生理盐水。

3.2.3 pH7.2 PBS溶液

氯化钠8.0 g，氯化钾0.20 g，磷酸氢二钠1.15 g，磷酸二氢钾0.20 g，水溶至1 000 mL。

3.2.4 高盐稀释液

含0.05% Tween 20、10%小牛血清的0.5 mol/L氯化钠溶液。

3.3 标准抗原与血清制品

CAE病毒、标准抗原、阳性血清、阴性血清由指定单位提供。抗山羊IgG过氧化物酶结合物按市售说明书使用。

4 试验程序

4.1 ELISA操作程序

4.1.1

在96孔聚苯乙烯微量板中加入用PBS（pH7.2）稀释的50 μL最适稀释度的CAEV抗原，封口后置4℃ 48 h，用洗涤液洗板二次，甩干后封封于-20℃保存备用（用前洗板四次）。