【商检行业标准(SN)】 山羊关节炎-脑炎抗体检测方法　琼脂免疫扩散试验

SN

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1171.2—2003

山羊关节炎-脑炎抗体检测方法
琼脂免疫扩散试验

Detection of antibodies against caprine arthritis-encephalitis virus(CAEV)—Agar gel immunodiffusion(AGID)

2003-03-17 发布 2003-09-01 实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

前 言

本标准根据 OIE/chapter 2.4.《诊断试验和疫苗标准手册》起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：杨宝华、崔路、耿健、曾晓平。

本标准是首次发布的出入境检验检疫行业标准。

山羊关节炎-脑炎抗体检测方法
琼脂免疫扩散试验

1 范围

本标准规定了应用琼脂免疫扩散试验检测白山羊血清中山羊关节炎-脑炎病毒抗体的方法。

本标准适用于山羊关节炎、脑炎的流行病学调查、诊断、检疫和疫情监测。

2 试验原理

琼脂是一种含有硫酸基的多糖体，高温时能溶于水，冷却后凝固，形成凝胶。琼脂凝胶呈多孔结构，其孔径大小取决于琼脂的浓度。1%琼脂凝胶的孔径约85 nm，这一孔径范围能允许可溶性抗原抗体分子在琼脂凝胶中自由扩散，并由近及远形成浓度梯度。当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应，并形成沉淀带。根据有无沉淀带的形成判断是否存在相应的抗原抗体免疫反应，从而判别样品中是否存在相应的抗体或抗原。

3 仪器与试验准备

3.1 CAE琼脂扩散抗原和阳性对照血清

由指定单位提供。

3.2 琼脂糖凝胶板的制备

用Tris-HCl缓冲液配置0.9%～1%琼脂糖并制板：Tris 0.605 g和氯化钠(NaCl)8.0 g溶于100 mL蒸馏水中，继用1 mol/L盐酸(HCl)溶液调pH至7.2。然后加入0.9 g～1 g琼脂糖，隔水煮沸溶解或高压溶解，冷却至55℃左右取约15 mL倒入直径为8 cm平皿制作琼脂糖凝胶板，冷却后4℃保存备用。

3.3 采样与样品处理

无菌条件下静脉采血5 mL左右。将血液进行血清分离后，经56℃水浴灭活30 min后待检。

3.4 仪器

天平(0.001 g)、水浴锅、琼脂凝胶打孔器。

4 操作步骤

4.1 打孔

取冷却琼脂糖凝胶板用打孔模具按下列图示进行打孔，孔径5 mm，孔距为8 mm。打孔结束后将平皿底部经过酒精灯火焰上方，来回5次～7次封底（适用于玻璃平皿）。将所打的孔按图1进行编号(1~6)。

[图片]

图 1