【商检行业标准(SN)】 植物检疫　烟草环斑病毒检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1146—2002

植物检疫
烟草环斑病毒检疫鉴定方法

Plant quarantine—Method for inspection and identification of tobacco ringspot Nepovirus

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

前 言

本标准附录A为规范性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：陈枝梅、郑文华、邓琼、王东勇。

本标准系首次发布的检验检疫行业标准。

植物检疫
烟草环斑病毒检疫鉴定方法

1 范围

本标准规定了进境植物检疫中对烟草环斑病毒的检疫鉴定方法。

本标准适用于进境植物种子、苗木、繁殖材料和植物产品中烟草环斑病毒的检疫鉴定。

2 原理

烟草环斑病毒(Tobacco ringspot Necrovirus,简称 TRSV)为等轴多面体球状病毒，直径为 25 nm～29 nm。属线虫传多面体病毒属成员。可侵染 54 科、265 种植物，其中主要的经济作物有：豆类、马铃薯、甘薯、烟草、西瓜、黄瓜、甜瓜、胡萝卜、豌豆苗、百合、香芋、李属、苹果、葡萄、油橄榄等。该病毒主要分布于北美、大洋洲、欧洲、亚洲等国家。具有寄主广泛，危害症状明显、免疫原性强、容易制备高滴度、专一性强的病毒抗血清等特点。通过血清学双抗体夹心法(DAS ELISA)和鉴别寄主生物学鉴定方法或免疫电镜检测，可以作为检疫工作中检疫鉴定该病毒的依据。

3 仪器

3.1 研钵

3.2 微量移液机

3.3 酶标仪

3.4 低速离心机(转速为 1000 r/min)

3.5 生物培养箱(具有光照，温度可调范围为 6℃～50℃)

3.6 酶联板(48 孔或 96 孔)

3.7 Eppendorf管(体积为 1.5 mL)

3.8 微量移液器(分为 100 μL、200 μL、1000 μL 单头，100 μL 或 266 μL 8 孔道一支及对应吸头)

3.9 恒温水浴锅或恒温培养箱

3.10 分析电子天平

3.11 计时器

3.12 白瓷盘(40 cm×60 cm)及白色头镊子

3.13 病毒检疫温室

4 试剂

4.1 10×PBST缓冲液

将氯化钠(NaCl)80 g、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)2 g、磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)11.5 g、氯化钾(KCl)2 g、吐温 20(Tween-20)5 mL 溶解于 1 000 mL 蒸馏水中形成的液体。

4.2 样品提取缓冲液

将亚硫酸钠(Na₂SO₃)1.3 g、聚乙二醇基吡咯烷酮(MW24～4 000，PVP)20 g、氯酸钠(NaN₃)0.2 g、吐温 20(Tween-20)20 mL 溶解于 1 000 mL PBST 中，用浓盐酸(HCl)调节 pH 值至 7.4。并储存于 4℃。