【团体标准】 食用植物油中角鲨烯的测定 气相色谱-串联质谱法

ICS 67.050 B 33 T/ZNZ 027—2020 浙江省农产品质量安全学会团体标准 食用植物油中角鲨烯的测定 气相色谱-串联质谱法 Determination of squalene in edible vegetable oil by gas chromatography-tandem mass spectrometry 2020-07-01 发布 2020-08-01 实施 浙江省农产品质量安全学会 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。 本标准起草单位：绿城农科检测技术有限公司、南京市产品质量监督检验院、江苏实朴检测服务有限公司、杭州绿品检测技术有限公司。 本标准主要起草人：朱萌萌、王川丕、章虎、张永志、周敏、周婷婷、黎斌、杨婷婷、黄亮、胡松、钱珊珊、彭倍、何晓明、郭利攀、余鹏飞、赵月钧、孙文闪、刘亚楠、俞璐萍、王卢燕、桑力青、刘臻、章舒祺、卢军、林文伟、王峰、刘月、叶宇茜。 1 范围 本标准规定了食用植物油中角鲨烯含量的气相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于食用植物油中角鲨烯含量的测定。本方法中角鲨烯检出限为0.05 mg/kg，定量限为0.1 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 15687 动植物油脂试样的制备 3 原理 试样用正己烷提取，经中性氧化铝（Alumina-N）小柱净化，采用气相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 正己烷（C₆H₁₄）：色谱纯。 4.1.2 二氯甲烷（CH₂Cl₂）：色谱纯。 4.1.3 无水硫酸钠（Na₂SO₄）：使用前在650 ℃灼烧4 h以上，冷却后储存在干燥密闭容器中，备用。 4.2 标准品 4.2.1 角鲨烯（C₃₀H₅₀，CAS号：111-02-4）标准品：纯度≥90%。 4.2.2 角鲨烷（C₃₀H₆₂，CAS号：111-01-3）标准品：纯度≥90%。 4.3 标准溶液配制 4.3.1 角鲨烯标准储备溶液（1000 mg/L）：准确称取25 mg（精确至0.1 mg）角鲨烯标准品，用正己烷溶解、定容至25 mL，4 ℃避光密封保存，有效期1年。 4.3.2 角鲨烯标准中间溶液（10 mg/L）：准确吸取1 mL角鲨烯标准储备溶液（4.3.1），用正己烷稀释、定容至100 mL，4 ℃避光密封保存，有效期3个月。 4.3.3 角鲨烯标准工作溶液（1 mg/L）：准确吸取1 mL角鲨烯标准中间溶液（4.3.2），用正己烷溶解、定容至10 mL，4 ℃避光密封保存，有效期3个月。 4.3.4 标准工作曲线：分别准确吸取角鲨烯工作溶液（4.3.3）10 μL、20 μL、40 μL、80 μL、160 μL、320 μL和角鲨烯标准中间溶液（4.3.2）64 μL、128 μL于1 mL容量瓶中，各加入角鲨烷标准工作溶液100 μL，用正己烷定容至刻度，得到0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.08 mg/L、0.16 mg/L、0.32 mg/L、0.64 mg/L、1.28 mg/L的标准曲线工作溶液，供气相色谱-串联质谱仪测定。 4.4 材料 4.4.1 固相萃取柱：中性氧化铝（Alumina-N），容积6 mL，填充物1000 mg。 4.4.2 微孔滤膜（有机相）：孔径0.22 μm。 5 仪器 5.1 气相色谱-串联质谱联用仪：配电子电离源（EI）。 5.2 分析天平：感量0.1 mg和0.001 g。 5.3 涡旋振荡器。 5.4 旋转蒸发仪。 6 分析步骤 6.1 试样制备 按GB/T 15687要求执行。 6.2 提取 准确称取0.5 g植物油试样（精确至0.001 g）于15 mL刻度管中，准确加入0.25 mL角鲨烷内标溶液，加入5 mL正己烷，混匀。 6.3 净化 在中性氧化铝小柱上层添加0.5 cm高的无水硫酸钠，分别用5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷对小柱进行活化，弃去淋洗液，待正己烷液面略高出无水硫酸钠层时，立即倒入上述待净化液，收集洗脱液于50 mL梨形瓶中，用5 mL正己烷清洗刻度管后倒入中性氧化铝小柱，并重复一次。收集所有洗脱液，在旋转蒸发仪（低于40 ℃）中，减压浓缩至近干，用5 mL正己烷溶解残渣，涡旋混匀，过微孔滤膜（4.4.2），供GC-MS/MS测定。如果样液浓度超过标准工作曲线范围，则将样液用正己烷稀释一定的倍数，使其浓度在线性范围内。 6.4 气相色谱-质谱参考条件 气相色谱-质谱参考条件按下列参数设定： a) 色谱柱：VF-5MS毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），或相当者； b) 色谱柱温度：80 ℃，保持1.0 min，然后以40 ℃/min程序升温至250 ℃，再以20 ℃/min升温至290 ℃，保持3.75 min； c) 载气：氮气，纯度≥99.999%，流速1.0 mL/min； d) 进样口温度：250 ℃； e) 进样方式：不分流进样； f) 进样量：1 μL； g) 电子轰击源：70 eV； h) 离子源温度：230 ℃； i) 传输线温度：280 ℃； j) 溶剂延迟：2.0 min； k) 多反应监测模式（MRM）：角鲨烯和角鲨烷的定量离子对、定性离子对和碰撞电压，参见附录B。 6.5 定性及定量 6.5.1 保留时间 被测试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对偏差应在±2.5%之内。 6.5.2 定性离子、定性离子及子离子丰度比 如果检出的色谱峰保留时间与标准品相一致，且在扣除空白后的样品质谱图中，目标化合物的定量和定性离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在目标化合物。 表1 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度（%） | 允许相对偏差 >50 | ±20 20~50（含） | ±25 10~20（含） | ±30 ≤10 | ±50 6.5.3 定量 以角鲨烯定量离子峰面积和内标物定量离子峰面积的比值为纵坐标，角鲨烯标准溶液质量浓度和内标物质量浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线。 6.6 试样溶液的测定 将标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱-串联质谱仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中化合物的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内。 6.7 空白试验 除不称取试样外，按照6.1~6.6的规定进行操作。 7 结果计算和表述 样品中角鲨烯的含量（w）按式（1）计算： w = (p × v) / m ……（1） 式中： w —— 样品中角鲨烯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； p —— 从标准工作曲线上查出的试样溶液中角鲨烯的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； v —— 试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m —— 试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。 结果保留3位有效数字。