【TB铁路运输标准】 铁路一次性餐盒降解性能试验生物降解性能试验方法

中华人民共和国铁道行业标准
TB/T2611.3—1999
铁路一次性餐盒降解性能试验
生物降解性能试验方法
1999-02-13发布
中华人民共和国铁道部
1999-09-01实施
TB/T2611.3—1999
引用标准
3定义
4、霉菌侵蚀试验
5纤维素酶侵蚀试验
附录A(标准的附录）
培养基的制备方法
附录B（标准的附录）
附录C（提示的附录）
附录D(提示的附录）
混合霉菌孢子悬液的制备方法
二氧化碳生成量测定
试验结果报告单
TB/T2611.3—1999
本标准是在参照采用ASTMG21—90\人工合成高分子聚合物材料的抗霉性测定”的基础上，经充分验证、系统完善后制订的。在微生物侵蚀试验中，补充采用了ISO846一1978“Determination of Behavious undertheAction ofFungi and Bacteria'中的\失重试验”内容。本标准的附录A、附录B是标准的附录，附录C、附录D是提示的附录。本标准由铁道部劳动卫生研究所提出并归口。本标准由铁道部劳动卫生研究所负责起草。本标准主要起草人；孔宪会、王东黎。本标准由铁道部劳动卫生研究所负责解释。1范围
中华人民共和国铁道行业标准
TB/T2611.3—1999
铁路一次性餐盒降解性能试验
生物降解性能试验方法
本标准规定了铁次性餐盒生物降解性能评价的基本技来要求基本原理、方法分类及技术条件。
本标准适用季纸制餐盒(碗、盘、碟等)及光一生物降解聚丙烯餐盒以下简称新型聚丙烯餐盒)的生物降解性能评价。
2引用标准
下列标准包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在标准出版时，所示版本均为有效。
能性。
所标准都会被修订，使用本标准的各有应探讨使用下列标准最新版本的可GB2423.16
3定义
电工电子产品基本环境试验规程：本标准采用下列定
3.1生物降解（biodegradatien）试验J长霉试验方法
在自然环境中，天然高分子聚合物在微生物和昆虫的生物酶作用下，引起生物氧化反应，出现霉变、腐烂、泥化现象，最终形成二氧花碳和水。3.2光一生物降解（photoandbio-degradation）光一生物降解塑料，在户外日光、温度、氧、潮湿等因素的作用下，加速了高分子聚合物自身光氧化反应过程，引起从外观到内在质量变化（物理性能降低、分子量下降、化学结构变化等），所含促生物氧化成分及新生亲水活性基团或其他含氧基团，继续被微生物酶作用而进一步降解的过程。
3.3光降解诱导期（photodegradableinductionperiod）光降解或光一生物降解塑料经日光照射(或氙弧光、紫外光加速），感观脆性增加，外观出现1～2cm裂口或裂纹的时期。
中华人民共和国铁道部1999-02-13批准1999-09-01实施
4霉菌侵蚀试验
4.1原理
TB/T2611.3—1999
模拟清洁环境下样品被微生物分解的情况。将待检样品和对照样品作为唯一的碳源提供给微生物生长利用。
4.2适用范围
适用于各种铁路一次性餐盒。
4.3试验设备
应包括以下器材设备：
a)玻璃器血：锥形瓶，平血(直径%m)，量简，无菌试管，无菌刻度吸管(1.0mL,5.0mL，Aous
b)精密pH试纸；
c)恒温恒湿培养箱28元
d)美术喷枪（喷嘴
e)电动低压喷泵
f)体视显微镜；
g)血球计数板
h)酒精灯；
i)冰箱；
i)微波炉；
k)生物安全柜
4.4试剂和材料
查不大于
相对湿
3L/min
空气压力
手85%）：
0.4kg/cm3);
格西载剂，均为分析纯（AR），所用水均为去离子4.4.1
凡未说明规
4.4.2将样品剪成
的试验样片，经灭菌处理后备用。4.4.3新型聚丙烯栏
4.5培养基
品在制备试验
样片前应先确认无需变，再用水清泄干净后制样。按附录A要求制备！
a)查氏培养基；
b)马铃薯蔗糖培养基；
c)基础无碳源培养液；
培养基
d)基础无碳源琼脂培养基。
4.6试验菌种
4.6.1试验菌种如下：
a)黑曲霉（AS3.3928)；
b)土曲霉（AS3.3935)；
c)球毛壳（AS3.4254）；
d)绿色木霉（AS3.4005）；
e)出芽短梗霉（AS3.3984)
f)绳状青霉(AS3.3875)。
4.6.2将以上菌种保存在查氏培养基上，4℃存放，6个月转种一次。使用时，分别接种于马2
TB/T2611.3—1999
铃薯蔗糖培养基斜面上，28℃～30℃培养7～14天，制备混合孢子悬液。4.7试验分组
4.7.1将试验样片分成三组，第一组为零对照组，在试验室自然放置。第二组为无菌对照组，试验样片不接种菌液，第三组为侵蚀试验组。将第二、三组同样条件培养。4.7.2每组试验样片应包括生物降解阳性对照样片（可用滤纸片）、阴性对照样片（可用聚丙烯塑料样片）和待检样片。第三组侵蚀试验组的阳性对照样片表面应有大量真菌生长，否则本试验要重作。
4.8试验样片预处理
将制成的各组试验样片浸15%乙醇中30.min，室温下自然干燥过夜后，移人干燥器中半小时，称重直至恒重，记录初始质量。4.9霉菌混合孢子悬液的制
按附录B要求制备霉菌花合孢香惠液4.10试验步骤
倒板：将基础更碳源琼脂磨养基加热融化后倒进平Ⅲ，钱平m培养基深度8mm104.10.1
4.10.2接种：在生
别将0.2mL霉菌孢
4.10.3加试验样
培养基表面，每血2
全柜内将蚀试验组的各样片分别置于无菌平面内，再用美术喷枪分液喷于各样片表面，同时作无菌对照和零对照。染菌的各样片静置1分钟后以无菌程序将其置手预先制备好的平皿数三皿。要避免样片之间、样片与平血之间接触。4.10.4培养：将接种好的平血及无菌对照平皿用胶带封好，置霉菌籍养箱中，30℃，相对湿度大于90%，培养2天培养箱每周换气一次。零对照平在试验室自然放置。定期观察上述生长情况，鼓云册平均霉菌覆盖面积的百分此按表1要求作分级记录。平中各样片表面
4.10.5结果观察
以窗眼观察为主，观察不清时应辅以体视显微镜观察。长霉分级记录应符
合表1要求。
表广微生物生长芬级方法
试样上微生物覆盖面的百分比
爽眼未见生长，放大50倍镜检阴性<10%
≥60%
生长程度
4.10.6失重检验：将试验后样片置于微波炉中，中高火（650W）灭菌5min，用水冲洗于净，在室温自然干燥过夜，移人于燥器中，称重直至恒重，按以下公式计算失重率。M
式中M-
失重率，%；
[Aml-(Am,+Amo)]×100
接种菌液样片培养前后的质量差，g；无菌对照样片培养前后的质量差，g；(1)
TB/T2611.3—-1999
零对照样片试验前后的质量差，g；试验样片的初始质量，g。
技术要点
新型聚丙烯餐盒样品，如经光降解达碎化、粉化的样片小于20mm×40mm，则不适宜作此试验。
4.11.2无菌对照应在不接种菌的情况下，置培养箱中与试验组一起培养。4.11.3
如样片上污染物较多，可用脱脂棉沾水轻轻擦拭。保存菌种如用查氏培养基，配制节每种盐婴依次溶解，K2HPO4要单溶4.11.4
4.11.5美术喷枪喷嘴孔径应不大于0.5mm.要使喷出的孢子悬液呈细雾状，不得出现小水滴。
接种喷菌操作必须在
安全柜中进行，要严格防止霉菌孢子弥散，操作人员的安全防护措施应符合GB242.190要求。无碳源琼脂培养基所用琼脂应具有高4.11.7
试验后样品滤灭菌时，应采用间款火菌避免培养基餐热溢出。5
纤维素酶侵蚀试
纤维素酶从纤系中分解出还原糖，还原糖又同2-羟基-3,5-二硝基苯甲酸反应产生一种黄-橙混合物，可用肉眼战分光光度针法测定其色深。5.2适用范围
适用于纸制餐盒的生物降解性能检验。5.3试验器材
试验所器材如
a）25mL刻度
b）1cm比色瓶
721分光光度
食品粉碎机（12000）
e）100mL1000mL
5.4试剂
5.4.1指示剂溶液：用少许蒸馏水同1.0g2-羟基-3,5-元硝基苯甲酸拌和，然后边摇动边滴加2mol/L的氢氧化钠溶液20mL，至2羟基_3.5哨基苯甲酸溶解。用50mL去离子水稀释，再加30g四个结晶水的酒石酸钠，溶解后再用去离子水定容至100mL。在4℃下密封保存。
5.4.2乙酸盐缓冲液（pH4.6)：取2mol/L的乙酸50mL与50mL2mol/L的乙酸钠溶液混合，并用蒸馏水定容至1000mL
5.4.3常规配制2mol/L的氢氧化钠溶液。5.4.4纤维素酶溶液：将成品纤维素酶用醋酸盐缓冲液溶解，使酶活力为30U/mL。5.5试样预处理及分组
5.5.1称取5g样品加200mL醋酸缓冲液，用食品粉碎机粉碎打浆，取浆液进行试验。5.5.2取三只25mL刻度试管，按表2要求编号。4
样品(g)
缓冲液(mL)
酶溶液（mL）
TB/T2611.3—1999
表2试验分组及步骤一
注：1、2、3号管分别为“试样空白管、试剂空自筛及试验主值管”。5.6试验步骤
纸浆放人1号、3号管内。
5.6.1按表2要求，各称取0
再将1、2、3号管置于40℃恒温水浴中，各加入1.5mL已预热的精酸缓冲液后，再向2号度号管备加人2.0mL的酶溶液，混合，保温30min。
5.6.2按表3要求向
应终止，再向1号管加
氢氧化钠溶液（mL
指示剂溶液(mL)
酶溶液（30U/mL
5.6.3将上述1、
深是否为黄橙色。
号管各加入1.0m
氢氧化钠溶液和2.mL的指示剂溶液，使反mL的酶溶液
表3试验分组及步骤，
管置于沸水浴中5min，流水冷却后用蒸馏来定容至20mL。目测色空点对照分辩时，将试液用滤纸过滤后用分光光度许作常规比色，于4905.6.4目测不易与
nm处以空白值为参化测吸光度判断色深。NI
查氏培养基
TB/T2611.3—1999
附录A
（标准的附录）
培养基的制备方法
A1.1成分
a）NaNOs
c）MgSO4.7H29
K2HPO4
e）FeSO4
）煎糖
琼脂粉
h）去离子力
A1.2制法
每种盐依次和
琼脂粉加热溶解于1000mL三角瓶内（K,HPO4单溶后再加入溶液中），调PH至6.0.分装试
min，制成斜面备用。
℃灭菌20
马铃蔗糖培养
皮忧净切片，称敢200g放人盛有1000mL永的烧杯中，煮沸30min取新鲜马铃薯去
战液稳入500
mL锥形瓶中，加人2%蔗糖2%琼脂，分装试管，121℃灭后用纱布滤去渣逹，将
菌20min，制成斜面备角
基础无碳源培养液
K2HPO4
KH2PO4
MgSO7HO
FeSO4·7HO
ZnSO4.7H20
去离子水
A3.2制法
1000mL
TB/T2611.3-1999
将上述成分依次溶解于装有1000mL蒸馏水的三角瓶中，调pH至6.0,将培养液在121C高压灭菌20min。
A4基础无碳源琼脂培养基
在基础无碳源培养液中按2%加人琼脂粉，加热溶解，121℃高压灭菌20min。试验前倒10mm深的平板备用。
TB/T2611.3—1999
附录B
（标准的附录）
混合霉菌孢子悬液的制备方法
B1用无菌吸管吸取10mL含湿润剂（0.05%吐温80的无菌水10mL，轻轻加至培养7~14的成熟菌管中。
多天装有30mL无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠），剧烈振荡，使B2用接种环轻轻刮出孢子移
孢子团分散。
B3用双层纱布过滤除丢菌丝辞片，将滤液移至离心管中，以3000min离心10min，去掉上离学求使沉淀再悬浮，再离心，如此清洗抢子三次。清液，用50mL灭菌去
B4用50mL基础无碳源培养液稀释最终沉淀物-用血球计数板计数述悬液，使孢子数为107个/mL。如低于上还值，向孢子液中再移尽孢子，反之应将孢子被稀释B5每种菌均单独制备孢子悬液，将五种制好的单工孢子悬液按等体积昆合，即为混合孢子悬液，并应在当天便用
B6全部操作过程均应由受过专门训练的微生物检验人员在生物安全柜中进行。8
C1原理
TB/T2611.3—1999
附录C
（提示的附录）bzxZ.net
二氧化碳生成量测定
生物降解过程中产生的工氧化碳被氢氧化锁溶液吸收，形成碳酸锁沉淀，过剩的氢氧化钡溶液可用盐酸标准溶液滴定，慧糖所消耗标准溶液的体积，计算出车氧化碳的生成量。C2
适用范围
适用于经光降解式验达碎化、粉化的光一生物降解聚内烯餐盒残渣试验器材
本法所需试验器材如下：
100mL、
.500mL锥形瓶；
包管：
橡胶塞，
50mL酸式滴定管；
气泵（1L/rim）
振荡培养精
本法所需试剂如
羧甲基纤维素钠；
c(HC)=0.05mo盐酸溶液
0.0125mol/的氢氧化顿溶液：标定后用滤纸过滤后密封保存。培养液
按附录A要求配制基础无碳源培养液试验菌种
试验菌种同4.6.1，并按附录B要求制备成高活力菌孢子混合液。试样制备及预处理
将标准非降解对照样剪碎，将经过光降解碎化或粉化的试样研碎后备用。试验分组
C8.1试验共分四组，第一组生物降解阳性组，第二组阴性对照组，第三组基础无碳源培养液9
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。