【SN商检标准】 鞋类和鞋材抗真菌性能测试方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3840.2—2014
鞋类和鞋材
抗真菌性能测试方法
Footwear and footwear components-Test methods to assess anti-epiphyte activity2014-01-13发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2014-08-01实施
SN/T3840岁鞋类和鞋材》共分为2部分：第1部分：抗细菌性能测试方法；第2部分：抗真菌性能测试方法。本部分为SN/T3840的第2部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提并归口。本部分起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局。SN/T 3840.2—2014
本部分主要起草人：陈学灿、郑晶、郑麟毅、黄晓蓉、吴谦、董健、郑洁、陈彬、林杰。1范围
鞋类和鞋材
抗真菌性能测试方法
SN/T3840的本部分规定了鞋类及鞋材抗真菌能力的测试方法。本部分适用于抗菌鞋用材料和鞋类产品。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。SN/T3840.22014
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
第2部分：培养基性能测试实用指南anti-epiphyte activity
抗真菌性能
产品所具有的抑制真菌繁殖的性能。3.2
对照样contrastsamples
用于确认测试真菌生长条件的鞋类材料。注：等同于未经抗菌处理的材料样品。4设备和材料
恒温恒湿培养箱：温度能保持在（28士2)℃，相对湿度能保持在90%士5%。4.1
二级生物安全柜。
天平：感量0.001g。
冰箱：维持温度在2℃～8℃之间。高压灭菌器：温度能保持在121℃，压力保持在103kPa4.5
4.6培养血：直径90mm。
4.10
移液器：适合每次使用的量程，带塑料吸嘴，误差不高于0.5%。离心机：转速4000r/min。
三角瓶、试管、玻璃棒、玻璃珠等玻璃器皿。喷雾器：粒径小于50μm。
4.11
4.12
pH计：读数精度0.1。
试验箱：塑料、玻璃等材质制成的密闭箱，尺寸不小于200mm×100mm×100mm。1
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5培养基和试剂
5.1无机盐培养液，培养基和试剂的配制方法见附录A。5.2无机盐琼脂培养基。
5.3马铃鲁-蔗糖培养基。
5.4吐温80。
5.5无菌水。
6试验菌种
试验菌种如下：
a）黑曲霉（Aspergillusniger）CGMC3.5487akATCC16404;b）球毛壳霉(Chaetomiumglobosum）CGMCC3.360l或ATC:6205:）绳状青霉(Penicillium funiculosum）CGMCC 3.3875或ATCC 10509：d）绿色木霉（Trichudermaviride）CGMCC3.2941或ATCC280207试验菌孢子液的制备
7.1将菌孢子接种于马铃薯-熊糖培养基斜面，在（28二2)℃:培养至斜面长满霉菌孢子（7d~~12d）。7.2取10mL无菌水导入培养好的斜面中，用无菌接种环轻刮滋种表面洗出孢子，把洗出的孢子液倒人含玻璃珠的三角瓶中。
7.3搬荡三角瓶以充分混勾孢了液，并使成团的孢了分散。孢了被用快速定性滤纸过滤，除去菌丝碎片、琼脂块和孢于团。
7.4以4000r/min的速度离心已过滤的孢子液，去掉上层清液。用50mL无菌水洗涤沉淀，再离心。如此重复清洗孢子3次。抱子液用无机盐培养液（5.1)稀释、用血细胞计数板测定孢子含量，制备的弛了被应含有孢子(1×106)个/mL～(5×106)个/inL。最后将各种霉菌的孢子液以等体积混合，这样获敢的孢子悬液即为试验用孢子液。也可采用活菌计数法等其他适当的计数方法测定孢子含量。8测试样制备
8.1鞋垫
从鞋垫或相同材料中制备边长为（38±5)mm正方形测试样，其6片，用高压蒸汽（121C，103kPa灭菌[5 min,或选择其他适合的灭苗方法进行灭菌处埋。测试面为与脚接触的一面。如果鞋垫的材料不只一种，应对不同材料分别进行取样。8.2衬里
从成鞋衬里或同材料中制取边长为（38士5)mm正方形测试样，共6片，用高乐蒸汽（121℃，103kPa)火菌15rnin.或选择其他适合的火菌方法进行灭菌处理。测试面为与脚接触的一面。如果衬里材料不只一种,应对不同材料分别进行取样。8.3对照样的制备
对照样可以未经抗菌处理的相同材料巾制备。若上述材料不可获得，可来用未经抗菌处理的2
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100%棉织物。可采用色牢度试验用的棉标准贴衬织物，经高温蒸煮并用蒸馏水洗涤作为对照样。对照样的其他制备要求与测试样相同。9检测方法
9.1 培养血法
9.1.1培养基平血的准备
加热融化无机盐琼脂培养基，冷却至50℃~60℃.倒人20mL~25mL培养基于灭菌培养m中，室温下冷却凝固。
9.1.2接种
9.1.2.1测试样接种
在培养基表面放上一片测试样，用吸取1niI.孢子液均匀分配接种到整个测试样的表面。对于薄的测试样，应尽可能保留孢子液于测试样内，必要时可多块拼凑来达到吸入菌液量的要求。待试样表面水分稍后盖好Ⅲ盖。每个样品做3个平行测试样。如果样品有涂层，宜在孢子液内加人0.05%～0.5%吐温809.1.2.2对照样接种
按9.1.2.1的方法接种3个对照样品。空白试验
9.1.2.3
取3片测试样作为空白测试样，分别平放在无菌的无机盐琼胎培养基上，接种1ml.无菌水到每个测试样上，待测试样表面水分稍下后盖好血盖。9.1.3培养
把已按种的测试样、对照样和空白试验样放在恒温恒湿培养箱中，在（28土2)℃和相对避度90%工5%的条件下培养28d。
9.2最挂法
9.2.1
试验箱要求
试验箱的大小与形状应能保证放置的样品有足够的空间，不互相干扰，并保持试验箱内相对湿度为90%+5%。
9.2.2接种
9.2.2.1测试样接种
用喷壶采用喷酒方式将1mL抱子液均勾分布于试样的两面，雾粒喷洒到测试样表面不应形成明显液滴，每个样品做3个平行测试样。如果测试样无法吸收1而L孢了液，只要将试样整个表面均匀喷酒孢了液，不滴落即可。9.2.2.2对照样接种
按 9.2.2.1的方法接种 3 个对照样。3
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9.2.2.3空白测试样接种
取1mL无菌水代替孢子液，按9.2.2.1的方法接种于测试样表面，作为空白试验样，每种样品做3个平行测试样。
9.2.3试样的放置
测试样、对照样和空白测度样稍微晾干后，分别悬挂于3个不同的试验箱中，注意试样放置时不得互相接触。
9.2.4培养
把放置了测度样、对照样和空白测试样的试验箱放在恒温恒湿培养箱中，在（28士2）℃和相对湿度90%土5%的条件下培养28d。
结果评价
10.1试验结果的观察
培养结束后，将测试样，对照样和空白测试样从恒温恒湿培养箱中取出，直接从正面或侧面观察试样表面霉菌生长情况。先用肉眼观察，如有必要，再用显微镜（放大倍数约为50倍）进行检查。10.2试验有效性的判定
当霉菌在对照样表面的覆盖面积大于60%，空白测试样表面肉眼观察不到霉菌生长时，该试验被判定有效，否则试验无效，应重新进行试验。10.3抗真菌性能评价
按表1评价样品的抗真菌等级，并以3个平行试验样品的防霉等级中数字最大的结果作为该样品的等级评价结果。
抗真菌效果评价
霉菌生长情况
在放大镜下无明显长霉
霉菌生长稀少或局部生长，在样品表面的覆盖面积小于10%霉菌在样品表面的面积覆盖率为10%～30%霉菌在样品表面的面积覆盖率30%~60%等菌在样品表面的面积覆盖率达到或超过60%11检测报告
检测报告必须至少包含下列信息：检测标准名称；
b）样品和对照样的描述；
样品的预处理（例如，灭菌方法等）：抗真菌等级
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试验菌种名称、编号、代数及接种菌浓度：试验方法(培养血法或悬挂法）：试验温湿度和试验周期；
霉菌生长情况和抗真菌效果的评价；任何偏离本方法的情况；
试验人员和试验日期。
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SN/T 3840.2—2014
附录A
（规范性附录）
培养基及试剂
按 SN/T1538.1、SN/T 1538.2进行培养基的制备与性能测试。本实验所用试剂级别均为化学纯。A.1无机盐营养液
A.1.1成分
磷酸二氢钾(KH,PO,)
硫酸镁(MgSO7H,O)
硝酸铵(NH,NO,）
硫亚铁(FcS7I.0)
磷酸氢一钾(K,HPO,)
蒸馏水wwW.bzxz.Net
A.1.2制法
2.5g
0.2 g
3.0g
0.1g
2.0 g
1000 mL
将上述无机盐加水溶解后,用 3.2 g/L Na0H调节 pH值至 6.0~～6.5,分装三角瓶，于 121 ℃,103 kPa蒸汽压力下灭菌20 min。
无机盐琼脂培养基
A.2.1成分
无机盐营养镀（A.1）
A,2,2制法
1 co0o ml.
20.0g
将琼脂加人无机盐营养液中，加热溶解定容，分装二角瓶，于121℃、103kP蒸汽力下灭菌20 mins
马铃薯-蔗糖培养基
A.3.1或分
马铃薯
蒸馏水
A.3.2
2制法
200g
20g
20 g
1 000 mL
将马铃薯去皮切块，蒸馏水加热煮沸，20min后过滤，取汁。加人其他成分，定容至1000mL，加热完全溶化后分装人试管，于121℃、103kP蒸汽压力下灭菌20min，趁热取出试管，分开斜放，待其6
-KAONIKAca
自然凝固成斜面后备用。
分散剂
聚山梨醇酯80吐温80)。
无菌水
SN/T 3840.2—2014
用100mI.蒸馏水加0.05g分散剂,充分混勾后，按每支10mL分装到无色玻璃试管中，于121℃、103kPa蒸汽压力下灭菌20 min后备用。
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