【SN商检标准】 猪支原体肺炎检疫技术规范

SN/T 4104—2015 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 猪支原体肺炎检疫技术规范 发布日期：2015-02-09 实施日期：2015-09-01 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、重庆动物疫病预防控制中心、西南大学、重庆正大有限公司。 本标准主要起草人：聂福平、杨俊、张强、李应国、曾政、王昱、肖进文、程光胜、王豪举、夏明星。 1 范围 本标准规定了猪支原体肺炎的病理学诊断方法、病原分离和鉴定方法、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应试验。本标准适用于猪支原体肺炎的检疫、诊断、流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 WS 233—2002 微生物和生物医学实验培养基和试剂的质量要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 猪支原体肺炎（Mycoplasma hyopneumoniae） 又称猪气喘病，是由猪肺炎支原体引起的一种接触性呼吸系统传染病，是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一。该病以咳嗽和气喘为主要临床特征，病变部位主要在肺部，可见心叶、中间叶和尖叶有融合性支气管肺炎变化。该病广泛流行于世界各地，欧洲、亚洲、美洲以及大洋洲等主要养猪国家和地区均有发生。 4 实验室生物安全要求 4.1 检测工作中的个人防护参照 GB 19489。 4.2 实验室应遵循 GB 19489 和 WS 233—2002 对生物安全2级（BSL-2）实验室的生物安全要求。 4.3 使用过的实验用品应遵照 GB 19489 对废弃物的处理要求进行无害化处理。 5 临床和病理学诊断 5.1 临床症状 猪支原体肺炎是一种发病率高、死亡率低的慢性呼吸道传染病，主要临床症状为慢性干咳。新发病猪群常呈急性，张口喘气，痉挛性阵咳，体温升高不明显。咳嗽持续几周甚至数月，育肥猪咳嗽最严重。部分患猪呈腹式呼吸，喘息沟明显。患猪食欲减退，消瘦，被毛粗糙，生长停滞。该病病程主要分急性、慢性两种类型。 5.2 病理学特征 主要病变见于肺、肺门淋巴结和纵隔淋巴结。急性死亡患猪肺有不同程度的水肿和气肿。肉眼病变类似于膨胀不全的肺，尤其在疾病的慢性阶段。特征性病变是两肺的心叶、尖叶和隔叶前缘发生对称性的实变，肺门淋巴结肿大，肺中间叶实变，以及肺门淋巴结肿大、增生。病变最初为栗粒大至豆大呈均匀散布，逐渐扩展而融合成支气管肺炎。病变部界限明显，灰白色，无弹性，呈“胰样”“鱼肉样”。切开时，内有大量泡沫。其他器官无明显变化。 5.3 病理组织学检查 通过常规的病理学检查，支气管和细支气管上皮组织纤毛数量减少，小支气管周围的肺泡扩大，泡腔充满多量炎性渗出物，肺泡间组织有淋巴样细胞增生。急性病例中，扩张的泡腔内充满浆液性渗出物，杂有单核细胞、中性粒细胞、少量淋巴细胞和脱落的肺泡上皮细胞。慢性病例中，其肺泡腔内的炎性渗出物中主要是淋巴细胞浸润。 5.4 X线检查 X线检查对本病的诊断有重要价值，对可疑患猪进行X线透视，可做出诊断。在X线检查时，猪只以直立背胸位为主，侧位或斜位为辅。病猪在肺野的内侧区以及心膈角区呈现絮状及片状阴影。 6 病原分离和鉴定 6.1 材料准备 6.1.1 A26肉汤：制备方法见附录A。 6.1.2 固体培养基：制备方法见附录A。 6.1.3 厌气肉肝汤：制备方法见附录A。 6.1.4 血琼脂平板：按 GB 4789.28 的方法配制。 6.1.5 Hank's液：配制方法见附录A。 6.1.6 0.25%鸡红细胞液：制备方法见附录A。 6.1.7 灭菌干棉拭子。 6.2 病料采集 6.2.1 活体病料采集：用棉拭子深擦拭病猪的喉头或鼻腔，采集呼吸道分泌物。 6.2.2 死后病料采集：无菌采取病键交界处肺组织。 6.3 病原分离 将病肺组织剪成小于2mm的碎块，浸入Hank's液中洗涤，除去血液和组织碎块，取3块～5块浸泡在盛有5mL A26肉汤的试管中；棉拭子浸入10mL A26肉汤中清洗。