【SN商检标准】 国境口岸微孔板基因芯片检测方法第1部分:通用技术规程

SN/T4283.1-2015 国境口岸微孔板基因芯片检测方法 第1部分：通用技术规程 Test method of microplate gene chip at frontier port-Part 1: General technical procedure 2015-05-26 发布，2016-01-01 实施 前言 SN/T4283《国境口岸微孔板基因芯片检测方法》为系列标准，分为六个部分：第1部分：通用技术规程；第2部分：结核分枝杆菌及katG和rpoB耐药变异基因；第3部分：7种呼吸道病毒；第4部分：肠道病毒及肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型；第5部分：肺炎支原体、肺炎衣原体及嗜肺军团菌；第6部分：12种食源性致病菌。本部分为SN/T4283的第1部分。 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、中华人民共和国四川出入境检验检疫局、中华人民共和国甘肃出入境检验检疫局、中华人民共和国河南出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、清华大学深圳研究生院、深圳市南山区慢性病防治院、珠海精标仪器有限公司、深圳图普科技有限公司。 本部分主要起草人：顾大勇、辛本强、董瑞玲、廖凌、樊学军、高国龙、刘芳、赵芳、刘春晓、杨燕秋、张树平、史蕾、赵纯中、何建安、刘君、徐媛、林勤丰、徐云庆、张勤、黄恩炯、马岚、张涛、李永进、倪秀。 1 范围 SN/T4283的本部分规定了微孔板基因芯片检测方法的通用技术规程，包括微孔板基因芯片的制备、检测流程、结果报告及阳性结果的处置等部分。本部分适用于在国境口岸实验室采用微孔板基因芯片技术进行检测。 2 规范性引用文件 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 SN/T 2752.4—2011 卫生检疫人员的自我防护规范 第4部分：实验室人员 WS 233 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 微孔板基因芯片 (microplate gene chip) 与传统的基于玻片或膜的平面式基因芯片不同，其将基因探针按预设模式固定在微孔内，每孔即为一张芯片。本部分涉及的微孔板基因芯片技术具有如下特点： (a) 芯片的载体为高分子材质的微孔板，类似于8×12的ELISA反应板，每孔即为以整板使用有最多96个反应孔，也可以根据实际需要拆装所需的反应孔数，具有微量、高通量的特点； (b) 芯片反应孔面无需有机薄膜涂层修饰或化学生物等的修饰，可直接将基因探针点样到孔面上，在紫外作用下通过氢键结合，使包被的探针不易脱落； (c) 芯片检测采用化学显色反应的检测方式，其检测原理为生物素化的PCR产物与芯片杂交，经由链霉亲和素-碱性磷酸酶介导的显色反应在芯片表面形成色点沉积，检测结果裸眼可视也可借助芯片扫描仪进行定量分析，具有快速简便可视、芯片制备操作简单方便的特点。 3.2 特异性探针 (specific probe) 能与样品中的特异性目标核酸杂交，实现检测目的的一段寡核苷酸分子片段。 3.3 阳性对照探针 (positive control probe) 能与预设的特定目标核酸杂交，但与检测目标核酸无交叉杂交反应的一段寡核苷酸分子片段，可以用于实现对全部或部分检测流程进行质量控制。本部分涉及PCR阳性对照探针和杂交阳性对照探针。 3.4 阴性对照探针 (negative control probe) 即空白对照探针，可以是一段人工设计合成的没有配对杂交对象的或是与本试验无关的寡核苷酸片段，甚至也可以是不含任何特意添加的核酸片段，主要用于监控基因芯片的杂交背景。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BSA：牛血清白蛋白 (bovine serum albumin) dNTP：脱氧核苷酸三磷酸 (deoxyribonucleoside triphosphate) PCR：聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction) RT-PCR：逆转录PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction)