【SN商检标准】 国境口岸黄热病毒超顺磁免疫层析检测方法

SN/T4281—2015 国境口岸黄热病毒超顺磁免疫层析检测方法 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2015-05-26发布，2016-01-01实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：史蕾、顾大勇、刘春晓、马岚、徐云庆、赵纯中、何建安。 1 范围 本标准规定了超顺磁免疫层析检测方法用于国境口岸快速筛查黄热病毒抗原的检验对象、方法和结果判定。 本标准适用于国境口岸发现的可疑粉末和不明液体携带黄热病毒的实验室快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 SN/T 1552 国境口岸生物因子恐袭事件监测规程 WS 233 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 黄热病毒 (Yellow fever virus) 黄热病毒（Yellow fever virus）属于黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus），为单股正链RNA病毒。病毒为球形，直径40nm～50nm，包膜表面有细小但明显的突起。该病毒具有三个结构蛋白，包括C蛋白（衣壳蛋白）、M蛋白（膜蛋白）和E蛋白（包膜蛋白），其中E蛋白是病毒表面的主要成分，参与血凝抑制与受体细胞的识别和结合。 3.2 免疫层析法 (Immunochromatographic test) 利用微孔膜的毛细管作用，通过液体样品在层析介质中的移动，检测特异性抗原或抗体存在的免疫学方法。 3.3 超顺磁免疫层析 (Superparamagnetic immunochromatography; SMICT) 采用超顺磁材料作为标记物的新型免疫层析方法。该方法是一种综合了纳米超顺磁技术、免疫层析技术及磁定量检测技术的新型免疫检测方法。 4 生物安全防护要求 4.1 检测前做好个人防护，防护方法和标准见SN/T 1552。 4.2 实验室应遵循GB 19489和WS 233对生物安全2级（BSL-2）实验室的生物安全要求。使用过的实验用品应遵照GB 19489的要求，对废弃物的处理要求进行无害化处理。 5 检验对象 本标准用于检测国境口岸发现的疑似黄热病样品，包括： - 可疑粉末样品 - 不明液体样品 6 主要设备和试剂 主要设备：台式离心机、微量移液器、色谱分析系统（使用美国MagnaBioSciences的Magnetic Assay Reader, MAR磁性免疫色谱分析系统）。 7 样品制备 7.1 样品采集 样品采集方法按照SN/T 1552进行。 7.2 样品制备 7.2.1 可疑粉末样品：分多点取可疑粉末，加适量生理盐水或缓冲液（参见附录A中的A.1、A.2），适量混匀，使内容物浸出，12000g离心5min或自然沉降20min后，取上清作为待检样品。 7.2.2 不明液态样品：直接吸取可疑液体100$mu$L作为待检样品，如样品不足则加生理盐水或缓冲液补足。 7.2.3 为提高检出率，样品制备时应尽量用小体积液体溶解使用。 8 检验方法 8.1 操作步骤 检测前先将待检测样品和反应缓冲液（参见附录A中的A.1）恢复至室温。 8.1.1 打开铝箔袋，将检测卡取出，检查检测卡是否完好，若有破损或弯曲请勿使用，将检测卡加样孔朝外平放在实验台面上。 8.1.2 使用微量移液器吸取100$mu$L待测样品，垂直缓慢滴入黄热病毒超顺磁检测卡的加液口前端小孔，随即沿加液口后端小孔垂直缓慢滴入50$mu$L反应缓冲液。室温放置20min，用磁性免疫色谱分析系统进行测试。 8.1.3 将检测卡插入磁性免疫色谱分析系统中，启动“开始”按钮，读取样品浓度数值。 8.2 结果判定 8.2.1 磁性免疫色谱分析系统读取检测卡磁信号强度数值。 注：1) 给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 8.2.2 磁信号强度（Relative Magnetic Units，RMU）$ge$