【行业标准】 进出口食品中罗丹明B的检测方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2430—2010
进出口食品中罗丹明B的检测方法Determination of rhodamine B in foods for import and export2010-01-10发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-07-16实施
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D和附录E均为资料性附录，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2430—2010
本标准由中华人民共和国重庆出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局负责起草
本标准主要起草人：王国民、李贤良、张雷、王美玲、周启明、李应国、唐柏彬、魏颖、戴华I
http：//foodmate.net1范围
进出口食品中罗丹明B的检测方法SN/T2430—2010
本标准规定了进出口食品中罗丹明B的液相色谱检测以及液相色谱-质谱/质谱检测和确证方法本标准适用于腊鱼、腊肉、香肠、果汁、果酱、辣椒粉、辣椒油、糖果、话梅、葱头及饼干中罗丹明B的测定和确证。
2方法提要
用乙酸乙酯-环已烷提取试样中的罗丹明B.经凝胶色谱净化系统净化，用液相色谱-荧光检测器或液相色谱-质谱/质谱仪测定和确证，外标峰面积法定量3试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水3.1甲醇：高效液相色谱级。
3.2甲酸：高效液相色谱级。
3.3乙酸乙酯。
3.4环已烷。
3.5乙酸乙酯-环已烷（1：1，体积比）溶液：将乙酸乙酯（3.3）和环已烷（3.4）等体积混合。3.60.2%甲酸：取2.0mL甲酸（3.2），用水定容至1000mL。3.7
罗丹明B标准品：分子式C2H1CIN.O，CAS编号：81-88-9，纯度大于等于99.0%3.8罗丹明B标准储备液：准确称取适量罗丹明B标准品（3.6），用甲醇配制成浓度为100μg/mL的标准储备液。此溶液在0℃～4℃避光保存。3.9空白样品提取液：采用空白样品，按照6.1和6.2进行提取和净化后得到的溶液。3.10标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL的标准工作溶液。置于0℃~4℃避光保存。3.110.22um微孔滤膜，有机系。4仪器和设备
4.1高效液相色谱仪配荧光检测器。4.2高效液相色谱-质谱/质谱仪，配电喷雾离子源（ESI)。4.3电子天平：感量为0.01g和0.1mg。4.4
凝胶色谱净化系统（GPC)。
组织捣碎机。
超声波清洗器。
旋涡混匀器。
3旋转蒸发仪。
离心机：转速不低于5000r/min
0具塞塑料离心管：50mL
htt
TTTEITETT:
SN/T2430—2010
5试样的制备与保存
5.1试样制备
5.1.1腊鱼、腊肉、香肠、辣椒粉、葱头：取有代表性样约500g.腊鱼、腊肉、香肠需去皮，用组织捣碎机捣碎，装人洁净容器作为试样，密封并做好标识，于一18℃下保存。5.1.2果酱、辣椒油、饼干：取有代表性样品约500g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于0℃～4℃下保存。
5.1.3话梅：取可食部分约500g，用组织捣碎机捣碎，装人洁净容器作为试样，密封并做好标识，于0℃4℃下保存。
5.1.4糖果：取约500g糖果，硬糖内层用滤纸，外层用塑料纸包好，然后用锤子捶碎；软糖用剪刀剪碎后，各自混合后装人洁净容器内密封并做好标识，于0℃～4℃下保存。5.1.5果汁饮料：取有代表性样约500mL，混匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于0℃～4℃下保存。
5.2试样的保存
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6测定步骤
6.1提取
6.1.1腊鱼、腊肉、香肠、果汁、果酱、葱头、糖果、话梅、辣椒粉及饼干称取2.0g样品（精确至0.01g）于50mL离心管中，准确加人25mL乙酸乙酯-环已烷溶液（3.5）于旋涡混匀器上混合提取2min再超声提取15min后，于4000r/min离心5min，上清液过0.22um微孔滤膜后作待净化液。
6.1.2辣椒油
称取2.0g样品（精确至0.01g）于25mL容量瓶中，加人20mL乙酸乙酯-环已烷溶液（3.5），超声提取15min后，用乙酸乙酯-环已烷溶液（3.5）定容。取15mL溶液过0.22pm微孔滤膜后作待净化液。
6.2净化
取10mL待净化液于GPC样品管中，用于GPC进行净化（参考条件参见附录A中第A.1章），收集洗脱液，于40℃下旋转蒸发至干。残渣用1.0mL甲醇溶解后，过0.22um微孔滤膜，供HPLC-荧光测定，或用1.0mL40%甲醇水定容，过0.22um微孔滤膜，供HPLC-MS/MS测定或确证。6.3测定
6.3.1液相色谱-荧光检测条件
色谱柱：Cis柱，2.1mm（内径）×150mm，5μm，或相当者；a）
流动相：甲醇-水，梯度洗脱程序见表1；表1流动相梯度洗脱程序
时间/min
雪品伙伴网ht
甲醇/%
流速：0.80mL/min；
柱温：35℃；
进样量：10μL；
激发波长（Ex）550nm，发射波长（Em）580nm。液相色谱-质谱/质谱条件
色谱柱：Cs柱，2.1mm（内径）X100mm，1.7um，或相当者；流动相：甲醇-0.2%甲酸，梯度洗脱程序见表2；2流动相梯度洗脱程序
时间/min
流速：0.20mL/min；
柱温：35℃；
进样量：10μL；
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子；
检测方式：多反应监测（MRM)；质谱/质谱参考条件参见附录B。6.3.3
液相色谱测定
甲醇/%
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0.2%甲酸/%
按照6.3.1液相色谱-荧光检测条件对标准工作溶液及样液等体积参插进样测定，样品中待测物含量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应进行适当稀释后测定。在该条件下，罗丹明B的保留时间约为6.8min。液相色谱-荧光色谱图参见附录C中图C.1。6.3.4液相色谱-质谱/质谱测定和确证按照6.3.2液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中的罗丹明B含量。样品中待测物含量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应用空白样品提取液进行适当稀释。在上述色谱条件下，罗丹明B的质量色谱峰保留时间约为4.3min。标准品的多反应监测离子色谱图参见附录D中图D.1。在相同试验条件下，样品与标准工作液中待测物质的质量色谱峰相对保留时间在2.5%以内，并且在扣除背景后的样品质量色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物表3使用液相色谱-质谱/质谱定性时相对离子丰度最大允许误差相对丰度(基峰)/%
大于20至小于等于50
大于10至小于等于20
小于等于10
6.3.5空白试验
空白样品按上述测定步骤进行。ht
TEITETT
相对离子丰度最大允许误差/%
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结果计算和表述
用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按照式（1)计算试样中罗丹明B的含量(c-c)XV
mx1000
式中：
试样中罗丹明B的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；.........+...(l)
由标准曲线得到的样液中罗丹明B的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；由标准曲线得到的空白试验中罗丹明B的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样液最终定容体积，单位为毫升（mL)；最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。测定低限、回收率
8.1测定低限
液相色谱-荧光法及液相色谱-质谱/质谱法的测定低限均为0.005mg/kg。8.2液相色谱-荧光及液相色谱-质谱/质谱法测定的回收率液相色谱-荧光及液相色谱-质谱/质谱法的测定参见附录E。http：
//uufoodms
GPC参考条件：
附录A
（资料性附录）
GPC参考条件》
凝胶色谱净化系统Accuprep（J2）；凝胶柱规格400mm×25mm（内径）；色谱柱填料Bio-BeadsS-X3（38μm75μm）；流动相：乙酸乙酯-环已烷1：1，体积比）；流速：5mL/min，
收集时间：9min19min。
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非商业性声明：附录A所列GPC参考条件是在美国J2公司的仪器上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器5
http：//foodmate.netSN/T2430—2010
质谱参考条件：
毛细管电压：1.0kV；
离子源温度：110℃；
脱溶剂气温度：400℃；
锥孔气流量（氮气）：45L/h；
脱溶剂气流量（氮气）：600L/h；附录B
（资料性附录）
质谱参考条件1
碰撞气流速（氩气）：0.22mL/min；碰撞室压力（氩气）：5.86e-（mbar）；定性离子对、定量离子对、锥孔电压、碰撞能量、驻留时间见表B.1。待测物定性离子对、定量离子对、锥孔电压、碰撞能量、驻留时间表B.1
化合物
罗丹明B
母离子(m/z)
子离子(m/z)
锥孔电压/V
碰撞能量/eV
3离子为定量离子；对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。驻留时间/s
1）非商业性声明：附录B所列参考质谱条件是在WatersUPLC/Priemer型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。6
http：//foodmate.net20.00
附录C
（资料性附录）
罗丹明B的液相色谱-荧光色谱图68.9
SN/T2430—2010
0. DO D. a0 1. D01. aU 2. 00 2, b0 3. D 3. b0 4. 00 1. bD b. 00 b. b0 6. DO 6. o0 7. bO 7.o0 8. 0D 8. b0 9. U09.b01D. 00 +/min图C.1
罗丹明B标准溶液的液相色谱-荧光色谱图http：//foodmate.netSN/T2430—2010
附录D
（资料性附录）
罗丹明B的多反应监测（MRM）离子色谱图4. 33
126 564.9
443. 22-399. 15
6, 253c+0, 06
443.2-355.07
2. 381e 1 0. 06
罗丹明B标准溶液的多反应监测离子色谱图图D.1
http:
oodmate.net
5.00c/min
基质种类
辣椒粉
辣椒油
果汁饮料
附录E
（资料性附录）
液相色谱-荧光和液相色谱-质谱/质谱法的回收率添加水平/（mg/kg）
ht
液相色谱-荧光法
89.1~113.3
81.7~110.7
77.3~98.8
83.8~103.1
82.9~110.2
77.6~100.3
79.8~109.3
82.3~110.3
80.7~107.3
83.2~115.0
80.5~109.8
81.9~115.0
87.4~112.0
86.6~105.3
93.2~111.7
80.7~103.9
83.5~107.9
77.5~97.3
86.7~115.2
88.4~109.3
86.6~110.3
82.0~115.1
94.5~108.5
88.2~97.7
79.6103.6
84.5~101.1
84.7~102.1免费标准下载网bzxz
87.7~102.1
83.2~101.9
83.4~102.7
81.9~107.0
81.0~101.4
86.3~101.3
回收率/%
SN/T2430—2010
液相色谱-质谱/质谱法
88.0~107.5
82.8~101.5
84.4~105.9
76.5~108.0
79.8~104.3
78.6106.3
80.5103.5
80.8~110.3
83.4~101.2
85.5102.5
86.5~104.3
85.5~100.5
82.0112.1
77.0~107.3
83.2~108.5
80.5~104.5
71.8~101.0
77.1~97.6
76.5102.0
74.3~96.3
78.1~94.6
81.0104.0
73.3~98.3
76.4~99.2
78.5~103.0
78.8~102.5
85.6~101.4
84.0~108.5
84.5~103.0
82.4~103.1
89.5~112.0
79.8~104.3
85.2~106.8
SN/T2430—2010
Foreword
AnnexA.B.C.Dand Eof thisstandardareinformativeannexes.Thisstandard was proposed byNational RegulatoryCommission forCertificationand Accreditation.This standard was under the charge of national technical Standardization Committee on food safetydetectionfor importandexport.The standard was drafted by Chongqing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China.Hunan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People's Republic ofChina.
This standard was mainly draftedby Wang Guoming,Li Xianliang,Zhang Lei.Wang Meiling,ZhouQiming.LiYingguoTangBaibin,WeiyingandDaihua10
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