【行业标准】 进出口食品中噻酰菌胺残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2514—2010
进出口食品中噻酰菌胺残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of tiadinil residues in food for import and export-LC-MS/MSmethod
2010-03-02发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
金银伴网
2010-09-16实施
本标准附录A、附录B为资料性附录。前言
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王岚、谢建军、陈捷、徐娟、吴映璇、叶弘毅、陈永红http：//foodmate.netSN/T2514—2010免费标准下载网bzxz
1范围
进出口食品中噻酰菌胺残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T2514—2010
本标准规定了进出口食品中噻酰菌胺残留量检测的液相色谱-质谱/质谱检测方法本标准适用于生菜、胡萝卜、菜心、大米、柑橘、葡萄、板栗、牛肉、羊肝、鸡肉、罗非鱼、番茄酱、茶叶、蜂蜜中噻酰菌胺残留量的测定和确证。2方法提要
样品用乙酸乙酯提取，凝胶色谱（GPC）和固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。
3试剂和材料
除另有规定外.试剂均为分析纯，水为去离子水。3.1环已烷。
3.2乙酸乙酯。
3.3乙睛：色谱纯。
3.4甲醇：色谱纯。
3.5无水硫酸钠：650℃灼烧4h.在干燥器内冷却至室温，储于密封瓶中备用。3.6氯化钠、
3.7噻酰菌胺（tiadinil）标准品：纯度大于等于97.0%，分子式：C.Hi.CIN,OS.CAS编号：223580-51-6。
3.8噻酰菌胺标准储备液：准确称取适量噻酰菌胺，用乙腈配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液。3.9噻酰菌胺标准中间溶液：准确吸取适量标准储备液，用乙睛稀释至浓度为10.0ug/mL的标准中间溶液。
3.10噻酰菌胺标准工作液：使用前根据需要将标准中间溶液用各种样本的空白基质稀释成适当浓度的标准工作液
3.11氨基固相萃取柱：200mg，3mL和500mg.3mL，或相当者。临用前用乙睛将氨基柱（200mg）活化2次，每次2mL。在氨基柱（500mg）上填装0.5g无水硫酸钠，临用前用乙酸乙酯活化2次，每次2mL。
3.12CHROMABONDXTR固相苯取柱（大孔径硅藻土填料）：3000mg.15mL，或相当者。3.13微孔滤膜：0.2μm和0.45μm，有机相。4仪器和设备
4.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2凝胶渗透色谱仪
4.3天平：感量0.01mg和0.01g。高速均质机。
4.5高速低温冷冻离心机：10000r/min。1
雪品伙伴网ht：
SN/T2514—2010
4.6旋转蒸发仪。
4.7氮气吹干仪。
4.8旋涡振荡器。
4.9聚四氟乙烯塑料离心管：50mL，具塞。4.10玻璃刻度试管，5mL和10mL，具塞。4.11鸡心瓶：50mL。
5样品制备与保存
5.1样品制备
5.1.1生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄取有代表性样品约500g，将其可食用部分切碎后，用捣碎机加工成浆状。混勾，装入洁净容器，密封，标明标记
5.1.2大米、板栗、茶叶
取有代表性样品约500g用粉碎机粉碎并通过孔径2.0mm圆孔筛。混匀，装人洁净容器，密闭，标明标记
5.1.3牛肉、鸡肉、羊肝、罗非鱼取有代表性样品约500g，剔骨去皮.用绞肉机绞碎，混勾，装人洁净容器，密闭.标明标记5.1.4番茄酱
取有代表性样品约500g混匀，装人洁净容器，密闭，标明标记。5.1.5蜂蜜
取代表性样品约500g，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均勾；对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过60℃的水浴中温热振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时必须注意防止水分挥发。装人洁净容器，密封，标明标记。5.2试样保存
茶叶、蜂蜜、粮谷及坚果类等试样于0℃～4℃保存；水果蔬菜类和动物源性食品等试样于-18℃以下冷冻保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6测定步骤
6.1提取
6.1.1生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄、板栗、牛肉、羊肝、鸡肉、罗非鱼、番茄酱称取10g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加15.0mL乙酸乙酯，匀质提取1min，另取一个50mL离心管，加人10.0mL乙酸乙酯洗匀质器刀头，合并均质液。加入10g无水硫酸钠，振荡10min。提取液10000r/min离心5min，吸取10.0mL上清液，冰箱0℃以下放置10h，过0.45μm有机滤膜，待凝胶渗透色谱净化。6.1.2大米
称取10g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加人10.0mL水，浸泡20min，加15.0mL乙酸乙酯，勾质提取1min，另取一个50mL离心管，加人10.0mL乙酸乙酯洗匀质器刀头，合并均质液。加人10g无水硫酸钠，振荡10min。将样本提取液10000r/min离心5min，吸取10.0ml上清液，冰箱0℃以下放置10h，再过0.45μm有机滤膜，待凝胶渗透色谱净化。6.1.3茶叶
称取2g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入10.0mL水，浸泡20min，再加入1g无水硫酸钠，涡旋振荡1min。加人10.0mL乙酸乙酯，涡旋振荡2min，将样本提取液4000r/min离心5min，吸取上清液。再加人10.0mL乙酸乙酯，涡旋振荡2min，4000r/min离心5min，重复提取一次，合并二次的上清液，45℃吹氮浓缩至2mL左右，定容至10mL，过0.45um有机滤膜，待凝胶渗透雪品伙伴网ht：
色谱净化。
6.1.4蜂蜜
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称取2.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中.加3mL水，0.5g氯化钠，振荡混匀，过XTR固相萃取柱（3.12）。上样后，将样本液保持5min，用35mL乙酸乙酯分多次淋洗，流速控制为1.0mL/min，收集滤液于50mL鸡心瓶中，在45℃下减压浓缩至约0.5mL，待净化。6.2净化
6.2.1生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄、板栗、牛肉、羊肝、鸡肉、罗非鱼、番茄酱、大米、茶叶将6.1.1、6.1.2、6.1.3的所得溶液10mL，过凝胶渗透色谱仪，收集7min~14min的流出液，操作浓缩装置，在45℃下浓缩至近干，2mL乙睛定容，作为初净化液。将初净化液过氨基柱（3.11，200mg）后，用乙睛洗涤收集瓶3次，每次1mL，洗液同样过柱，流速控制为1mL/min，收集全部过柱溶液于吹氮管中，在45℃下吹氮浓缩至近干，用甲醇定容至1.0mL，再加人1.0mL去离子水，涡漩振荡均匀，过0.2um有机滤膜，待测。6.2.2蜂蜜
将浓缩液过氨基柱（3.11,500mg），4mL乙酸乙酯分三次洗脱，流速控制为1mL/min，收集洗脱液于吹氮管中，在45℃下吹氮浓缩干，用甲醇定容至1.0mL，再加入1.0mL去离子水，涡漩振荡均匀，过0.2um有机滤膜，待测。
6.3仪器测定条件
6.3.1凝胶色谱净化条件
6.3.1.1凝胶净化柱：Bio-Beads，S-X3.300mmX25（内径）mm；38μm~75μm。6.3.1.2浓缩时温度：45℃。
6.3.1.3流动相：环已烷-乙酸乙酯（50+50.体积比）。6.3.1.4定容试剂：乙睛。
流速：4.7mL/min。
进样量：5mL。
6.3.2LC-MS/MS质谱条件
液相色谱参考条件
色谱柱：WatersAtlantisHilicSilica柱，3μm，3.0mm（内径）X50mm，或相当者。柱温：40℃
流动相：甲醇-水（90十10.体积比）。流速：0.30mL/min。
e）进样量：10μL。
6.3.2.2质谱测定参考条件
参见附录A。
6.3.3液相-质谱/质谱法测定
根据样液中噻酰菌胺含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中噻酰菌胺响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，噻酰菌胺的保留时间约为1.01min。被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，如果样品中待检测物质与标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内：且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表1规定的范围，被确证的样品可判定为曬酰菌胺阳性检出。标准品的质谱图参见附录B中图B.1、图B.2。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
ht
>20~50
>10~20
SN/T2514—2010
空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中噻酰菌胺的残留含量，计算结果需扣除空白值AXexV
式中：
-样液中噻酰菌胺含量，单位为纳克每克（ng/g）；样液中噻酰菌胺的色谱峰面积；标准工作溶液中噻酰菌胺浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；最终样液的定容体积，单位为毫升（mL）；标准工作溶液中噻酰菌胺的色谱峰面积；最终样液所代表试样质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。计算结果应表示到小数点后两位。8
测定低限、回收率
测定低限
本方法的测定低限为10ug/kg。
回收率
噻酰菌胺添加浓度及回收率的实验数据见表2。表2噻酰菌胺的回收率
样品名称
胡萝卜
添加浓度/（μg/kg）
httr
..........(1)
回收率/%
92.4~108.0
78.5~95.0
71.8~91.0
78.6~91.6
88.5~105.0
76.0~95.8
100.0~109.0
89.5~108.0
97.8~107.8
99.4~109.0
89.0~107.5
98.6~110.2
87.7~110.0
76.0~104.5
90.6~105.8
93.4~110.0
91.0~117.0
87.4~109.4
样品名称
番茄酱
罗非鱼
表2（续）
添加浓度/（μg/kg）
ht
TEITETT:
SN/T2514—2010
回收率/%
92.0~102.0
88.0~104.5
90.8~101.6
90.7~103.0
87.5~104.5
88.4~104.0
90.0~99.0
86.6~94.4
82.0~105.8
86.5~100.0
96.8~105.6
72.8~95.7
78.5~109.5
68.2~101.4
90.7~109.0
90.0~104.0
93.2~104.4
103.8111.0
77.4~93.4
83.0~116.0
79.6~99.2
85.0~105.0
75.5~104.5
79.8~87.2
SN/T2514—2010
参考质谱条件：
离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：负离子扫描；
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件！
检测方式：多反应选择离子检测（MRM）：电喷雾电压（IS）：4500V；
雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；辅助气温度（TEM)：500℃；
离子源温度：500℃；
定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表A.1。表A.1噻酰菌胺监测离子对、定量离子对、去簇电压及碰撞能量被测物名称
噻酰菌胺
监测离子对
265.9/70.9
265.9/237.9
定量离子对
265.9/70.9
驻留时间/
去簇电压/V
注：对于不同质谱仪器.仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳碰撞能量/V
1）非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在API3000型液质联用仪上完成的.此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。6
http：
//foodmate.net
1: 0e4
附录B
（资料性附录）
噻酰菌胺标准品LC-MS/MS质谱图178.
110120130
1401506017018019020020:220
(m/)/amu
噻酰菌胺标准品子离子全扫描质谱图1.00
265.9/70.9
SN/T2514—2010
230240250260270
265.9/287.9
噻酰菌胺标准品多反应监测（MRM）色谱图（10μg/L）httr
odmatenet
SN/T2514—2010
Foreword
AnnexA,annexBofthisstandardareinformativeannexsThis standard was proposed by and is under the charged of the Certification and Accreditation Administration of the people's Republic of China.This standard was drafted by Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublicof China
The main drafters of this standard are Wang Lan,Xie Jianjun,Xu Juan,Wu Yingxuan,Ye Hongyi andChenYonghong.
http：//foodmate.net1
Determinationoftiadinilresiduesinfoodforimportandexport-
LC-MS/MS method
SN/T2514—2010
The standard specifies the determination and confirmation of tiadinil residues in foods by Lc-MS/MSspectrometry
This standard is applicable to the determination and confirmation of tiadinil residues in lettuce,car-rotcabbagerice,orange.grape,chestnut.beef.sheepliver.chicken,tilapia,ketchup,teaandhoney.2Principle
The residues in test samples are extracted with ethyl acetate.The extracts are cleaned up by GPC andNHz SPE cartridge or CHROMABOND XTR SPE cartridge,Determination and confirmation made by LCMs/MSusingexternalstandardmethod.Reagents and materials
Unless otherwise specified,all reagents used should be analytical grade,\water\is deionized water.3.1
Cyclohexane.
Ethyl acetate.
Acetonitrile：ChromatogramgradeMethanol:Chromatogramgrade.
Anhydrous sodium sulfate:lgnite at 650 ℃ for 4h,and keep in a tightly closed container.Sodiumchloride.
Tiadinil:Purity≥97.0%,formular:C,H1CIN,OS,CASNo.:223580-51-6.Standard stock solution:Accurately weigh adequate amount of tiadinil standards.dissolvewithacetonitrile and prepare a solution of 1.O mg/mL as standard stock solution.9
ht
SN/T2514—2010
Standard middle solution:Pipetteadequateamount of standard stock solution,dilute withace-3.9
tonitriletoprepareasolutionof 10.oμg/mLasstandardworkingsolution.Standard working solutions:Pipette adequate amount of standard middle solution,dilute with3.10
different solution extracted from blank sample to prepare appropriate concentration standard workingsolutions.
NH2SPE cartridge:200 mg,3mL and 500 mg,3mL,or equivalent.Beforeuse,conditiontheNH, SPE cartridge (200 mg) two times,with 2 mL of acetonitrile each time. Fill in 0.5 g anhydroussodium sulfateon the topof theNH, SPE cartridge(5o0 mg).Before use,condition theNHz SPE cartridgetwotimes,with2mLof ethylacetateeachtime.3.12
CHROMABONDXTRSPEcartridge（coarse-grainedkieselguhr):300mg,15mL,orequivaSyringe drireven filter:0.2 μm and 0. 45 μm (FH),Apparatusandequipment
LC-MS/MSspectrometry.equippedwithESIGelPermeationChromatography（GPC)Electronicbalance.0.01mg.0.01gHighspeed homogenizer.
Highspeedlowtemperaturecentrifuge:10o00r/minRotary vacuum evaporator.
Nitrogenevaporator.
Vortex mixer.
Centrifuge tube.polytetrafluoroethylene,50 mL.Glasstubewithscale,5mLand10mLwithstopper.Heart-shaped flask,50mL.
ht
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