【商检行业标准(SN)】 进出口危险化学品安全试验方法 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2497.10—2010
进出口危险化学品安全试验方法第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 10:Determination of T lymphocyte proliferation function2010-03-02发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-09-16实施
SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验；第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型潘繁殖试验：
第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：率丸细胞UDS试验；
-第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；
第8部分：胭宽淋巴结试验；
第9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；
第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；
第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：NorthernBlot实验；第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第2G部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第10部分。SN/T2497.10—2010bZxz.net
本部分修改采用《毒理学实验方法与技术》中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按GB/T1.1一2000做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。
本部分主要起草人：贾晓川、王利兵、张园、熊中强、李学洋、徐斌。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
进出口危险化学品安全试验方法SN/T2497.10—2010
第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验SN/T2497的本部分规定了T淋巴细胞增殖功能测定试验的术语和定义、试验原理、试验方法和试验结果。
本部分适用于进出口危险化学品对T淋巴细胞增殖功能的影响测定试验。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的文件，其最新版本适用于本部分。GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准GB14925实验动物环境及实施
3术语、定义和缩略语
3.1术语和定义
下列术语和定义适用于本部分。3.1.1
T淋巴细胞Tlymphocyte
T淋巴细胞的前体在骨髓，然后迁移至胸腺并在胸腺成熟，即胸腺来源淋巴细胞，在机体中发挥细胞免疫和免疫调节等功能。
3.2缩略语
下列缩略语适用于木部分。
噻唑蓝3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐.4试验原理
T细胞在体外培养时，受到有丝分裂原（如刀豆蛋白A)刺激后，可出现细胞体积增大，代谢旺盛，蛋白和核胶合成增加，邸向淋巴母细胞转化和增殖。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平，因此可作为测定机体免疫功能的指标之一。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚矾能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。5试验方法
5.1试验动物
小鼠或大鼠，根据试验需要选择不同体重动物。试验动物饲养条件应符合GB14924.1和GB14925有关规定。
SN/T2497.10—2010
5.2试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。细胞培养基、小牛血清、刀豆蛋白A、MTT(5μg/mL)、二甲基亚矾。5.3主要仪器设备
超净工作台、CO2培养箱、酶联免疫监测仪。5.4试验步骤
5.4.1细胞悬液制备
无菌获取不同来源淋巴细胞（脾、胸腺、外周血等），用含10%小牛血清的细胞培养基制成细胞悬液，按(12)×105个/100μL的浓度加人96孔培养板，每组至少3复孔。5.4.2对照组
应设立一组不加刺激剂的阴性对照组。5.4.3加入刺激剂
按照终浓度为5μg/mL加入刀豆蛋白-A，使每孔液体总量为200L5.4.4培养条件
37℃、5%CO2孵育66h。
5.4.5检测
每孔加人20μLMTT，维续孵育
Ah，弃去孔内液体,每孔加入150μL二甲基亚矾，用酶联免疫检测仪在490nm波长检测吸光度OD值，结果取每组平均值。6
试验结果
用刺激指数SI表示，见式（1)：OD
OD明性氧组
·（1）
SN/T2497.10-2010
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进出口危险化学品安全试验方法第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验SN/T 2497.10-2010
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中国标准出版社秦皇岛印剧厂印剧开本880×12301/16印张0.5字数6千字2010年6月第一版2010年6月第一次印刷印数1—1600
书号：155066·2-20943
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