【商检行业标准(SN)】 进出口化妆品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素的测定 液相色谱-质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2289—2009
进出口化妆品中氯霉素、甲霉素、氟甲砜霉素的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of chloramphenicol,thiamphenicol and florfenicol incosmeticsfor import and export-LC-MS/MS method2009-02-20发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-09-01实施
本标准的附录A和附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国浙江出人境检验检疫局负责起草本标准主要起草人：谢文、奚君阳、陈春、钱艳、陈笑梅。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准SN/T2289—2009
1范围
进出口化妆品中氯霉素、甲霉素、氟甲砜霉素的测定
液相色谱-质谱/质谱法
SN/T2289—2009
本标准规定了化妆品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲霉素的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于洗面奶、面霜、爽肤水中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素的检测。2方法提要
用甲醇提取样品中氯霉素、甲霉素和氟甲霉素，液相色谱-质谱/质谱测定和确证，外标法定量。3试剂和材料
水为二次蒸馏水。
3.1甲醇：高效液相色谱级。
3.2甲醇水溶液（2+8，体积比）：20mL甲醇加水稀释至100mL。3.3氯霉素标准品（chloramphenicol，CAS号56-75-7CnH12Cl2N2O）：纯度大于等于99%。3.4甲霉素标准品（thiamphenicol.CAS号15318-453.Cl2HisCl2NOsS）：纯度大于等于99%。3.5氟甲砜霉素标准品（florfenicol,CAS号76639-94，C12H15Cl2NO,S）：纯度大于等于99%。3.6标准储备溶液：分别称取适量标准品，用甲醇溶解，溶液浓度为100μg/mL。1℃～4℃冷藏保存。
3.7混合标准储备溶液：分别移取适量标准储备溶液（3.6），用甲醇稀释，溶液浓度为1ug/mL。1℃～4℃冷藏保存
3.8混合标准工作溶液：根据需要用甲醇水溶液（3.2)将混合标准储备溶液稀释成标准工作溶液4仪器和设备
4.1高效液相色谱-质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2旋涡混合器。
4.3高速离心机：7.000r/min
4.4分析天平：感量分别为0.01g和0.0001g。4.5离心管
4.60.45um有机相滤膜
5测定步骤
5.1样品处理
称取1g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞离心管中，加人20mL甲醇，于旋涡混合器上以2000r/min，混匀1min，以6000r/min离心5min，移取1.00mL。移取1.00mL（样液A）用甲醇水溶液定容至10mL，混匀，过0.45um滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定5.2测定
5.2.1液相色谱条件
a）色谱柱：Cg柱，150mm×4.6mm（内径）.5μm或相当者；1
SN/T2289—2009
流动相：甲醇-水，梯度洗脱程序见表1；流动相梯度洗脱程序
时间/min
流速：400μL/min；
进样量：20μL。
质谱条件
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：负离子扫描：
检测方式：多反应监测：
甲醇/%
雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件见附录A；
监测离子对见附录A表A.1。
5.2.3液相色谱串联质谱测定
根据试样中被测样液的含量情况，选取待测物的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如超出仪器线性响应范围应进行稀释。在上述色谱条件下甲霉素、氟甲砜霉素和氯霉素参考保留时间约为4.5min、4.9min和6.1min，标准溶液的选择性离子流图参见附录B中图B.1。5.2.4液相色谱-质谱/质谱确证
按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中待测物质的保留时间偏差在士2.5%之内。定量测定时采用标准曲线法测定。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度充许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
5.2.5空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。6结果计算和表述
>20～50
>10~20
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中氯霉素或甲砜霉素或氟甲砜霉素含量，计算结果需扣除空白值：
式中：
X,=GXVX1 000
mx1000
试样中氯霉素或甲砜霉素或氟甲砜霉素，单位为毫克每千克（mg/kg）；..（1)
从标准曲线上得到的氯霉素或甲砜霉素或氟甲砜霉素的溶液浓度，单位为微克每毫升(pμg/mL);
样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；最终样液代表的试样质量，单位为克（g）。测定低限和回收率
测定低限
氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素测定低限均为0.5mg/kg。7.2
回收率
标准添加氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素回收率的实验数据见表3。3标准添加氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素回收率的实验数据表3
化合物
氯霉素
甲砜霉素
氟甲砜霉素
添加浓度/（mg/kg）
洗面奶
82.1~99.3
回收率/%
83.2~99.4
81.4~95.8
81.4~105.4
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爽肤水
84.5~99.6
83.6~99.3
83.2~96.3
81.6~98.5
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监测离子对及电压参数
电喷雾电压（IS)：-3500V；
附录A
（资料性附录）bzxz.net
质谱参考条件1
雾化气压力（GS1）：262.01kPa(38psi)；气帘气压力（CUR）：186.165kPa（27psi）：辅助气流速（GS2)：310.275kPa45psi)：离子源温度（TEM）：525℃；
碰撞气(CAD)：41.37kPa(6psi)；离子对、去簇电压(DP)、碰撞气能量（CE)及碰撞室出口电压（CXP)见表A.1。表A.1
待测物
氯霉素
甲砜霉素
氟甲砜霉素
为定量离子对
离子对、去簇电压（DP）、碰撞气能量（CE)及碰撞室出口电压（CXP）离子对m/z
321.0/256.9a
321.0/152.0
353.9/185.1a
353.9/290.0
356.0/335.7
356.0/185.1
去簇电压(DP)/V
碰撞气能量
(CE)/V
碰撞室出口电压
(CXP)/V
1）非商业性声明：附录A所列参数是用API4000质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器1.0e4t
附录B
（资料性附录）
氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素混合标准溶液选择性离子流图5.37321.0/152.0
0.05101520230354450
0 0'5 1.0 15 2.8 2.5 3.0 3.5 4.0455.0
SN/T2289—2009
5.56.06.57.07.5/min
Max.7680.0cps
321.0/256.9
5. 5 6. 0 6. 5 7.07.5 /min
Max.1.4e4cps
356.0/185.1
5.0556.06.57.07.5/mim
0.51.01.52.02.53.03.51.0
Max.2.2e4 cps
356.0/335.7
455.055606.5707.5min
0510152.0253.03.54.0
Max.4310.0cps
4.16953.9/290.0
0.510152.82.530
3.54.0455.05.56.08.57.07.5mmMax.4580.0cps
353. 9/185. 1
5. 66. 06. h
图B.1氯霉素、甲砜霉素和氟甲霉素（0.25ng/mL）混合标准溶液的选择性离子流图5
SN/T 2289-2009
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进出口化妆品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素的测定
液相色谱-质谱/质谱法
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中国标准出版社出版
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880X12301/16
2009年5月第一版
印张0.75
字数11千字
2009年5月第一次印刷
印数1-2000
书号：155066·2-19672
定价16.00元
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