【国家标准(GB)】 肉与肉制品 维生素B1含量测定

ICS 67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T9695.27—2008bzxZ.net
代替 GB/T 9695.27—1991
肉与肉制品，
维生素B，含量测定
Meat and meat produrctsDetermination of vitamin B, content2008-08-28发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数码防份
中国国家标准化管理委员会
2009-03-01实施
GB/T9695由以下部分组成：
GB/T 9695.1《肉与肉制品
-GB/T 9695.2肉与肉制品
-GB/T 9695.3&肉与肉制品
GB/T9695.4岁肉与肉制品
游离脂肪含量测定》；
脂肪酸测定》;
铁含量测定》；
总磷含量测定》；
PH测定》：
-GB/T 9695.5肉与肉制品
GB/T9695.6肉制品胭脂红着色剂测定》；GB/T9695.7肉与肉制品
GB/T 9695.8《肉与肉制品
GB/T9695.9肉与肉制品
=-GB/T9695.10肉与肉制品
总脂肪含量测定》；
氛化物含量测定》；
聚磷酸盐测定》；
六六六、滴滴递残留量测定》；-GB/T9695.11肉与肉制品3
氮含量测定”：
-GB/T 9695.13肉与肉制品
钙含量测定净：
-GB/T9695.14肉制品淀粉含量测定\；水分含量测定\；
GB/T9695.15肉与肉制品
-GB/T9695.17肉与肉制品
-GB/T 9695.18《肉与肉制品
葡药糖酸-8-内酯含量的测定”;灰分测定\；
取样方法》；
GB/T9695.19肉与肉制品
锌的测定》
GB/T9695.20%肉与肉制品
-GB/T9695.21&肉与肉制品
GB/T 9695.22肉与肉制品
镁含量测定：
铜含量测定\；
：羟脯氨酸含量测定》；
-CB/T9695.23&肉与肉制品
—GB/T 9695.24肉与肉制品
胆固醇含量测定》；
维生素PP含量测定》；
GB/T9695.25肉与肉制品
GB/T9695,26《肉与肉制品
-GB/T 9695.27肉与肉润品
维生素A含量测定》；
维生案B含量测定》；
-GB/T9695.28《肉与肉制品维生素B含量测定GB/T9695.29%肉制品维生素C含量测定》;-GB/T9695.30肉与肉制品维生素E含量测定》；-GB/T9695.31肉制品总糖含量测定》。本部分为GB/T9695的第27部分。本部分代替GB/T9695.27—1991《肉与肉制品维生素B含量测定”。本部分与GB/T9695.27—1991相比主要修改如下：GB/T9695.27—2008
一按照CB/T1.1一2000《标准化工作导则第1部分：标推的结构和编写规则和GB/T20001.4-~2001&标准编写规则第4部分：化学分析方法》进行了结构调整和文字修改
用高效液相色谱法作为第一法、比色法作为第二法测定肉与肉制品中维生素B，的含量；试剂、仪器设备、分析步骤、结果计算作相应的改动，1
http
wmr:Fnndmatn-nn
GB/T 9695.27—2008
将“试样”一章分为“取样”和“试样制备”两章；用\10精密度”及其内容代替*9允许差”及其内容：增加了\试验报告”一章。
本部分的附录A为资料性附录。
本部分由全国肉禽蛋制品标准化技术委员会提出并归口。本部分起草单位：中国商业联合会商业标准中心、国家加工食品质量监督检验中心（广州）、广州市产品质量监督检验所。
本部分主要起草人：蔡依军、郑艳明、杜志峰、郭新东、罗海英、吴玉鎏、晓蕾。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 9695.27-1991.
http://foodmate.ne范国
肉与肉制品维生素B，含量测定
GB/T9695的本部分规定了肉与肉制品中维生案B，含量的测定方法。本部分适用于肉与肉制品中维生素B，含量的测定。2 规范性引用文件
GB/T 9695.27—2008
下列文件中的条款通过GB/T9695的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法（ISO369B：1987,MOD)第一法高效液相色谱法
3原理
试样经酸水解、酶解后，游离的维生素B（硫胺素）在碱性铁鼠化钾作用下被定量氧化成具有蓝色荧光的噻嘧色索，用异丁醇萃取，过滤后用高效液相色谱仪测定。以保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料
如无特别说明，所用试剂均为分析纯。4.1水：符合GB/T6682—2008规定的一级水。4.2冰乙酸。
4.3异丁醇，
4.4氯化钾或氧化钠。
4.5＇甲醇：色谱纯或经重蒸。
4.6乙酸钠溶液（c=2mol/L)：称取27.2g三水乙酸钠，溶于水中，用水稀释至100mL。4.7盐酸溶液（c=0.1mo1/L）：吸取2.1mL盐酸（pg1.19g/mL）用水稀释至250mL，混勾。4.8高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）溶液（c=100g/L）：称取10g高峰氏淀粉酶，溶于水中，用水稀释至100 mL。
临用前配制，
4.9氢氧化钠溶液（c=150g/L）：称取15g氢氧化钠，溶于水中，用水稀释至100mL。4.10铁氛化钾溶液（c=10g/L)：称取0.1名铁鼠化钾，溶于水中，用水稀释笔10mL。4.11氧化剂：10g/L铁鼠化钾溶液（4.10)1ml，用氢氧化钠溶液（4.9)稀释至100mL。临用前配制
4.12乙醇溶液[1十4（体积比)：量取200mL乙醇，加入至800mL水中，滤勾。4.13酸性乙醇：用盐酸溶液(4.7)调节乙醇溶液（1.12)pH值为3.4~4.3。4.14乙酸钠溶液[c=0.05mal/L（pH=4.5)]：称取3.4g三水乙酸钠，溶于水中，用水稀释至500mL.,冰乙酸（4.2)调pH值为4.5。4.15精密pH试纸：范围0.5~5.0。1
GB/T 9695.27—2008
4.16维生素 B, 标准浴液
4.16. 1标准忙备液c元100 ug/ml.):称取 50,0 mg维生素 Bl 标准品于 500 mL棕色容量瓶中,用酸性乙醇(4.13)溶解并定容，于4℃下保存。4.16.2标准工作被(c=10 μg/mL)吸取标准贮备被（4.16.1)10.0 mL,用性乙醇(4.13)定穿至100mL棕色容最瓶中。
5仪器和设备
实验室常规仪器及下列仪器。
5.1机械设备：用于试样的均质化。包括高速旋转的切割机，多孔板的孔径不超过4 mm的绞肉机。5.2培养箱或水浴:可控温度于 45℃～50 ℃。5.3高效液相色谱仪：带荧光检测器。6取样
实验室所收到的样品应真有代表性且在运输和储孵过程中无受损或发生变化。取样方法参见GB/T9695.19。
取有代表性的样品200g。
子试样制备
使用适当的均质设备(5.1)将试样均质。注意避免试样的温度超过25℃，若使用绞肉机，试样至少通过该设备两欲。
将试样装人密封的容器里，防止变质和成分变化。试样应在均质化后21h内尽快分析。8分析步骤
8.1 水解
称取 4 g～6 g试样(准确至 0.001 g),置于 150 mL 具塞锥形瓶中,加人盐酸溶液(4. 7)50 ml,播，于沸水浴中水解 30 min。取出,冷却至室温，8.2酶解
用乙酸钠溶液(4,6)调节试样水解被(8.1),使pH为 4. 0～~4.5,用 pH试纸(4. 15)检查。加入高峰氏淀粉溶液(4.8)5 mL,混勾，在45℃～50℃培养箱或水裕(5.2)中保温 3h。取出冷却后用盐酸溶液(4.7)调整PH约为3.5，用PH试纸(4.15)检香。将溶滋全部转移至100mL容量瓶中，用水定容。混勾，用滤纸过滤，取滤液备用。8.3氧化
取支50mL具塞比色管，加人1.5g氯化钾或筑化钠（4.4），再加入5.00ml试样溶液（8.2)。加人3.00 mL氧化剂(4.11),立即旋摇试管，混勾，随即加人10.00 mL异丁醇(4.3)萃取，塞上塞子振摇 90 s,静置分层。异」醇层经0. 45 μm滤膜过滤,液待测。8.4维生素B标准工作液的处理
吸取 2. 00 mL维牛素 Bt 标准工作液(4. 16. 2),置于 150 mL 具塞锥形瓶中,按 8. 1~8. 3 进行水解、酶解、氧化，异丁醇层经0.45 μm滤膜过滤，滤液待测。8.5测定
8.5.1液相色谱参考条件
a）色谱柱:Cle柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),或相当者；b）流动相：甲醇+0.05nol/L乙酸钠溶液（pH=4.5)=35+65(体积比);c)
流速:1. 0 mL./min:
d）柱温:30℃，
e）检测波长：激发波长为365nm，发射波长为435nm；进样量：20μ。
8.5.2液相色谱测定
GB/T 9695.27-—2008
根据试样液中维生素B，的含量情况，选定峰面积相近的标准工作液。标准工作液利试样溶液中维生素B，的响应值均应在仪器检测线性范围内。标谁工作液和试样溶液等体积间随进样测定。根据保留时间定性，外标法定量。标准色谱图参见附录A，B,6平行试验
按8.1~～8.5,对同一试样进行平行试验测定。8.7空白试验
除不加人试样外，均按8.1~8.5进行测定。9计算
按武(1)计算试样中维生素B,的含量。CXAXV
A.Xmx1000A
式中：
试样中维生素B的含量，单位为毫克每百克（mg/100名）；X
标准工作液中维生素B，的浓度，单位为微克每毫升(rg/mL)；试样中维生素B的峰面书：
-吸取维生素B，标准工作液进行前处理的体积，单位为升(mL);A,
-标准工作液中维生素B的峰面积；m-
-试样质量，单位为克（g）。
计算结果应扣除空白,结果推确至0.01 mg/100 g。10精密度
同一分析者在同一实验室、采用相尚的方法和相同的仪器、在短时间闻隔内对同一样品独立测定两次。两次测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。1
试验报告
试验报告应说明：
所有与识别样品有关的必器信息；敢样方法；
依据本部分所采用的方法；
本部分未规定或未列为可选的所有操作，以及可能影响测试结果的其他因案；测试结果：
如果检验了重复性,列出最终结果第二法　比色法
12原理
试样经酸水解、酶解后，游离的维生素BI（硫胺素）在碱性铁氮化钾作用下定量氧化成具有蓝色荧光的噻嘧色素。在激发波长365nm、发射波长435nm处测定其荧光强度，荧光强度与噻嘧色素含量成正比，以此计算维生素B的含量。3
ht
GB/T9695.27—2008
13试剂
如无特别标明，所用试剂均为分析纯。13.1水：符合GB/T6682—2008规定的三级水。13.2无水硫酸钠。
13.3氟化钾溶液（c=250g/L)：称取50g氮化钾，溶于水中，用水稀释至200mL。13.4酸性氧化钾溶液：每升氮化钾溶液（13.3）中加人8.5mL浓盐酸（pg1.19g/mL）。13.5人造沸石：市售品须经活化处理。13.5.1活化方法：将粒度为40目～60目的人造沸石置于烧杯中，加约5倍量的热水搅拌，静置后倾出上清液。重复此操作，直至上清液透明。加人5倍童的3%乙酸溶液搅拌浸泡10min，静置后倾去上消液，重复此操作3次，加人约5倍量热的酸性氮化钾溶液（13.4），在沸水浴中加热25min，弃去上清液，加3%乙酸溶液洗涤两达后，用水反复洗至无氛离子为止（用硝酸银溶液检查）。将处理好的人造沸石浸没于水中保存，也可于80℃存放备用。13.5.2回收率的测定：吸取2.00mL维生素B，标推工作液（4.16.2）于100mL容量瓶中，用水释至刻度。吸取25.00mL稀释液两份，其中一份按17.3～17.5进行净化、氧化和测定，另份按17.1~17.5进行氧化和测定。净化的回收率应大于85%。13.6其他试剂：同4.2~4.4、4.6~4,13和4.154.16。14仪器和设备
实验室常规仪器及下列仪器。
14.1荧光分光光度计。
14.2人造沸石玻璃层析柱：将脱脂棉置于玻璃层析柱中，倾入悬浮于水中的人造沸石（13.5），高度约为10cm（约用1.5g人造沸石），洗下贮液槽壁上的人造沸石颗粒。在吸附过程中液面要始终高于沸石表面，防止柱内有气泡。层析柱可控制流速为1mL/min。14.3其他仪器和设备：同5.15.2。15取样
同第6章。
16试样制备
同第7章。
17分析步骤
17.1水解
同8.1。
17.2酶解
同8.2。
17.3净化
吸取酶解滤液25.00mL，注人人造沸石玻璃层析柱（14.2），控制层析柱流速约为1mL/min，弃去流出液。用15mL近沸热水分3次洗涤层析柱，弃去流出液。用25mL60℃～80℃热的酸性氛化钾溶液（13.4)分5次洗脱维生素B，收集于25mL容量瓶中，冷却后用酸性氧化钾溶液（13.4)定容。混勾备用。
17.4氧化
GB/T 9695.27-2008
取两支50mL具塞比色管，各加人1.5g氟化钾或氮化钠（4.4），加人5.00mL净化后的试样溶液。一支试管中加入3.0mL氧化剂(4.11)，立即旋摇试管，混匀，随即加入10.00m异丁醇（4.3)萃取，塞上塞子振摇90s，静置分层。另一支试管作为空白对照，加人3.0mL氟氢化钠落液（4.9），旋摇混匀，随即加人10.00mL异丁醇（4.3)萃取，静置分层。异丁醇层用无水硫酸钠（13.2)脱水。17. 5测定
调节荧光激发波长为365nm.发射波长为435nm，狭缝为5mm。取异丁醇萃取液（17.4），置于比色血中，测定氧化样品管和空白样品管中溶液的荧光强度。17.6标准溶液的处理和测定
吸取2.00mI.维生素B,标准工作液，于150mJ.其塞锥形瓶中，按17.1~17.4进行水解、酶解、净化、氧化、测定。
18计算
试样中维生素B，的含量按式(2)计算：I-I
Q-Q×#x1000×100
式中：
试样中维生素B，的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；I——氧化样品管中异丁醇溶液的荧光强度；I——空白样品管中异丁醇溶液的荧光强度；Q--氧化标准管中异丁醇溶液的荧光强度；Q“—空白标准管中异厂醇溶液的荧光强度；20-—2.00ml.10μg/mL维生素B标准工作液含维生素B，的量，单位为微克（μg）;试样质量，单位为克(g)。
计算结果准确至0.01mg/100g。
19精密度
同第10章，
20试验报告
同第11章。
日伙伴网
CB/T9695.27—2008
附录A
（资料性附录）
维生素B；标准溶液的液相色谱图维生素B
维生素B，标准溶液的液相色谱图http：//foodmate.net7.0
1GB/T9695.19
肉与肉制品
参考文
瑕样方法
http：//foodmate.netGB/T9695.27—2008
GB/T9695.27-2008
httn：/
中华人民共和国
国家标
肉与肉制品维生素B含量测定
GB/T 9695.27--2008
中国标准出版社出版发行
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邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
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开本880×12301/16印张0.75字数15千字2008年11月第一版2008年11月第一次印刷*
书号：155066·1-31574定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
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