【商检行业标准(SN)】 进出口化妆品中双香豆素和环香豆素的 测定液相色谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2104—2008
进出口化妆品中双香豆素和环香豆素的测定液相色谱法
Determination of dicumarol and cyclocoumarol in cosmetics for import and export-Liquid chromatography
2008-07-17发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-02-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中国检验检疫科学研究院负责起草。本标准主要起草人：程艳、王星、武婷、陈伟、林远辉、张帆、刘柳、王超本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。SN/T2104—2008
1范围
进出口化妆品中双香豆素和环香豆素的测定液相色谱法
本标准规定了进出口化妆品中双香豆素和环香豆素的液相色谱测定方法SN/T2104—2008
本标准适用于皮肤护理类、皮肤清洁类、皮肤美容/修饰类进出口化妆品中双香豆素和环香豆素的测定。
2原理
化妆品中的双香豆素和环香豆素用乙睛十0.1mol/L氢氧化钠溶液（9十1，体积比）超声提取，过滤后，采用反相高效液相色谱技术进行分离、测定。根据其保留时间定性，外标法定量。3试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为二次去离子水。3.1乙腈，色谱纯。
3.2甲醇，优级纯。
3.3双香豆素，纯度≥99%。
3.4环香豆素，纯度≥99%。
3.50.1mol/L氢氧化钠溶液：称取0.40g氢氧化钠·加水溶解后转移至100mL容量瓶中，定容至刻度。3.61.0mol/L乙酸溶液：移取5.7mL冰醋酸.加水溶解后转移至100mL容量瓶中，定容至刻度3.70.05mol/L乙酸铵溶液（含0.25%体积比的乙酸）：称取3.85g乙酸铵，加水溶解后转移至1000mL容量瓶中，加入2.5mL冰醋酸，定容，过滤后备用3.8双香豆素和环香豆素标准储备液（100mg/L）：分别准确称取双香豆素（3.3）和环香豆素（3.4）0.01g，精确至0.0001g，加人5mL二氯甲烧，再加人5mL乙睛（3.1），超声使固体全部溶解，用乙睛定容至100mL，冰箱冷藏保存。根据需要用乙稀释成适用浓度的标准工作溶液，现用现配3.9乙睛十氢氧化钠溶液：量取乙睛（3.1)90mL，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液（3.5）10mL，混合均匀，配制成100mL溶液。
4仪器
4.1液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。4.2微量进样器：10μL。
4.3超声波清洗器。
4.4离心机：大于6000r/min
4.5溶剂过滤器和0.45um有机过滤膜。5测定步骤
5.1试样处理
称取化妆品试样0.5g至聚四氟乙烯容器中，精确到0.001g，加入乙晴十氢氧化钠溶液（3.9）15mL.在超声波清洗器申超声振荡20min后，加入0.15mL乙酸溶液（3.6），并用乙睛十氢氧化钠溶SN/T2104—2008
液（3.9）定容至25mL，混匀。取部分溶液放人离心管中，在离心机上于6000r/min离心20min，离心后的上清液经0.45μm有机滤膜过滤.滤液待测定用。5.2样品测定
5.2.1色谱条件
5.2.1.1色谱柱：KromasilCis柱250mmX4.6mm（内径）.5μm，或相当者。5.2.1.2流动相：（A)相：5%甲醇（3.2）+95%乙睛（3.1)；（B）相：5%甲醇（3.2）+95%的0.05mol/L乙酸铵溶液（含0.25%体积比的乙酸）（3.7）。5.2.1.3梯度条件：如表1所示。表1梯度洗脱条件
时间/min
流速：1.0mL/min。
5检测波长：306nm。
5柱温：室温。
5.2.1.7进样量：10μL。
5.2.2标准工作曲线绘制
分别移取双香豆素和环香豆素标准储备液（3.8配制成0.10，0.50，1.0，1020.50mg/L标准工作溶液。取10uL注人液相色谱仪，按色谱条件(5.2.1)进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。标准物质色谱图参见附录A5.2.3试样测定
用微量进样器准确吸取10μL试样溶液（5.1)注人液相色谱仪，按色谱条件（5.2.1)进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的被测物浓度。样品溶液中双香豆素和环香豆素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。双香豆素和环香豆素含量高的试样可取适量试样溶液用乙睛稀释后进行测定。6结果计算
化妆品中的双香豆素和环香豆素的含量按式（1)计算：X=CXV
式中：
X一一化妆品中双香豆素和环香豆素的质量含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；....(1)
从工作曲线上查出的样品溶液中双香豆素和环香豆素的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V——试样定容体积，单位为升（L)；m—试样的质量，单位为克(g)。7测定低限
本方法对双香豆素的测定低限为5.0mg/kg；对环香豆素的测定低限为5.0mg/kg。2
回收率和精密度
SN/T2104—2008
双香豆素和环香豆素含量在5.0mg/kg~1000mg/kg范围的回收率和精密度如表2所示。2双香豆素和环香豆素的回收率和精密度表2bzxZ.net
双香豆素
环香豆素
添加浓度/（mg/kg）
平均回收率/%
相对标准偏差/%
SN/T2104—2008
双香豆素（3.70min）；
环香豆素（9.69min）。
附录A
（资料性附录）
标准物质液相色谱图
图A.1双香豆素和环香豆素标准物质液相色谱图12
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