【国家标准(GB)】 猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T20743—2006
本标净规定了猪肉、猪肝和猪肾中杆整然我留试的滚相色谱-串联质谱测定方法本标推适用于猪肉、猫肝和猎肾出抑菌监残留量的测定(半京法测定杆荫肽中主要成分杆菌肱A)。本标准的方法捡出限：50.0%g/kg，2规范性引用文件
本腺的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有下列文件中的条随进
的修改单（不包括谢语的们）域修订版于套鼓励报据本标准达成协议的各力研究楚否可用这些文伴的最渐版
领鑫方法
GB/T 8379.
(GB/T 6379. 1-
20941305725
GB/[ 6379.2
性与再现性的基
测量方法与
(GR/T63
GB/T6682
新实验空用入
3原理
试样中杆图能观用纹化的购
相举收柱化，滋相色资-串联质谣试剂和材料
除另有说明外：
4.1醇，色谱纯。
随戴剂均光
三氮甲烷：色谱
4.3甲酸。
4.4双硫踪：优级纯。
4.5杆菌肽标准物质：纯度三强0%。蒲度（正确度与
外标法定量：
新版本题用于体标准，
第1分：总则与定义
第2部分确定标准测觉方法单复
02,nen 1sty 369: 19873
烧溶液进行液液分肥净化后，闻经面5Www.bzxZ.net
4.6甲醇-1水(1+1)：量取250mL醇（4.1)与250mL水混）4.70.3%甲鞍溶液：移取8mL甲酸（4. 3)装肾纳80-m水的11.容量滋中，用水定容至刻度并混匀。4.80.1%甲酸甲醇漆液：移取1mL用酸子腰有约800mL甲酵的11.容量瓶十，用甲醇定容至刻度并混勾。
4.90.0025%双硫踪三氯甲烧溶液：称取0.025g双碗腺（4.1）于装有约800mL主用烷（4.2)的11.容量瓶中，用三甲烷定容至刻度并泥匀。4.10饱和双硫踪三氮甲烷溶液：移取适量的0.0025%双硫踪三氯甲烷溶液于盛有约100mL甲醇+水(1十1)的250niL分液漏斗中，振挤】mi，静臂分层，最下层溶液备厢。4.11杆菌肽标准储备溶液：准确称取适量的杆菌肽了50mL容登瓶中，用0.1%印酸甲源溶液配制成滋度为0.1mg/mL的标准储备落液。储各液在2℃-℃保存，可用3个月。GB/T 20743—2006
4.12杆菌肽标准F作溶液：移取杆菌驱标准借备溶液1.0mL于10m容凰瓶中，用0.1光甲甲醇落液定容，配制成浓度为10.0mg/L的标推工作溶液，在2℃～4℃保存，间用1周。4.13杆菌肽基质标准工作溶液，根据需要吸取适盘的杆菌版标推工作溶波，用空启样品提致液稀释成适当浓度的基质标推工作游液，当天配制。4.14OasisHLB固相苯取或相当者：G0mg.3ml。使用前分别用3mL醇和3mL水预处理，并保持柱体湿润。
5仪器
5.1液相色谱-串联四极汗质谱仪，配有电喷穿离子源。分析天单：感董0.1mg和0.01g
高迷组织捣锌机;转遮不低于 10 000 1/1nnit1。5.4
离心机：转速不低于1000r/min。5.6
离心管：10ИL和60mL具寨。
被器：50mI
5.8相萃取烹空装置。
摄气收于仪
微量法射：25100
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
猪肝咨要去除脂舫和其他的非肝脏、肾脏组织，猎肉要去皮和骨头，将其揽锌排匀，分尚0.5 kg作为试样,将制备好的试样密划,并做已标记。6.2试样保荐
将试样管了18℃条件下保存。
7测定步骤
7.1据取
称敢10g试样（箱确到0.1g)置于60m离心管中，加人0.1ml.中酸和20ml.甲醇+水(1+1)，于高迷组织搞碎机上勾浆提取1.min，然后加人20mL经伊醇+水（1一1)钩和的△.0025%双硫踪三氧甲烷溶液，于振薪器上剧烈振荡 10 min,以 4 000 r/min 离心 10 Iiin:取上清液 10 mL 于50mL试管中，弃去其余上清液。往上述双硫踪三氧伊烷溶液中加人30mL水，拙碎残渣，置于振荡器上剧烈报荡1.0min.移取全部上清液于另-一G0mI.离心管中。重复提取一次，合并上清，混匀，以4000r/min离心10min.取上清液30 mL与 50 mL试管中的提取液合并,混勾。7.2净化
在颜处理过的固相率取柱顶部连接液器，移入上述试管中样液，待样藏全部通过萃取性后，加入2m！水，弃去全部流出液：然后将固相萃取挂在50kPa~55kPa的负乐下拍干1h.最后用2mL甲醇洗脱，收洗脱液于10mL试管中，洗脱液在35℃水浴中用氮气吹于，月0.5mL甲醇重新溶解残澎，再加人0.5mL0.3%甲酸溶，掘勾后，供液相色谱-率联质谱议测定。7.3測定　
7. 3. 1 液相色谱条件
2）色谱柱：InertsilCODS-3,5.0μm，150mmx2、1mm（内径）或相当者2
液相危谱梯度泌脱系件见1；
桂：40；
进样量:20 μL
表1液相色谱梯度洗脱条件
时间/min
质谱案件
流速/(L/min)
离了源：电喷雾离子源：
扫描方：正离子扫描：
检测方式：多反应监测，
电嘴等电压：5500V：
碰描气压力：41oka
签化气压力：690kPa:
气审气压力：410kPa
辅助加热气压力：690kPa：
离手源瀛度700℃！
水（含0.3%甲酸)/（%）
GB/T 20743--2006
甲醇/（%)
定性离子对，定量离子对和玉巅电压（DP）、聚焦电压（FP)、避搬气能量（CE)及碰撞室山厂电压(CXP)见装2。
表2杆菌的定性离子对、定盈离子对、去能电压、聚焦电压、碰撞气能盘和碰擅室出口电压定性
杆菌肽
离子对
712.3/227.2
712.3/355.2
离子对
712.3/799.2
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
电压(DF)/
电压(FP)/
雅瘙气
能墨(CE)/
碰撞室
出口电压(CXP)/
用5个不同浓度的杆菌肽基质标推工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标推工作线对样品进行定量，样品溶液中杆菌肽的响应值均应在仪器测定的线性范用内。在上述色谱条件下，杆菌肽的总离了流图参见图A.1。杆菌肽的保留时间为8.49 min.
本方法的添加回收数据参见表B.1。7.4平行试验
接上述步骤，对同一试释进行乎行试验。7.5空自试验
除不称取试样外，与按上遂分析步骤避行。3
GH/T 20743—2006
8结果计算
杆菌肽残留量按式(1)计算：
x—--试样中杆菌肽残留最，单位为微克每干克(/kg)；从标推工作曲毁得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克衔密升（ng/mL）：试样溶滋定容体积，单位为磨升（mV
m—殿终试样溶被所代表的试样质鼠,单位为克(g)。注：计弹结票需将白伍扣除。
9精密度
本标准的精密度数按照GB/T6379.1和GB/TG379.2的规定确定约，其配友性和再现性的谨以改的可信度来详有
9. 1邀复性
在章复性测定的件下，获得
含量范国及重复化好克表3。
杆菌版
智含趾范
注：的为沔次瘤症霜果府练本平如果两次测能您的差道超过重
9.2再现性
在再现性惯羽康得的两次
及重复件方程见装
舌画及画复性粘
深超过量复性限，样品中打菌肽a
可现性限R
IgR0. 959 Glgm--0.6i0 2
新完成两次事个诚验陷测定，
现性限群品中打菌肤合燃范
附录A
（资料性阴录）
杆菌肽标准物质的总离子流图
杆菌肽标准谢质的总离子流图，见图A.1。TE
健国空室
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GB/T20743-2006
ahdiaa
12346789101112191415161718192022223242H/tun
图A.1杆菌肽标准物质的总离子流图5
GB/T20743--2006
(资料性附录）
回收率
本标准中杆菌肽添加浓度及乎均回收率的试验数据见表3.1。表 B.1托菌肽添加浓度及其苹均回收率的试验数据样品名称
添胡浓度/(nag/kg)
回收率(路)
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