【国家标准(GB)】 蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑、二串硝咪噬残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T20744--2006
本标谁规定了蜂密中中硝唑、洛确隧瞬二甲确咪唑残留整的液相色请-串埃巅谱测定方法。本标雅适阴于降蜜叶甲硝唑落醇破唑，二出殖咪唑残留射的测定。本标谁的方法捡出限：坦硝噬检出限0.24g/kg：落髓哒瞧和前硝咪唑捡出限均为0.2\g/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通社本标准的品联必不标通的偿改单（不包括谢娱的容）成是誉可使州这些文牛最新版本
GB/T 6379. 1过为法
(GH/T 6379. 12004/ISO 5725
GB/T 6379证方法与
性与典现性的想
能(GB/T 62
GR/T 6S82
密断实验室用才
3原理
单整中三种销糕
球美药物
串联质谱仪测定
4试剂和材料
标法定最。
水为GB/T668规烷
甲醇：色谱纯。
乙膊:色谱纯。
艺酸乙醋：色谱纯。
4.4甲酸：优级纯。
确度印店一精器
客利试验方法（GB/T）
之提取，
凡是注日期前用文件，其随后所有励根据水标精达成协议的备方研究版本造图于來标准，
将度）
警「部分：总则与定义
第2部分：确定标准诞鼠方法监复93,neq 1s01 369641087)
情，经过固概毕取液化，液相色谱4.5无水硫酸销：分折纯。在650弗炉中灼烧5h，贮存于器中。4.6洗脱剂：甲醇+乙腈+0.1%甲酸水（8点2m4.7甲硝唑、洛郁磁唑，二甲硝咪噬标推物质：纯度含98%4.8甲磷，洛硝哒唑、二甲硝咪噬标谁备溶液：1.0mS/ml.。撤碗称取适猛的甲硝唑，洛消贴唑二甲硝咪唑标涯物质，分别用甲醇配成标准储备液。端备液在低于4℃时可保存两个月。4.9年硝醛、洛硝随唑、二电硝咪唑混合标准工作溶液A和B：根据带要吸取适避甲硝唑、洛磷哒唑，二甲确咪磁标推储备落液，用甲游稀释成甲硝唑为1.01g/m，格硝哒和用硝咪唑均为2.0以g/m1l的混合标准工作熔液A：再吸取适量混合标准工作浴液A用中醇稀释成甲硝唑为0.01g/L，销唑和二甲磷咪唑均为0.020严/mL的混合标雅T作溶液B。混合标准工作溶液A和B应现用现配。4.10甲确唑.淤硝哒唑、二甲硝咪唑混合基质标准工作溶液：根据需要吸取适量甲销唑、洛硝哒座、二1
GB/T 20744—2006
甲硝咪唑漫合标准工作落液A和B，用空自样品凝取液稀释度浓度分别为0.251g/ml..0.50五g/mL、1.00ng/ml、5.00mg/mL的混合满质标准工作溶液。混合基质标准上作落液应现用现配。4.11BA双ERBONDCarboxyicAcid固相萃取柱或相当者：5o0mg3mL。便用前用4nL乙酸乙酯领处现，保持柱体凝润，
4. 12谜膜：0.20Mm。
5仪器
液相色谱串联质谱仪：有电喷离子源。5. 1
5.2分析天平：量0.1和0.01。
5.3液体混匀需。
5.4固相萃取真空装置。
5.5振荡器。
5.6具察玻端离心管：50mL，
5. 7烹空泵;真空度应达到 80 kPaa5.8离心机。
5.9旋转蒸发器。
5.10刻度样品管：5mL。
5.11梨形瓶:150 ml
5.12简形漏斗。
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
对无结晶的实验窒样品，将其揽拌均。对有结晶的样品，在密闭情说下，置于不超这60℃的水浴中温热，报满，特样晶金部融化后揽勾，迟速冷却至室温。分出0.5kg作为试伴。制条好的或详置于样品瓶中，密封并做上标记。
6.2试样保存
将试样于常温下保存。
7测定步骤
7.1提取
称取10g试样（确到0.01g)置于50mL具塞玻璃离心管中，媚人10mI.水，在液体混句器上混匀，加20ml.乙截乙醋，于振荡端上振蔽20min，以3000/min离心5min，取上清液过盛有25g无水磁酸钠简形漏斗至裂形瓶中。再用20mL乙酸乙酯提取次，过无水硫酸钠简形漏斗：合并上清液，用旋转蒸发器于45℃水浴上减压蒸发至约2ⅡL，待净化。7.2净化
将工述浓缩液移至CarhaxylicAcid顾相萃取柱中，再分别用4mL乙酸乙酷和4mL.乙腈洗漆架形瓶和萃取柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽下萃联柱2min，用2mL洗脱剂以≤3tnL/tnin流速洗脱，收集洗脱液于5mL刻度样品管中.用洗脱剂定容至2mL，过0.20μm滤膜，供没相色谱常联质谱仅测定。
7.3谢定
7.3.1液相色谱条件
a）色谱柱：Ailanmisdcw，3μm，15omm×2.1mm（内径）或相当者：b）流动相：艺--0.1%酸水（30+70);2
流速：200mlL/min；此内容来自标准下载网
桂温：30℃；
进样量：20μL
质谱条件
离子源：电惯雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子打描：
检测方式：多反应监测；
电喷雾电压，5500V：
穿化气压力.0.069 MPa，
气帘气压力：0.069MPu：
第助气流邀：6L/min:
离手源温度：700℃；
定性密子对，定量离子对，去簇电压和碰尴能见表1。装1三种硝基咪唑药物的质谱参数中文名称
卑硝唑
洛硝哒唑
甲硝唑
英文名称
nelronidazole
ranidazoie
dimctridazple
爱性离于对(）
172. 1/126. 1
172.1/82.1
201.1/140.2
201. 1/110. 1
142.2/06. 1
142.2/81.2
定对（）
173.1/128. 1
201,1:140.2
143.2/96.1
去族电压V
GB/T 20744--2006
御能证
7.3.3液相色谱-联质谱测定
在仪器最佳工作条件下，用甲销唑，落确哒噬、二中销迷唑混合基质标准工作落液分别送样，以峰面积为纵然标，混合基质标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲裁，用标滤工作曲线对栏品进行定量，样品溶液中中硝唑、落硝哒唑、二甲硝咪唑的响应值均应在仪器测定的线性范围内。甲消唑、洛硝哒唑、二甲消咪唑标准物质总离子流图参见图A，1。在上述色谱条件和质谱条件下，甲硝噬，洛硝哒唑、二申硝咪唑的参考保留时间见表2.表2三种硝基咪唑药物的参考保留时间中文名称
甲硝唑
硝哒唑
二甲磷咪噬
本方法的添加回收率数据参见附录B。7.4平行试验
按以上步骤，对同一试痒逊行平行试验测定。7.5空自试验
除不称取试桦外，均接上述步骤同时完成空白试验。8结果计算
结果按式(1)计算：
保留时问/min
G3/T 20744—2006
X--试样中被测组分残留量，单位为微克每干克（ug/kg)从标准工作业线得到的敬测组分溶液浓度，单位为纳克每密升（ng/mL)：V一样品溶最终定容体积，单位为毫升（mL）；-样鼠游波所代表最终试样的质鲨，单位为克（g）。法：计穿站果应扣除空出殖。
9精密离
..+...(1)
本标准的精密度数据是按照B/T6379.1和GB/16379.2前规定定的，宣复利再现性的值以95%的可信度案计算。
9.1置复性
在電复性测定条件下殊得的两次独立测试结果的绝对慈值不超过章复固限。率岱中甲啃睡，洛猫哒唑、二甲猫咪唑含画范国及重复性裘
格硝哒理
二甲咪哦
0. 1~-2,
0. 1 --2.
往：n为两淡给果的算术孕
妇集差值超
望覆性限，应舍蒙
9.2再现性
在再现性测定条伐下.获得的
硝哒醛、二甲硝味喱最含盘范国及0. 843 9
.2008lgm
天玉新完成西饮
测试结巢而纯对
见装3。
解斑性
lgR0.05g21gm-0.7466
luR-1.11001sM-0.5884
IgR-.555lg-0.7881
武验的测定。
过性限R。路中甲唑路
附录A
（资料性附）
标准物质总离子流阁
甲硝唑、落消哒噬、二甲确咪唑标准物质总离子流图，见凰A，1。2.3c4
5 000. 0 -
4 000. 0
甲硫醒
图A.1甲硝唑、落硝哒哒、二甲硝咪唑标准物质总离子流图GB/T20744—2006
GB/T20744-2006
(资料性附聚)
回收率
本方法中甲硝唑，洛硝哒跳、二甲硝账幽添加浓度及其乎均回收率的试验数据，见装B.1。表8.1甲硝噬、洛硝唑、二甲稍瓣唑加浓度及其乎均回收率的试验数据药物名称
净硝唑
格硝脑唑
兰伊醒喉哦
滋液度（/kg）
平均回收率路)
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