【国家标准(GB)】 食品中叔丁基羟基茴香醚与二叔丁基对甲酚的测定方法

GB/T5009.30—1996
中华人民共和国国家标准
食品中叔基羟基商香醚（BHA）与2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）的测定方法Method for determination ofbutylated hydroxyanisoleand butlated hydroxytolueneinfoodsGB/T5009.30—1996
1主题内容与适用范围
本标准规定了糕点和植物油等食品中BHA、BHT的测定方法。本标准适用于糕点和植物油等食品中BHA、BHT的测定。最低检出浓度：气相色谱法最低检出量为2μg，油脂取样量为0.5g时最低检出浓度为4mg/kg。比色法最低检出量为10ug，油脂取样量为0.25g时最低检出浓度为4mg/kg。
2引用标准
GB/T5009.6食品中脂肪的测定方法第一篇气相色谱法（第一法）
3原理
样品中的叔丁基羟基茴香醚（BHA）和2，6-二叔丁基对甲酚（BHA）用石油醚提取，通过层析柱使BHA与BHT净化，浓缩后，经气相色谱分离后用氢火焰离子化检测器检测，根据样品峰高与标准峰高比较定量。4试剂
4.1石油醚：沸程30~60℃。
4.2二氯甲烷。
4。3二硫化碳。
4.4无水硫酸钠。
4.5硅胶：6080目于120℃活化4h放干燥器备用。4.6弗罗里矽土（F1orisi1)：60～80目，于120℃活化4h放干燥器中备用。4.7BHA、BHT混合标准储备液：准确称取BHA、BHT各0.10000g混合后用二硫化碳溶解，定容至100mL，此溶液分别为每毫升含1.0mgBHA、BHT，置冰箱保存。
4.8BHA、BHT混合标准使用液：吸取标准储备液4mL于100mL容量瓶中，用三硫化碳定容至100mL，此溶液分别为每毫升含0.040mgBHA、BHT，置冰箱中保存。
5仪器
5.1气相色谱仪：附FID检测器。5.2蒸发器：容积200mL。
5.3振荡器。
5.4层析柱：1×30cm玻璃柱，带活塞。中华人民共和国卫生部1996—06—19批准1996—09—01实施
GB/T5009.30—1996
5.5气相色谱柱：长1.5m，内径3mm玻璃柱，于GasChromQ（80~100目）担体上涂10%（m/m）QF-1。6样品处理
6.1试样的制备
采取0.5kg含油脂较多的样品，1kg含油脂少的样品，然后用对角线取2/4或2/6或根据样品情况取有代表性样品，在玻璃乳钵中研碎，混合均匀后放置广口瓶内保存于冰箱中。下载标准就来标准下载网
6.2脂肪的提取
6.2.1含油脂高的样品（如桃酥等）：称取50.0g，混合均匀，置于250mL具塞锥形瓶中，加50mL石油醚（沸程为3060℃），放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。6.2.2含油脂中等的样品（如蛋糕、江米条等）：称取100g左右，混合均匀，置于500mL具塞锥形瓶中，加100～200mL石油醚（沸程为30～60℃），放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。6.2.3含油脂少的样品（如面包、饼干等）：称取250～300g混合均匀后，于500mL具塞锥形瓶中，加入适量石油醚浸泡样品，放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。7分析步骤
7.1试料的制备
7.1.1层析柱的制备：于层析柱底部加入少量玻璃棉，少量无水硫酸钠，将硅胶-弗罗里矽土（6+4）共10g，用石油醚湿法混合装柱，柱顶部再加入少量无水硫酸钠。
7.1.2试样制备：称取6.2制备的脂肪0.50~1.00g用25mL石油醚常用多入7.1.1的层析柱上，再以100mL二氯甲烷分五次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干时，用二硫化碳定容至2mL，该溶液为待测溶液。7.1.3植物油试料的制备：称取混合均匀样品2.00g放入50mL烧杯中，加30mL石油醚溶解转移到7.1.1层析柱上，再用10mL石油醚分数次洗涤烧杯并转移至层析柱，用100mL二氯甲烷分五次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干，用二硫化碳定容至2mL，该溶液为待测溶液。7.2测定
注入气相色谱3μL标准使用液，绘制色谱图，分别量取各组分峰高或面积进3μL样品待测溶液（应视样品含量而定），绘制色谱图，分别量取峰高或面积，与标准峰高或面积比较计算含量。7.3计算
hxxVxcs
-待测溶液BHA（或BHT）的质量，mg；式中：m
hi注入色谱样品中BHA（或BHT）的峰高或面积；一标准使用液中BHA（或BHT）的峰高或面积：hs
V注入色谱样品溶液的体积或面积；待测样品定容的体积，mL；
V、一注入色谱中标准使用液的体积，mL；一标准使用液的浓度，mg/mL。
中华人民共和国卫生部1996—06—19批准（1）
1996—09—01实施
GB/T5009.30—1996
X=m,×1000
m,×1000
—食品中以脂肪计BHA（或BHT）的含量，g/kg；式中：Xi—
-待测溶液中BHA（或BHT）的质量，mg；mr
一油脂质量（或食品中脂肪的质量），g。结果的表述：报告平行测定算术平均值的二位小数值。7.4允许差
相对相差（BHA、BHT）≤15%。
7.5其他
BHA、BHT气相色谱图：
气相色谱参考条件：
（2）
色谱柱：长1.5m，内径3mm玻璃柱，10%（m/m）QF-1的GasChromQ（80~～100目）。
检测器：FID。
温度：检测室200℃，进样口200℃，柱温140℃。载气流量：氮气（N）70mL/min；氢气（H2）50mL/min；空气500mL/min。第二篇薄层色谱法（第二法）
8原理
用甲醇提取油脂或食品中脂肪的抗氧化剂，用薄层色谱定性，根据其在薄层板上显色后的最低检出量，与标准品最低检出量比较而概略定量，对高脂肪食品中华人民共和国卫生部1996—06—19批准1996—09—01实施
GB/T5009.30—1996
中的BHT、BHA、没食子酸丙脂（PG）能定性检出。9试剂
以下试剂均为分析纯。
9.1甲醇。
9.2石油醚（30～60℃）。
9.3异辛烷。
9.4丙酮。
冰乙酸。
正己已烷。
二氧六环。
硅胶G：薄层用。
聚酰胺粉：200目。
9.10可溶性淀粉。
BHT、BHA、PG混合标准溶液的配制：分别准确称取BHT、BHA、PG各10.09.11
mg，分别用丙酮溶解转入三个10mL容量瓶中，用丙酮稀释至刻度。每毫升含1.0mgBHT、BHA、PG，吸取BHT（1.0mg/mL）1.0mL、BHA（1.0mg/m1)、PG（1.0mg/mL）各0.3mL置同一5mL容量瓶中，用丙酮稀释至刻度。此溶液每毫升含0.20mgBHT、0.060mgBHA、0.060mgPG。9.12显色剂：2，6-二氯醒-氯亚胺的乙醇溶液（2g/L）。10仪器
减压蒸馏装置。
10.2浓缩瓶具刻度的尾管。
10.3层析槽
24cm×6cm×4cm;
b.20cm×13cm×8cm。
10.4玻璃板：5cmx20cm、10cm×20cm。10.5微量注射器：10μL。
11分析步骤
11.1提取
11.1.1植物油（花生油、豆油、菜籽油、芝麻油）：称取5.00g油置10M1hw塞离心管中，加入5mL甲醇，密塞振摇5min，放置2min，离心（3000～3500r/min）5min，吸取上层清液置25mL容量瓶中，如此重复提取共五次，合并每次甲醇提取液，用甲醇稀释至刻度。吸取5mL甲醇提取液置一浓缩瓶中，于40℃水浴上减压浓缩至0.5mL，留作薄层色谱用。11.1.2猪油：称取5.00g猪油置50mL具磨口的锥形瓶中，加入25ml甲醇，装上冷凝管于75℃水浴上放置5min，待猪油完全溶化后将锥形瓶连同冷凝管一起自水浴中取出，振摇30S，再放入水浴30S；如此振摇三次后放入75℃水浴，使甲醇层与油层分清后，将锥形瓶连同冷凝管一起置冷水浴中冷却，猪油凝固，甲醇提取液通过滤纸滤入50mL容量瓶中，再自冷凝管顶端加入25mL甲醇，重复振摇提取一次，合并二次甲醇提取液，将该容量瓶置暗处放置，待升至室温后，用甲醇稀释至刻度。吸取10mL甲醇提取液置一浓缩瓶中，于40℃水浴上减压浓缩至0.5mL，留作薄层色谱用。11.1.3食品（油炸花生米、酥糖、巧克力、饼干）：按6.2测定脂肪的含量，并称取约2.00g的脂肪，视提取出的油脂是植物油还是动物性脂肪而决定提取中华人民共和国卫生部1996—06—19批准1996—09—01实施
GB/T5009.30—1996
方法。可按11.1.1或11.1.2操作。11.2测定
11.2.1薄层板的制备
11.2.1.1硅胶G薄层板：称取4g硅胶G置玻璃乳钵中，加10mL水。研磨至粘稠状，铺成5cm×20cm的薄层板三块，置空气中干燥后于80℃烘1h，存放于干燥器中。
11.2.1.2聚酰胺板：称取2.4g聚酰胺粉，0.6g可溶性淀粉置于玻璃乳钵中，加约15mL水，研磨至浆状铺成10cm×20cm的薄层板三块，置空气中干燥后于80℃烘1h，置干燥器中保存。11.2.2点样
11.2.2.1用10μL微量注射器在5cm×20cm的硅胶G薄层板上距下端2.5Cm处点三点：标准溶液5μL、样品提取液6~30μL、标准溶液5μL。11.2.2.2另取一块硅胶G薄层板点三点：标准溶液5μL、样品提取液1.5~3.6L、加标准溶液5μL。
11.2.2.3用10μL微量注射器在10cm×20cm的聚酰胺薄层板上距下端2.5cm处点：标准溶液5μL，样品提取液10μL，加标准溶液5μL，边点样边用吹风机吹干，点上一滴吹干后再继续滴加。11.2.3展开
11.2.3.1溶剂系统
硅胶G薄层板：正已烷-二氧六环-乙酸（42+6+3），异辛烷-丙酮-乙酸（70+5+12)。
聚酰胺板：
a.甲醇-丙酮-水（30+10+10）；b.甲醇-丙酮-水（30+10+12.5）；C.甲醇-丙酮-水（30+10+15）。对甲醇-丙酮-水系统，芝麻油只能用a、菜籽油用b，食品用c。展开系统中水的比例对花生油、豆油、猪油中PG的分离无影响。将点好样的薄层板置预先经溶剂饱和的展开槽内展开16cm。11.2.3.2展开
11.2.3.2.1硅胶G板自层板槽中取出，薄层板置通风橱中挥干至PG标准点显示灰黑色斑点。即可认为溶剂已基本挥干，喷显色剂，置110℃烘箱中加热10min，比较色斑颜色及深浅，趁热将板置氨蒸气槽中放置30S，观察各色斑颜色变化。
11.2.3.2.2聚酰胺板：自层析槽中取出薄层板置通风橱中吹干，喷显色剂，再通风挥干，直至PG斑点清晰。11.2.4评定
11.2.4.1定性
根据样品中显示出的BHT、BHA、PG点与标准BHT、BHA、PG点比较R值和显色后斑点的颜色反应定性。如果样液点显示检出某种抗氧化剂，则样品中抗氧化剂的斑点必须与加入内标的抗氧化剂斑点重叠。当点大量样液时由于杂质多，使样品中抗氧化剂点的R值略低于标准点。这时必须在样品点上滴加标准溶液作内标，比较R值。表1BHT、BHA、PG在薄层板上的最低检出量、R值及斑点颜色薄层板
硅胶G板
中华人民共和国卫生部中996人06共和9准主部聚酰胺板
1996—09—01实施
GB/T 5009.30—1996
抗氧化剂
最低检出量
色斑颜色
桔红→紫红
紫红→蓝紫
灰→黄棕
最低检出量
注：PG在硅胶G板上定性及半定量不可靠，有干扰且R值太小，须进一步用聚酰胺板展开。
11.2.4.2概略定量及限度试验
根据薄层板上样液点抗氧化剂所显示的色斑深浅与标准抗氧化剂色斑比较而估计含量，如果在11.2.2.1条下的硅胶G薄层板上，样品中各抗氧化剂所显色斑浅于标准抗氧化剂色斑，则样品中各抗氧化剂含量在本方法的定性检出限量以下（BHA、PG点样量为6μL，BHT点样量为30μL)。如果在11.2.2.2条下的硅胶G薄层板上，样品中各抗氧化剂所显色斑的颜色浅于标准抗氧化剂色斑，则样品中各抗氧化剂的含量没有超过使用卫生标准（BHA、PG点样量为1.5uL，BHT点样量为3.6μL）。如果样品点色斑颜色较标准点深，可稀释后重新点样，估计含量。
11.3计算
式中：X2-
mg×1000
×Dx1000×1000
样品中抗氧化剂（BHA、BHT、PG）以脂肪计的含量，g/kg；-薄层板上测得样品点抗氧化剂的质量，ug；供薄层层板用点样液定容后的体积，mL；-滴加样液的体积，mL；
样液的稀释倍数；
定容后的薄层层析用样液相当于样品的脂肪质量，g。表2所示样品中各抗氧化剂定性检出限度抗氧化剂
检出浓度mg/kg
油炸花生米
巧克力
12原理
第三篇
比色法（第三法）
样品通过水蒸气蒸馏，使BHT分离，用甲醇吸收，遇邻联二茴香胺与亚硝酸钠溶液生成橙红色，用三氯甲烷提取，与标准比较定量。13试剂
13.1无水氯化钙。
中华人民共和国卫生部1996—06—19批准1996—09—01实施
GB/T5009.30—1996
13.2甲醇。
13.3三氯甲烷。
13.4甲醇（50%）。
13.5亚硝酸钠溶液（3g/L）：避光保存。13.6邻联二茴香胺溶液：称取125mg邻联二茴香胺于50mL棕色容量瓶中，加25mL甲醇，振摇使全部溶解，加50mg活性炭，振摇5min，过滤，取20mL滤液，置于另一50mL棕色容量瓶中，加盐酸（1+11）至刻度。临用时现配并避光保存。
13.7BHT标准溶液：准确称取0.050gBHT，用少量甲醇溶解，移入100mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度，避光保存。此溶液每毫升相当于0.5mgBHT。13.8BHT标准使用液：临用时吸取1.0mLBHT标准溶液，置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，避光保存。此溶液每毫升相当于10.0μgBHT。14仪器
14.1水蒸气蒸馏装置。
14.2甘油浴。
14.3分光光度计。
15分析步骤
15.1样品处理
称取2.00～5.00g样品（约含0.4mgBHT）于100mL蒸馏瓶中，加16g无水氯化钙粉末及10mL水，当甘油浴温度达到165℃恒温时，将蒸馏瓶浸入甘油浴中，连接好水蒸气发生装置及冷凝管，冷凝管下端浸入盛有50mL甲醇的200mL容量瓶中，进行蒸馏，蒸馏速度每分钟1.5～2mL，在50～60min内收集约100mL馏出液（连同原盛有的甲醇共约150mL，蒸汽压不可太高，以免油滴带出），以温热的甲醇分次洗涤冷凝管，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。15.2测定
准确吸取25mL上述处理后的样品溶液，称入用黑纸（布）包扎的100mL分液漏斗中，另准确吸取0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mLBHT标准倒流液（相当于0，10,20,30，40,50μgBHT），分别置于黑纸（布）包扎的60mL分液漏斗，加入甲醇（50%）至25mL。分别加入5mL邻联二茴香胺溶液，混匀，再各加2mL亚硝酸钠溶液（3g/L），振摇1min，放置10min，再各加10mL三氯甲烷，剧烈振摇1min，静置3min后，将三氯甲烷层分入黑纸（布）包扎的10mL比色管中，管中预先入2mL甲醇，混匀。用1cm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长520nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。16计算
m×1000
兰×1000×1000
式中：X——样品中BHT的含量，g/kg；一测定用样液中BHT的质量，μg；ms
m6—样品质量，g；
Vi蒸馏后样液总体积，mL；
V2测定用吸取样液的体积，mL。结果的表述：报告算术平均值的二位有效数。中华人民共和国卫生部1996—06—19批准·（4）
1996—09—01实施
GB/T5009.30—1996
7允许差
相对相差≤10%。
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准第一法由江苏省卫生防疫站负责起草；第二法由卫生部食品卫生监督检验所、武汉市卫生防疫站、邯郸市卫生防疫站负责起草；第三法由上海市卫生防疫站负责起草。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫生部1996—06—19批准1996—09—01实施
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。