【国家标准(GB)】 蜂蜜中泰乐菌素残留量测定方法 酶联免疫法

ICS 67. 180. 10
中华入民共和国国家标准
GR/T18932.272005
蜂蜜中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法
Method fnr thc determination of tylosin resldue in honeyEuzyme-linked immunosorbentassaymethod2005-02-04发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2005-08-01实施
G3/T18532本部分的州录A为等料生附景、本部分由中华人民共和国森皇出人境骏变局提山，年部分由中华全国供销合性总社旧口。本部分起草单检：中华人民共和国案岛出人境检验检疫员本部分主要起节人，庞国考.代宝连、张进杰、肖抛改。本部分系首次发布的国家标证，GR/T 18932.27—2005
1范困
睡蕾中泰乐菌素残蜜量测定方法酶联免疫法
GT3/T19932的本部分现是了频康中泰%案案惑解长临账免度测定方次。本部分适用一蜂察中泰乐荣实残而是的洲定.本部达检限来乐座客为
2规范性引用文件
fA/T 18932.27—2005
下列文件中的条款追过GB：T1S32的本部分的引用成为本部分的条款：H注期的引用义，其随后所有的够改并（不包括基误的内弃）或修订版与同：本部分，然前，够谢根据本部分这感议的各方研究使用过件量新版本，凡是不的用件，量新版本用部分
H/137测试方法的精落货通过实验宽间认验能定标准测诚大法的五现炸和可现性(tT G373—193,n TS() 5725, 10R1)GBT552分析实收室用木规格试克达（8682—102.ne41)56：1993原理
试样中我留的案乐的系于试剂盒的泰乐当素降标记物共间竞争幸乐虚素抗体，形波的酬标记抗原件灵合物与显色剂发牛反应、用海标仪则吸光度，状期吸光度行击试托户泰乐豪的含战：4剂和材料
4,1激乐前案试剂盘：
4.1.96孔板，12条3孔
4，1,之来乐声素标证游液，
4.1.3标准和详品级冲弃离：浓缩液4.1.4来闲阻标物
4.1.5醇标记物缓池落液：下载标准就来标准下载网
4.1.6洗板袭液：浓箍，
4.1.7显色剂，
4. 1.8反虚停止滚。
4.2纽冲释获：将松准可样品维冲游液(1，,3)拆乐苗款试剂盘（4.1既定的比例用水都择混匀备币
4.3李乐菌素标准二作溶液：根据东乐菌求试剂金的线性范国用筛严的经冲中溶液.1.2)将态乐萄素标落被（1.1.2)稀成不浓度（g/L的标筛下作率液，每次测均应现配我用：4.4牵乐菌紫版标记物率液：根据泰乐菌求式盘中说明.用度标记物漫冲落液（4，，3)将泰乐南东响标记物（4..1)落解，混勾法备爪4.5洗板.1.作涨浓：物洗板猝波(4.1.61按茶乐菌索试剂盆中规定的比例月水释释.泥勺后各月。4.6水，GH/182规定的一级水。
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5仅器
5.1酵标.
5.2道格减器，501300
5.3单道移盐ul.~50l100l.-1c.2mL~Jm5.4液体能匀能：
5.5离心机
5.6准射述基警：31..并带有孔径为0.45的水用针次式过膜5.7具表试普:10 m...20 raL.
6试样的制备与保存
6.1试样的制寄
对无结品的实验索品，将其概排多，对有结品的实验家样品在案代的请况下，胃下不超过的水裕中海典、报离，待样品全部融化后搅匀，降邮益套，分出作为讼，到备乐的试样留下作品顺中，指，并加以称识。6.2试样的保存
将样品于究温下保存
7分析步骤
7.1 提职
称取1诚样，精确到0c1.2ml.真来试管中.m人m浮饿（.2)于体能器快连凝！mim，便试样完全清，以000/nm驾心[0后，取适盘的单品清没注影过泄器过储年！.的异塞试骨中，快研际仪测定，北案患需整系敏为。7.2测定条件
以下所为偿作虚在20~24℃案下达行。7.2.1准标仪测定条件.牌标仪测实波长为45Cnm：7.2.2人，洗板东牛，洗涤次效上次以上，料次注术量为25UrE7.2.3慈与拍索试判盒中所有剂的流度均应回所至室益（2%~21方可使用7.2.4将测定端的微孔板（4.1.1)备齐并括人微孔架上，记录标布改样品产微-1.架上的立肾（模板图
7. 3剐定
测究中蒙收不成的试剂和样品溶报片应更换级头：7.3.1分去吸取3>1.希乐菌索标准工作落液<1.3)杆品溶液等舒，报按板图世依次加入各自能微孔底部
7.3.2分别吸取30u泰乐函素幅标记物落（4.1)于一个做底部.然后用村口膜密孔口以防穿液挥发，持做孔版在台面上以医用运动方式混么后，于~少4T避光释存min。了.3.3鲜出引中的被件，将微孔架反扣在吸水纸上友怎拍打，以除会礼中过多的滴，伯不能使微孔于渠，然后，立即用洗板工作接较1.5）接7.2.2要求进法极，每次开云供板溶激行，均应将微礼架反在吸水纸止区系拍打，以除大f中注多的独，作不能使做化焕，7.3.4函速加人32.款色别剂11.1.71每一个微孔底部.然后，持微板在台而上以两再运动方式今后，避光育m。
7.3.5过座如人11.反度存小（4.1.8)于每=个微孔底部然后持最孔板在作函上以医质运效方式混匀后，将缴孔果资于海标仅户，在.wam处通草及光度（加人反应停止液后点在nin内资收2
吸光鹿？。
7.4平行试验
按以上步张，对同一标准，同一样品整液均应进行平行试验测定。7.5空白试噬
除不称取试样外，均按上逆步驱进行了,6监控试照
次测定与库做一个添如索乐菌案标推约显色利样品.日果计算
GA/T18932.27—2005
交半对数尘标纸上，以吸光成值光拟生标（），亲乐商素标准工作咨股浓度（吨/1.)为情坐标，绘制标准工作由线，从标准工作由裁上将息试作中相应的券与当案浓度后，书果接公式（）十算：X-c.V.1000
式中：
X—试样中蒙乐率我留，单位为微点年十克(g/kv)：从标术作统上得到的试样素乐菌求银度，单空为微克每于）：详品落液的体积，年位为寇无注：计单结呆应打称空户节，
9确证试验
如测样牵源菌案残留景的火于检白限时，应用1C-MSMS伙进行确证。10精密度
本部分的精案度致据是传照GB16375能规定确定的·其互复性和下现长的值尼以S5长的可信划采让薪。
10. 1血复性
在重性事件下，蜂蜜中泰乐菌索的青车1c%/kg~12.p/k范带以，我的院次迪文测试结果的跑对差值不超过承复限（），术前的年复性限按力程式（2)计算：Ig r 1. 75 n 1g wt -. 1. 75a 9.-----( 2)
两究制定使的三均值，单资为诚克4下克（\g/kg。如果益起过再复性限.应个产试给结果并重新完感两次单个试验拍测定10.2再现性
在再现以条件下，蜂密中泰冻商案的含量在10.0产多/U.“g/范用时，映的两次独立测试结果的绝对禁值不,追运再现性（R)，举部分的其规性限接方式(3)计觉：K = 0. 121 7 2 --- 1.. 7*7 6+r
两次定值的平均值.单位为微克每干充（gkr)，-(3)
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(资料性研录》
本方法中态示前系添加随度必国收率的试能息据：在证为13.0g/k时.均可收率为$7.21%在涨划量为33.0ug/kg时，平均可收率为[62.53%在添订量为5:1./k时，平均收率为97.80%在1量为135.0g/kg时，叫收率为104.35%。
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