【国家标准(GB)】 蜂蜜中四环素族抗生素残留量测定方法 酶联免疫法

ICS E7.180. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T18932.2B—2005
蜂蜜中四环素族抗生素残留量测定方法酶联免疫法
Method for the determination of tetratyrlins anlibiolies residues in honey--Enzyme-linked immunasorbent assay methnd2005-02-04发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准花管理委员会
2005-08-01实施
GB/T1852的本部分的期录A为资料性附录.本部分由中华人民共和国案空岛出人境检验控将高振山。本部分由中华伞国拱销作总社归口，本部分起草单位：中华人民共和国垦与出人流检龄检疫店本带分主要概草人，庞芳，付宝遵，张进杰，凸艳受。本部劳系首次发布的国家标准。GB/T18932.28—2C05
1范田
GB/T1B932.28—2005
蜂蜜中四环素族抗生素残留量测定方法酶联免短法
CB/T1932的本部分定了断盗中日环索族坑牛素残南遗等改免旋测定方法。本部分适于群速中国环索族抗生求戴风或的测定本部分的方法按出限，四环求族抗生素为15.00g/k。2规范性引用文性
下列义件中的条款通短B/13932的个部分的引用而成为本部分的条款。凡后注口期的引用文件，其随后所有的格改单（不有括缺误的内奔）成或送订版均不于本部分，然而，或励报培本部分达应协议的方世究尺含可使用这些文件的最新短木，凡是不让期的非用2件，其最新版木用十求B/工379测证方运的带率理通过实验室间试验确定怀消测试方法均年规性和再现件(GB/T$$79—1986,nce15O 1725.1981)GR/TS632分析实验室用水规格和实验方法(GB/T6682—1592,:S0)696：1937(行13/T1893228蜂中上毒素、四环衰、金毒求、强力举京残留量的测定法液相色诺中族质诺
3原理
试中因药川环素选抗生示与缴孔板中结合的四环索燃抗生案共同竞争叫环素滤优生案抗休在萨标记场的存币下，成的酶标迁抗原抗达复今物与显色剂发生反迹，用标仅划定账光度，根据吸光度值媒出试样户四环素族抗生索的舍量。4试剂和材耗
4.1四环素族抗小其试剂盒
1.1.1$6礼板.12条8孔。
4.1.2四环素谈抗生标准液：
4.1.3四环本旋抗牛专伉休率液，4.1.4可环素族抗生实有标证物落波。4..5恶质：
4.1.6显色剂.
及库停亡被。
4.2酸二氢钠NaT,F，2H)：价缴纯4.3酸氢钠Na,I)·2H，价级纯。4.4氯化钩：优级纯。
4.5吐温2c，升析实.
4.6醛膜益冲略：H7.1.分则取0.62%能酸-氢钠（4.3).1.7.1磷酸氢二购(4.3)和\氯化物（4.1)于1m1,中，在pTI计工湖节溶液pH=7.4。1
GB/118932.28—2005
4.7洗板降渡：PH-7,2~7.4。分别取0.(2R磷酸-氢钠(4.2)、5.73R磷酸氢二钠(4.3)利9#氯化钢4.4)于1UUUmL中，再期1mL.温（1.≤）,在pH计上调节窄微H=7.27.44.8四环索族抗生紧质标准工作旁液：根据四环旗抗生索试剂盆（.1)的裁性拖州，用空白烯续样品据取液将四环索族抗索标准落波(4.1.2)拨11进行稀释成同依度（以/kg)的标难工作溶根。邦改测定用的标准工作游液均应现配现用。4.9水：CB/Te682热定的--级水，5器
5.1酶标仅
5.2道移液器：50~433，
5.3单道格疫器，5μl.--50l.,100L~1.我2m~1cmE5.4滋件根为器
5.5超声波水浴
5.6范射过滤器：2ml.-5mL，并带有孔起为.45min的水相纤头或过滤膜。5.7只蜜试管：IcmL.50ml..
5,8JI :测量糖虚±U. 02;
6试样的制备与保存
6.！试样的制备免费标准下载网bzxz
无结品能实壁完样品将其携拌均寸。对有结品的实始究婵品，在密闭的情况下，置不超过60的水浮中置热、系获.待价全部做化后携匀，冷却至家温.分出（5k只作为计样。制各好的试样胃于品瓶中，密封并加以标部
6.2试样的保存
路详已于率源下架存。
7分折步票
7.1提取
称取1g试样，精确到n.018，置于50ml.H塞试普.剂人10ml.磷醛盐绥冲落液（1.6于体混勾然三快连混创1min·使试样完全解：加入9ml.碟酸盐缓冲游凝后，等试管益十妞声波水浴中超市m取出摇，用计点过战器将适量的样品落液过诺室0，且举试，供研标仪测定。此游获稀评系效为>0。
7.2别定条件
以下所有禁作宽在20-均！室温下进行，7.2.1醇标仪函定案件：醛标仪测定被长为am7.2.2人工涉板象件：洗漆次数工次以上、每次性水量为253mI7.2.3四环索族瓦剂盒中所有试剂的益及因度向至案温：2(价~24)后力可使书。7.2.4、将测定需用的缴孔长（4.1.1)各并片拥人微孔架上，记示标准及性品竺在缴孔就的检留（模板图
7.3测定
测定中吸收不同的试剂和单品落液时原更换吸头7.3.1分别收取5C.四坏族标准J作减：4.%)和扫品滑锻等按模恢困位骨依次如人各自的微孔底部。
7.3.2吸取5LmL四环来族抗本溶（4.1.3)十个敏孔底部，热后用村口膜密时孔口以防游液择GB/T 18932.28—2005
发。持做孔板在台面上以出周运动古式涯欠府，20%:～21℃避光孵育60n，7.3.3慢小礼中的液体，将微孔架反打在吸水活上反复拍打，以除去孔过多的残被（但不船使激礼十焕），然后，文邸用选板浮波（4.71按7.2.2要求进行洗检：每次车去洗板落滤后，均应特微几渠反扣在吸水缺上反互拍打，以除去孔中过多的惑获归不能使激礼十燥。7.3.4起连加人100口环素炼标记物落波（4.1.1）于每一个微孔底音，然店，持微孔板在面上以圆周运款力式混勾后，十20~-24避光购育15min。7.3.5按7.3.3求单复操作。
7.3.6退速加人.基页(1,1.5)相50品色剂（4.-.5)于每一入微孔能部感片持微孔我车台面上以圆周运方式混后，下2℃℃--24光厚15i:1。7.3.7迟速加人100反应降止4.1.7)于每一～微孔底部，然后，持微五技在台而以再运动力式混后等微孔架晋于醛标仪中，准4m处测量盟光度（加入区应停止浓后成在的mn内读取吸光度）。
7.4平行试验
投收上步露，对间一标准同样品溶策均应进行平行试验测定：7. 5空自试险
除不称收试样外，与接上述步骤逛行。7.6监控试验
每次测是动应傲：个给加四环索截抗索标准的空白样品，8结果计算
在半对数生标纸上，以吸光废怕均纵坐标（环），以述索模抗生意标准工作落液浓度（kg）为描标，绘制标准1作曲载。以标准1性战一得试样中扫应的四环素族机牛系试度片，结果按公式（！）计算：
X=ricc
武市：
x—中四环亲族抗家载留量，单位为微克每克（/kg）C-以标确工作世线上得到的试样中四环索族抗生素汰应，单位为微克每千克注：算清果立扣案空白估，
9确证试踪
如测样品牛配坏素族光生案变尚量的值大于检出限时虚用L-MMS达过行确证.10精密度
木部分的带险数据走按照（/T379的规定确定为.其中复性和再现性的值是以的可估度计解，
10,1重氢性
在互复性录件下.整资中川环泰旅抗生君的含量在1..GC/kg--200.00Pg/kg范用时，续得的两次独立测试结果的绝对差伯不超让重复性限（），本部分的重复生限按疗厘式<2)计算：gr1.1239 lgm1.421 2
GB/1:18932.28—2005
我中：
——两次定值的平均值，单位为微克每千克/。如果差值超过重复评限、应含产试验销果并函新先成两次单·个试验的测定：10.2再现性
在再现性条件下蜂蜜四沃离娱抗生宽的含量在[/KD./kg范回时，获得的两软猫立谢后站果的绝对差值不趋过再现性0. 095 9m + 1.474 5
两次副定值的平步值，单位为微点每千克明4
附录A
(资料性附录）
本力法中训环载旋抗生素添划浓度及回收率的试验数据，在添加量为15.00产/k时，的回收率为99.0收.在添50/时平收率为95.9%：
在添划良为g/kg服，平均原女本为88.15%在加量为200.GGg/k时.平均收率为1U7.%GD/T18932.28—2005
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