【国家标准(GB)】 SPF鸡 试管凝集试验

GB/T 17999. 8--1999
用血清平板凝集试验监测鸡白痢沙门氏菌感染，结果难以判定时，可用试管凝集试验(TA)进行复检，为此本标准规定了 SPF鸡试管凝集试验。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法。本标准为《SPF鸡试管凝集试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分：红细胞凝集抑制试验；
GB/T 17999.1—1999
GB/T 17999. 2—1999
GB/T 17999.3—1999
GB/T 17999. 4--1999
GB/T 17999.5—1999
GB/T 17999. 6--1999
—1999
GB/T 17999. 7-
GB/T 17999.9—1999
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF鸡
SPF 鸡
血清中和试验；
血清平板凝集试验；
琼脂扩散试验；
酶联免疫吸附试验；
胚敏感试验；
鸡白痢沙门氏菌检验；
间接免疫荧光试验。
本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位：中国兽药监察所、农业部实验动物中心。本标准主要起草人：张学琴、陈德威、赵立红。90
1范围
中华人民共和国国家标准
SPF鸡试管凝集试验
SPF chicken-Tube agglutination test本标准规定了试管凝集试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。GB/T 17999.8—1999
本标准适用于SPF鸡感染鸡白痫沙门氏菌或鸡伤寒沙门氏菌后的抗体监测。2原理
固血清平板凝集试验，亦是细菌性抗原与相应的抗体结合后，在适量电解质参与下，经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象，只是结果判定以凝集价表示。3试剂和材料
3.1抗原：试管凝集试验用鸡白-鸡伤寒抗原（含菌10亿/mL）。3.2阳性、阴性血清。
3.3被检血清。
3.40.5%石炭酸生理盐水：
石炭酸５g；
氯化钠8.5g；
蒸馏水1000 mL;
混合溶化，6.897Pa20min消毒备用。3.5常规血清学试验用品。
4操作程序
4.1每份被检血清需要5支小试管（口径8mm~10mm）。第1管加石炭酸生理盐水1.8mL，其余管各［m
4.2第1管加被检血清0.2mL，与石炭酸生理盐水混匀（使成1：10稀释）。取1mL移至第2管，混匀后连续倍比稀释至第4管，最后从第4管内吸出1mL弃去。如此各管血清最后稀释依次为1：20，140,1:80,1:160,1:320.
4.3各管加入抗原液1mL。
4.4振荡混匀后，置37C感作24h，观察结果。4.5每次试验须设三种对照各一份。4.5.1抗原对照：在试管中加抗原液1mL，再加0.5%石炭酸生理盐水1mL。4.5.2阳性血清对照：阳性血清稀释至原来效价，每管加入抗原液1mL。4.5.3阴性血清对照：操作方法同被检血清。4.5.4全部试管振荡后，置37℃24h后移入4℃～8C冰箱过夜，使结果更易判定。4.6结果观察
国家质量技术监督局1999-11-10批准2000-04-01实施Www.bzxZ.net
GB/T 17999.8—1999
4.6.1从4℃～8℃冰箱取出试管架，暂不振动试管。4.6.2轻轻取出每支试管，先观察试管内上清液和管底凝集物，再轻振管底，使凝块从管底升起，最后按液体清浊、凝块大小记录。
4.6.3观察结果时应首先观察抗原对照与阴性血清对照，均应呈“一”（即不凝集），阳性血清对照呈不同程度凝集，表明试验可靠。
4.6.4凝集结果判定见表1。
表1试管凝集结果判定
试管所见
细菌全部形成凝块，上层液完全透明大部分细菌形成凝块，上层液透明度达75%约50%细菌形成明显可见凝集块，上层液透明度达50%仅有少部分细菌形戒小凝块，上层液透明度达25%无凝集块，液体均匀混浊（有部分菌体因静置而沉于管底，轻轻播后细菌如云烟状升起，但很快消失）4.6.5效价以呈现“十+”凝集试管的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。5结果判定
凝集价≥1：80为阳性；凝集价为1：40为可疑；凝集价≤1：20为阴性。92
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